分裝凍存法凝血室內(nèi)質(zhì)控分析

彭賽亮

（廈門醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建 廈門 361021）

正常機(jī)體的凝血與抗凝血系統(tǒng)、血栓與纖溶系統(tǒng)處于動態(tài)平衡狀態(tài),一旦由于生理性或病理性因素導(dǎo)致此平衡狀態(tài)破壞，那么將出現(xiàn)較嚴(yán)重的后果。凝血檢驗(yàn)對于判斷機(jī)體凝血狀態(tài)以及出凝血疾病的診斷具有非常重要的意義,現(xiàn)在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都開展了凝血常規(guī)四項(xiàng)篩查：活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）、凝血酶原時(shí)間（PT 及 INR）、纖維蛋白原(Fg,含Clauss法Fg-C、PT演算法Fg-RP)及凝血酶時(shí)間（TT）。由于凝血檢驗(yàn)項(xiàng)目的試劑都是凝血因子等生物活性成分,目前還未能完全標(biāo)準(zhǔn)化，不同廠家試劑差異較大，故凝血檢查的質(zhì)量控制對監(jiān)測凝血結(jié)果的準(zhǔn)確性非常重要[1-4]。目前，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都采用商品化質(zhì)控血漿進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控,均為干粉質(zhì)控試劑，使用前用蒸餾水復(fù)溶，冰箱冷藏保存分次檢測,容易導(dǎo)致APTT、PT等凝血項(xiàng)目結(jié)果出現(xiàn)周期性波動，誤差較大。本文就室內(nèi)質(zhì)控品復(fù)溶后分裝凍存的質(zhì)控效能做了相關(guān)嘗試，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 沃芬IL(Instrument Laboratary)公司生產(chǎn)的ACL TOP700全自動血凝分析儀及配套試劑（APTT、PT、Fg-C 和 TT）和耗材。

1.2 檢測樣本及方法

1.2.1 批內(nèi)精密度檢測 吸取20份新鮮樣本的血漿，每份0.5ml，混勻后平均分裝10份，同時(shí)上機(jī)檢測常規(guī)凝血四項(xiàng)。

1.2.2 質(zhì)控品分裝與否檢測結(jié)果比較 取伯樂凝血質(zhì)控品（批號：78471質(zhì)控水平一，正常水平；78472質(zhì)控水平二，異常水平），分常規(guī)對照組、新配對照組和實(shí)驗(yàn)組檢測常規(guī)凝血四項(xiàng) （Fg同時(shí)檢測Fg-C：Clauss法；Fg-RP：演算法）。 常規(guī)對照組：按照說明書，配制兩個(gè)水平的質(zhì)控品各一瓶，每工作日檢測一次，連續(xù)檢測3次，每次檢測完置4~8℃冰箱冷藏保存；新配對照組：每工作日取同批號兩水平質(zhì)控品用蒸餾水分別新配一瓶檢測。實(shí)驗(yàn)組：按說明書一次性分別配制兩個(gè)水平的質(zhì)控品各10瓶，分別倒入無菌痰杯內(nèi)混勻后EP管分裝 （每管0.34ml），-20℃凍存，工作日兩水平各取一支檢測；三組樣本在每個(gè)工作日檢測常規(guī)標(biāo)本前均使用相同儀器及試劑同時(shí)檢測。

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)精密度檢測結(jié)果 結(jié)果均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 406-2012《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》,提示檢測系統(tǒng)的批內(nèi)精密度良好,見表1。

2.2 質(zhì)控品水平一各組檢測結(jié)果 三組的CV值均符合WS/T 406-2012標(biāo)準(zhǔn),但常規(guī)對照組各檢測項(xiàng)目的均值除Fg-C外與新配對照組及實(shí)驗(yàn)組均有顯著性差異,CV值除TT外均高于其它兩組,見表2。

2.3 質(zhì)控品水平二各組檢測結(jié)果 三組的CV值均符合WS/T 406-2012標(biāo)準(zhǔn)，但不同項(xiàng)目的組間差異不完全相同,見表3。

3 討論

凝血常規(guī)檢測是臨床常用血栓與止血篩查試驗(yàn)，常用于評估機(jī)體凝血狀態(tài)（如有創(chuàng)操作前及術(shù)前備查）、血栓與出血性疾病的檢測及療效觀察,也作為應(yīng)用抗凝藥或溶栓藥的監(jiān)測指標(biāo),對臨床疾病的診斷和治療有非常重要的作用。然而，凝血試劑還未標(biāo)準(zhǔn)化，不同廠家試劑差異較大，也容易受制備、運(yùn)輸、儲存及配制等諸多因素的影響，故凝血檢查的質(zhì)量控制對監(jiān)測凝血結(jié)果的準(zhǔn)確性非常重要。不同的實(shí)驗(yàn)室凝血質(zhì)控做法不盡相同，多位學(xué)者對不同質(zhì)控方法做了積極探索，魏國慶、李彬等研究使用多份患者血漿或獻(xiàn)血者血漿自配質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控監(jiān)測[5-8]，叢玉隆、劉華香、劉玉俠、錢厚明等做了利用日常標(biāo)本數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控的研究[9-12]；目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用商品化質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控監(jiān)測，質(zhì)控品多為干粉包裝，使用前需要用蒸餾水（1ml）復(fù)溶，單機(jī)單次用量在0.2～0.3ml，若一次沒用完一般置4～8℃冷藏分多次檢測。我們在平常質(zhì)控檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著復(fù)溶后冷藏時(shí)間的延長，APTT、PT及TT有升高的趨勢,Fg有下降的趨勢,而每次新配質(zhì)控品當(dāng)天的結(jié)果非常穩(wěn)定,但每次質(zhì)控都新配比較浪費(fèi)。因此，筆者將伯樂質(zhì)控品復(fù)溶分裝后-20℃凍存45d內(nèi)，每工作日檢測，比較不同處理方式質(zhì)控品凝血常規(guī)結(jié)果。

質(zhì)控水平一（正常水平）三個(gè)組的CV均符合WS/T 406-2012標(biāo)準(zhǔn)[2]，但是不同組間比較質(zhì)控效能不完全相同：其中實(shí)驗(yàn)組各項(xiàng)目與新對照組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；常規(guī)對照組與其他兩組相比，APTT、PT、INR 和 TT 都明顯偏高（P＜0.05），F(xiàn)g-RP明顯偏低（P＜0.05）；但 Fg-C 結(jié)果常規(guī)對照組與新配對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。并且，除TT外，常規(guī)對照組的CV值明顯高于其他兩組，提示其結(jié)果精密度相對較差，質(zhì)控效能相對較低。

表1 常規(guī)血凝四項(xiàng)檢測的批內(nèi)精密度

表2 質(zhì)控品水平一檢測結(jié)果

表3 質(zhì)控品水平二檢測結(jié)果

質(zhì)控水平二（異常水平）三個(gè)組結(jié)果的CV均符合WS/T 406-2012標(biāo)準(zhǔn),但是不同組間比較質(zhì)控效能不完全相同：實(shí)驗(yàn)組與新配對照組相比，PT、INR和TT差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);而APTT偏高（P＜0.05），F(xiàn)g-C 與 Fg-RP 偏低（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組與常規(guī)對照組相比，除PT、INR、Fg-RP差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）之外其他項(xiàng)目差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；常規(guī)對照組與新配對照組相比，除Fg-C外其他項(xiàng)目均差異明顯（P＜0.05）。并且，其Fg檢測CV值均明顯高于新配對照組，提示異常水平質(zhì)控品復(fù)溶后分裝凍存對Fg（Clauss法和演算法）檢測結(jié)果影響相對較大。

ACL TOP血凝儀能結(jié)合使用演算法和Clauss法檢測Fg，本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，IL配套質(zhì)控品及新鮮標(biāo)本的Fg-RP檢測值明顯高于Fg-C的值，但呈良好線性相關(guān)[14]，與IL配套質(zhì)控品及新鮮標(biāo)本不同,伯樂質(zhì)控品的Fg-C與Fg-RP檢測值很接近[13-14],但異常水平質(zhì)控品復(fù)溶凍存后存在PT與Fg-RP分離的現(xiàn)象,即與新配對照組相比，PT檢測結(jié)果無差異但Fg-RP明顯偏低,且TEa＞20%,超出WS/T40 6-2012標(biāo)準(zhǔn)[2]，不適合此項(xiàng)目的質(zhì)控。據(jù)程烽、宋曉萍、彭裕輝等[15-17]報(bào)道，當(dāng)Fg過高或過低、PT異常時(shí)兩者所測值有顯著差異，建議以Clauss法檢測為準(zhǔn)。

在實(shí)際檢測過程中我們發(fā)現(xiàn)：隨著質(zhì)控品復(fù)溶后冷藏保存時(shí)間的延長，APTT、PT（含INR）和TT值有增高的趨勢，F(xiàn)g結(jié)果有下降的趨勢;水平二質(zhì)控品容易產(chǎn)生白色絮狀沉淀，此時(shí)檢測Fg的值往往偏低，特別是Fg-RP顯著偏低，TEa＞20%，超出WS/T 406-2012標(biāo)準(zhǔn)[2]，與魏國慶等研究存在差異[5,8]，是否與我們復(fù)溶和分裝時(shí)沒有無菌操作或儲存溫度不夠低有關(guān)？

綜上所述，伯樂凝血質(zhì)控品復(fù)溶后分裝凍存（-20℃，≦45d）進(jìn)行常規(guī)凝血項(xiàng)目質(zhì)控，正常水平質(zhì)控品的質(zhì)控效能良好，優(yōu)于常規(guī)質(zhì)控方法；異常水平質(zhì)控品的質(zhì)控效能不低于常規(guī)質(zhì)控方法，但不能用于Fg-RP的質(zhì)控監(jiān)測；且分裝檢測方便易行，可有效減少實(shí)驗(yàn)誤差。