注射用替莫唑胺的制備及質量研究

趙硯榮　郭杰

[摘要]目的 探討生產高質量及穩定的注射用替莫唑胺處方及制備工藝。方法 通過枸櫞酸用量確定注射用替莫唑胺處方，通過配液溫度、活性炭用量和凍干工藝的考察，確定注射用替莫唑胺的制備工藝。結果 最佳處方為替莫唑胺（100 mg），甘露醇（600 mg），枸櫞酸（100 mg），聚山梨酯-80（120 mg），枸櫞酸鈉（235 mg），鹽酸（160 mg）。配制溫度控制在25℃以下，藥液采用鹽酸調節pH值至3.0～4.5，同時存放于15℃以下;最佳凍干工藝為制品在-40℃，預凍3 h;導熱油升溫至0℃，保溫64～80 h;導熱油升溫至15℃，保溫18～24 h;最終制品在35℃，保溫6～12 h。高效液相色譜法檢測141101、141102、141103樣品的含量分別為101.1%、100.8%、100.6%。141101和141103樣品在12個月長期試驗、加速試驗考察期間，本品在市售包裝下，有關物質略有增加，水分結果略有增大，但均在限度范圍內，其他各考察指標均沒有明顯變化;141102樣品在12個月長期試驗、加速試驗考察期間，市售包裝下，水分有所增加，但均在限度范圍內，其他各考察指標均沒有明顯變化。結論 以本品處方及工藝制備的替莫唑胺制劑，質量穩定，重復性好，可行性佳，適于工業化生產。

[關鍵詞]替莫唑胺;制備工藝;配液溫度;脫炭工藝;凍干工藝;質量研究

[中圖分類號] R979.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）10（c）-0035-04

[Abstract] Objective To explore the formulation and preparation process of Temozolomide for injection with high quality and stability. Methods The formulation of Temozolomide for injection was determined by the amount of citric acid. The preparation process of temozolomide for injection was determined by investigating the temperature of liquid mixing， the amount of activated carbon removal and the freeze-drying process. Results The best prescriptions were Temozolomide （100 mg）， Mannitol （600 mg）， citric acid （100 mg）， polysorbide-80 （120 mg）， sodium citrate （235 mg）， hydrochloric acid （160 mg）. The preparation temperature was controlled below 25℃， and the pH value of the liquid was adjusted to 3.0-4.5 by hydrochloric acid， and stored below 15℃ at the same time. The optimum freeze-drying process was that the product was pre-frozen for 3 hours at -40℃. The heat conducting oil was heated to 0℃ for 64-80 hours. The heat conducting oil was heated to 15℃ for 18-24 hours. The final product was kept at 35℃ for 6-12 hours. The contents of 141101， 141102 and 141103 samples were 101.1%， 100.8% and 100.6% respectively by high performance liquid chromatography. During the 12 months long-term test and accelerated test of 141101 and 141103 samples， the related substances increased slightly and the moisture content increased slightly under the market packaging， but all of them were within the limits， and the other indexes did not change significantly. During the 12 months long-term test and accelerated test， the moisture content of 141102 samples increased under the commercial packaging， but all of them were within the limit， and other inspection indexes did not change significantly. Conclusion The Temozolomide preparation prepared by the prescription and technology of this product has stable quality， good repeatability and good feasibility， which is suitable for industrial production.

[Key words] Temozolomide; Preparation process; The temperature of liquid; Carbon removal process; Freeze-drying process; Study of quality

替莫唑胺是一種新型的烷化劑類抗腫瘤藥物，具有較寬的抗腫瘤譜，可口服，易于透過血腦屏障[1]、安全、與其他藥物沒有疊加毒性、可用于對亞硝基脲耐藥的患者，目前認為脫氧核糖核酸（DNA）甲基化和錯配修復失敗是替莫唑胺細胞毒性的主要作用機制[2-4]。替莫唑胺由先靈葆雅公司開發，1998年首先在歐盟上市，1999年經美國食品藥品管理局（FDA）批準在美國上市[5]。主要用于治療新診斷的多形性膠質母細胞瘤，開始與放療聯合治療，隨后作為輔助治療;同時用于常規治療后復發或進展的多形性膠質母細胞瘤或間變性星形細胞瘤[6-7]。作為治療腦膠質瘤的一線藥物，替莫唑胺口服制劑存在惡心、嘔吐等副作用[8-9]，易導致藥物吸收不全。注射劑具有劑量準確，起效快等特點，適用于不便口服的患者。因此，開發替莫唑胺注射劑十分必要。本研究通過處方篩選、制備工藝研究，確定注射用替莫唑胺的處方和制備工藝，并對注射用替莫唑胺的質量進行考察，為注射用替莫唑胺的開發和大生產提供研究基礎和依據，現報道如下。

1儀器與試藥

1.1儀器與設備

GYHH12型液體灌裝加塞機（上海新旭發制藥機械有限公司），PZL10型軋蓋機（南京博健科技有限公司），LYO-10型冷凍干燥機（上海東富龍科技有限公司），Ultimate 3000高效液相色譜儀[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]，Aglient 1260高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司），XP56電子分析天平（0.001 mg）[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]，CPA225D電子分析天平（0.01 mg）[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]。

1.2試藥

替莫唑胺（江蘇奧賽康藥業有限公司，批號：140801），枸櫞酸（湖南華日制藥有限公司，批號：20140701），替莫唑胺對照品（江蘇奧賽康藥業有限公司，批號：140701），替莫唑胺雜質A工作標準品（江蘇奧賽康藥業有限公司，批號：20140802），替莫唑胺雜質B工作標準品（江蘇奧賽康藥業有限公司，批號：2014091801），替莫唑胺雜質C工作標準品（江蘇奧賽康藥業有限公司，批號：S14091101），替莫唑胺雜質D工作標準品（北京百靈威科技有限公司，批號：0024785），甲醇（強生科技有限公司，批號：L840P51、L840P57），己烷磺酸鈉（上海凌峰化學試劑有限公司，批號：2012022），冰醋酸（南京化學試劑有限公司，批號：13052310738、13090311396），二甲基亞砜（南京化學試劑有限公司，批號：150709360E）。

2方法與結果

2.1處方篩選的考察

根據TEMODARR說明書顯示制劑成品每瓶含替莫唑胺（100 mg），甘露醇（600 mg），L-蘇氨酸（160 mg），聚山梨酯-80（120 mg），枸櫞酸鈉（235 mg），鹽酸（160 mg）。其中L-蘇氨酸受美國Schering-Plough制藥公司專利[10]保護，因此實驗中選用常規輔料枸櫞酸[11]代替L-蘇氨酸，按處方配制藥液，采用鹽酸調節pH值至3.0～4.5，灌裝后進行凍干，考察性狀、pH值、復溶時間和有關物質等指標。

處方中加入L-蘇氨酸、枸櫞酸制備的樣品外觀均為白色疏松塊狀物，凍干前后pH值均未發生明顯變化;處方中枸櫞酸用量為100 mg時，成品復溶時間短、有關物質限度低及增長趨勢較緩（表1）。

2.2制備工藝的研究

2.2.1配液溫度的確定? 替莫唑胺溶液在低溫和酸性條件下穩定性良好;在堿性或高溫條件下不穩定[12-13]，因此本研究對酸性條件、不同溫度下的藥液進行穩定性考察。考察溫度為40、25、15℃，考察指標為pH值、有關物質及主藥溶解時間。溫度越高主藥溶解時間越短，溫度越低藥液的有關物質增長慢、穩定性好。因此，配制溫度控制在25℃以下，放置溫度控制在15℃以下，保證大生產時主藥溶解時間和藥液的穩定性（表2）。

2.2.2脫炭工藝的考察? 注射劑在配制時通常加入0.01%～0.50%的活性炭，以達到吸附熱原、雜質和色素的作用，同時活性炭也會吸附主藥，在研究過程中要關注活性炭對藥液含量的影響和對細菌內毒素指標的控制[14-16]。本研究在藥液中加入0.05%、0.10%、0.30%（W/V）的活性炭，攪拌15、30 min后進行過濾，考察藥液的性狀、pH值、含量及細菌內毒素。藥液中加入不同用量活性炭處理后，外觀及pH值無明顯變化，但藥液含量隨活性炭用量的增加而降低，工藝中不采用脫炭工藝，安全性方面采取加強對本品原輔料細菌內毒素的控制（表3）。

2.2.3凍干工藝考察? 本品在進行凍干工藝研究時參照了專利CN100346784C中提供的凍干工藝，同時在凍干曲線的制定上充分考慮處方組成、裝量、容器及凍干機的性能，對凍干曲線三個階段的關鍵參數及凍干制品凍融問題進行分析[17-19]，分別設計3種凍干工藝，考察制品的關鍵指標。凍干曲線3制備的注射用替莫唑胺質量最佳，因此本品的凍干工藝為：制品-40℃，預凍3 h;導熱油升溫至0℃，保溫64～80 h;導熱油升溫至15℃，保溫18～24 h;最終制品35℃，保溫6～12 h出箱（表4）。

2.3質量研究

2.3.1含量測定? 高效液相的色譜條件與系統適用性采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-己烷磺酸鈉溶液（取己烷磺酸鈉0.94 g，加0.5%冰醋酸溶液溶解并稀釋為960 ml，混勻，40∶960）為流動相;檢測波長為270 nm;柱溫30℃。理論板數按替莫唑胺峰計算≥6000。精密稱取適量的本品內容物，用流動相溶解并定量稀釋制成每1毫升中約含替莫唑胺0.1 mg的溶液，精密量取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取替莫唑胺對照品，同法測定，按外標法以峰面積計算。工藝驗證141101、141102、141103樣品的含量分別為101.1%、100.8%、100.6%。

2.3.2穩定性考察? 本品模擬上市包裝，對141101、141102、141103樣品開展了（25±2）℃、相對濕度（RH）（60±5）%條件下的加速試驗和2～8℃條件下的長期試驗，考察樣品性狀、pH值、有關物質和含量等指標。141101樣品在12個月長期試驗、加速試驗考察期間，市售包裝下，水分和有關物質有所增加，但均在限度范圍內，其他各考察指標均沒有明顯變化;141102樣品在12個月長期試驗、加速試驗考察期間，市售包裝下，水分有所增加，但均在限度范圍內，其他各考察指標均沒有明顯變化;141103樣品在12個月長期試驗、加速試驗考察期間，市售包裝下，水分和有關物質有所增加，但均在限度范圍內，其他各考察指標均沒有明顯變化（表5～10）。

3討論

通過枸櫞酸用量篩選，確定注射用替莫唑胺的處方;通過考察配液溫度、活性炭用量和凍干工藝，確定本品的制備工藝。根據確定的處方和工藝制備工藝驗證樣品并進行檢測，研究結果顯示，制備的注射用替莫唑胺在12個月穩定性試驗中質量穩定可靠，證實注射用替莫唑胺的處方及制備工藝良好，可行性佳，適于工業化生產。

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（收稿日期：2018-10-12? 本文編輯：劉克明）