炔螨特與苯丁錫混合使用對朱砂葉螨的最佳配比篩選

楊振國　謝道燕　達愛斯　羅雁婕

摘要：為篩選出對朱砂葉螨具有增效作用的炔螨特與苯丁錫混劑的最佳配比，以玻片浸漬法測定各配比混劑對朱砂葉螨的殺螨活性，并以共毒因子法和共毒系數(shù)法評價其增效程度。炔螨特、苯丁錫對朱砂葉雌成螨處理后24 h的LC50分別為435.38、93.26 mg/L，二者混劑的增效配比介于1 ∶0.09～0.83之間，SPSS擬合出其混劑的共毒因子（y）與混劑中炔螨特含量（x）的數(shù)學模型，為y=-1 231.14x2+1 616.29x-378.46（F=13.47，P=0.01，r=0.90），進一步確定其最佳的質量濃度配比為33 ∶17，該配比的致死中濃度（LC50）為102.90 mg/L，共毒系數(shù)為188.28，其對朱砂葉螨的毒力是炔螨特的4倍以上。炔螨特與苯丁錫以質量濃度比為33 ∶17混合表現(xiàn)出顯著的增效作用，具有一定的開發(fā)應用價值。

關鍵詞：朱砂葉螨;炔螨特;苯丁錫;農藥復配劑;共毒系數(shù);共毒因子;多作用機制;高效復配殺螨劑

中圖分類號： S482.3文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2019）19-0106-04

收稿日期：2018-07-09

基金項目：國家自然科學基金（編號：31560520）;云南省科技計劃重點新產品項目（編號：2015BB009）。

作者簡介：楊振國（1986—），男，云南硯山人，碩士，助理研究員，主要從事桑樹病蟲害防控研究。E-mail：zhenguoyang@qq.com。

通信作者：羅雁婕，博士，研究員，主要從事農業(yè)昆蟲與害蟲防治研究。E-mail：yanjieluo@126.com。

朱砂葉螨（Tetranychus cinnabarinus）廣泛分布于世界溫帶地區(qū)，是溫室的重要雜食性害螨之一，危害100余種作物，個體小、發(fā)育快、繁殖力強且易產生抗藥性等基本生態(tài)對策，使朱砂葉螨成為難以防治的有害生物之一[1-3]。目前，朱砂葉螨的防治仍以化學藥劑防治為主[4]，長期單一的或單一作用機制的化學藥劑防治致使害螨的抗藥性日益加重。為緩解害蟲害螨對單一藥劑的抗藥問題，目前主要趨向于開發(fā)農藥的復配劑[5-6]。將不同作用機制的殺螨劑混合使用或輪換使用，是延緩害螨抗藥性及其治理的重要手段，同時具有降低毒性和成本的作用，具有增效作用的復配劑不僅能夠降低用藥量，還能增強防治效果，更可以延緩害螨抗藥性[7-8]。因此，開展多作用機制的高效復配殺螨劑研究對害螨的防治及抗藥性治理具有重要意義。

炔螨特屬亞硫酸酯類殺螨劑，自1964年推廣應用以來，由于其具有殺若螨、成螨活性高、廣譜低毒、持效期長、對天敵無害、不容易產生抗性等諸多優(yōu)點，在農藥殺螨劑市場上經久不衰，現(xiàn)在已成為世界上使用范圍廣、生產應用大噸位的殺螨劑品種[9]，可用于防治二斑葉螨（T. urticae）、蘋果全爪螨（Panonychus ulmi）、 太平洋葉螨（T.[KG*2]pacificus）、 柑橘全爪螨（P. citri）等葉螨，但其害螨對炔螨特的抗性也有報道[10-14]。炔螨特對害螨主要是胃毒和觸殺，其主要作用機制是抑制線粒體Mg2+-ATPase，作用位點位于F0亞基部位，抑制線粒體呼吸作用，阻礙害蟲體內神經細胞線粒體功能的發(fā)揮，影響其呼吸作用及能量轉換[15]。苯丁錫是感溫型抑制神經組織的有機錫殺螨劑，主要起觸殺作用，對幼螨、成螨和若螨殺傷力較強，對螨卵的殺傷力不大，對有機磷、有機氯殺蟲劑有抗藥性的害螨無交互抗藥性[16]，可防治朱砂葉螨、柑橘葉螨、柑橘銹螨、蘋果葉螨、茶橙癭螨、茶短須螨等農業(yè)害螨[17-18]。苯丁錫的殺螨活性與溫度有直接的關系，當氣溫在22 ℃以上時，藥效增強;當氣溫在15～22 ℃以下時藥性降低;當氣溫在 15 ℃ 以下時，藥效較差，不宜在冬季使用[19]。對高等動物、鳥類、蜜蜂低毒，對害螨天敵捕食螨、食蟲瓢蟲、草蛉等較安全，但對魚類等水生生物高毒[20]。鑒于炔螨特與苯丁錫在殺螨機制上的差異性，研究二者不同配比混劑對朱砂葉螨的聯(lián)合作用，并篩選其最佳的增效配比，以期獲得一種多作用機制的高效復配殺螨劑。

1 材料與方法

1.1 供試螨類

朱砂葉螨采自云南省蒙自市桑園內，在智能人工氣候室內（26±1） ℃、RH 60%～80%、光周期14 L ∶10 D條件下，用蛭石盆栽四季豆苗飼養(yǎng)，擴繁后作為供試螨類。

1.2 供試藥劑

90%炔螨特，購自山東青島農藥廠;98%苯丁錫，由浙江華興化工有限公司提供。試驗前，稱取適量原藥置于容量瓶內，用丙酮充分溶解，并定容為10 000 mg/L母液，將其放入 4 ℃ 冰箱內保存?zhèn)溆谩６玖y定時，通過初篩試驗，選定5個死亡率介于16%～84%之間的濃度進行測定，用0.1%吐溫-80水溶液將母液稀釋成既定濃度作為毒力測定的供試液，并以0.1%吐溫-80水溶液作對照。

1.3 殺螨活性測定方法

試驗于2016年4—6月在云南省蒙自市草壩鎮(zhèn)進行，殺螨活性測定參照聯(lián)合國糧農組織（FAO）推薦的玻片浸漬法[21]。將朱砂葉螨雌成螨挑在貼有雙面膠的玻片上，在溫度（26±1） ℃、RH 60%～80%的環(huán)境下放置4 h，用雙目解剖鏡檢查，剔除死亡和不活潑的個體，記錄活螨數(shù)。將玻片粘有螨蟲的一端浸入供試液中5 s后取出，用濾紙將螨體周圍的藥液吸盡。每種濃度和對照處理120頭成螨，試驗重復3次。處理后同樣條件下培養(yǎng)，24 h后檢查害螨死亡情況。用毛筆輕觸螨體，以其螯肢不動者為死亡。

1.4 試驗設計

1.4.1 混劑增效配比的篩選

首先測定炔螨特和苯丁錫的致死中濃度（LC50），然后以各自的LC50劑量為基準，將2種藥液按其LC50藥液按體積比為10 ∶0、9 ∶1、8 ∶2、7 ∶3、6 ∶4、5 ∶5、4 ∶6、3 ∶7、2 ∶8、1 ∶9、0 ∶10混合，配制出不同比例的混劑，測定各組配比對朱砂葉螨處理24 h后的死亡率。用SPSS軟件經Duncans新復極差法比較各處理之間的效果差異，若某一配比組合的死亡率在統(tǒng)計上顯著大于2個單劑在LC50值時的死亡率，則表示該配比組合具有增效作用。另外，采用共毒因子（co-toxicity factor，CTF）法判斷其增效程度，當共毒因子比顯著大于20為增效作用;顯著小于-20為拮抗作用;介于-20～20之間為相加作用[22]。

共毒因子法（CTF）=（實際死亡率-預期死亡率）/預期死亡率×100。

1.4.2 混劑增效最佳配比的確定

參照王小藝等提出的方法[23]，以某一單劑在混劑中的含量為自變量x，其相對應的校正毒力比為因變量y，利用SPSS軟件進行數(shù)學模型擬合。一般其基本關系基本符合二次曲線方程y=ax2+bx+c[24]，再根據(jù)此方程求出y的極值和此時對應的x，即可得某配比時單劑的含量，從而求得最佳配比。

進一步確定最佳配比，則是對擬合方程計算的最佳配比及相鄰的配比進行混劑毒力測定，并求出共毒系數(shù)（co-toxicity coefficient，CTC）及增效倍數(shù)。共毒系數(shù)大于120為增效作用，小于80為拮抗作用，介于80～120之間為相加作用[25]。其共毒系數(shù)的計算公式如下（P為單劑A和B在混劑中的含量）：

毒力指數(shù)（TI）=標準藥劑LC50/供試藥劑LC50×100;

混劑的實測毒力指數(shù)（ATI）=標準藥劑LC50/混劑LC50×100;

混劑的理論毒力指數(shù)（TTI）=TIA×PA+TIB×PB;

混劑的共毒系數(shù)=ATI/TTI×100。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

所有試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析均采用SPSS 17.0軟件進行，各處理間的顯著性差異比較采用Duncans新復極差檢驗，毒力回歸分析用Finney概率值分析法。

2 結果與分析

2.1 單劑對朱砂葉螨的毒力

采用玻片浸漬法測定炔螨特、苯丁錫對朱砂葉螨雌成螨的室內毒力，其藥劑處理24 h的LC50值分別為435.38、93.26 mg/L;LC90值分別為867.49、242.16 mg/L（表1）。

2.2 混劑對朱砂葉螨的增效配比篩選

比較炔螨特與苯丁錫不同配比混劑對朱砂葉螨雌成螨處理后24 h的殺螨活性，結果（表2）表明，處理4～處理10的實際死亡率在0.05水平下顯著大于預期死亡率，表現(xiàn)為增效作用，其中處理7、處理8、處理9的實際死亡率顯著大于其他處理的實際死亡率，其實際死亡率分別為73.87%、75.29%、71.66%;同時以共毒因子法比較可知，處理4～處理10的共毒因子也顯著大于20，表現(xiàn)為增效作用，其中處理7和處理8的共毒因子分別為167.64和142.09，即處理7和處理8增效最明顯。因此，炔螨特與苯丁錫的增效配比介于 1 ∶（0.09～0.83）之間，且1 ∶0.31附近增效最明顯。

2.3 混劑的最佳配比模型擬合

采用SPSS軟件擬合混劑中炔螨特的含量與混劑對朱砂葉螨雌成螨的共毒因子間的數(shù)學模型，其模型為一元二次方程：y=-1 231.14x2+1 616.29x-378.46[F（2，6）=13.47，P=0.01，r=0.90]，該模型的方差分析結果表明，在0.01水平下，模型擬合度合格[F（2，6）>F0.01]，可以用于描述混劑中炔螨特的含量與混劑對朱砂葉螨雌成螨的共毒因子間的關系。采用求極值法獲得如下結果：當x為0.656 4時，y的極大值為152.02，即混劑中炔螨特的含量為65.64%時，共毒因子最大，為152.02，此時，炔螨特與苯丁錫的配比為0.656 4 ∶（1-0.656 4）=0.656 4 ∶0.343 6≈33 ∶17。因此，炔螨特與苯丁錫對朱砂葉螨的聯(lián)合作用最佳理論配比為33 ∶17。

2.4 混劑對朱砂葉螨的聯(lián)合作用最佳配比篩選

獲得理論最佳配比33 ∶17后，進一步測定了該配比與其相連配比33 ∶14、33 ∶15、33 ∶16、33 ∶18、33 ∶19、33 ∶20對朱砂葉螨雌成螨的毒力，以共毒系數(shù)法評價其增效程度，篩選出最佳配比，其結果如表4所示。在藥后24 h，炔螨特與苯丁錫配比以33 ∶14、33 ∶15、33 ∶16、33 ∶17、33 ∶18、33 ∶19、33 ∶20 的LC50分別為145.74、139.04、104.85、102.90、112.84、128.64、151.05 mg/L，以炔螨特為標準藥劑計算的共毒系數(shù)分別為142.74、145.89、188.93、188.28、168.13、144.60、120.89，各配比混劑的共毒系數(shù)均大于100，表現(xiàn)為增效作用，其中配比33 ∶16、33 ∶17增效顯著。配比 33 ∶16、33 ∶17混劑對朱砂葉螨的毒力分別是炔螨特對朱砂葉螨毒力的4.15、4.23倍（表3）。因此，炔螨特與苯丁錫混劑對朱砂葉螨的聯(lián)合作用最佳增效配比為33 ∶（16～17）。

3 討論與結論

朱砂葉螨的抗藥性不斷的增強主要取決于其復雜的抗性基因[26-27]，多作用機制的殺蟲劑不僅可以克服藥劑對單一靶標的刺激，還可以在某一靶標產生抗性后繼續(xù)具有殺蟲活性。何林等報道了甲氰菊酯與阿維菌素混用能有效延緩朱砂葉螨抗性的進化，而噠螨靈與阿維菌素混用、輪用都能有效延緩朱砂葉螨對二者的抗性進化[28]。有研究報道，溫室月季上的二斑葉螨對苯丁錫的抗性倍數(shù)達1 494倍，且抵抗性害螨也會迅速產生抗性[29]。因此，為了延緩害螨的抗性、降低防治成本、延長殺螨劑的使用壽命，將有效的殺螨劑進行復配勢在必行。本研究中炔螨特與苯丁錫以33 ∶16、33 ∶17混配對朱砂葉螨的毒力分別是炔螨特對朱砂葉螨毒力的4.15、4.23倍，具有顯著的殺螨活性。此外，炔螨特因對家蠶安全，長期用于防治桑園害螨，而苯丁錫對家蠶也為低毒[30]，該復配劑有望更好地應用于桑園害螨防治中，具有開發(fā)應用潛力。

參考文獻：

[1]Cakmak I，Demiral M A. Response of Tetranychus cinnabarinus feeding on NaCl-stressed strawberry plants[J]. Phytoparasitica，2007，35（1）：37-49.

[2]Sertkaya E，Kaya K，Soylu S. Acaricidal activities of the essential oils from several medicinal plants against the carmine spider mite （Tetranychus cinnabarinus Boisd.） （Acarina：Tetranychidae）[J]. Industrial Crops and Products，2010，31（1）：107-112.

[3]Wang J J，Zhao Z M，Zhang J P. The host plant-mediated impact of simulated acid rain on the development and reproduction of Tetranychus cinnabarinus （Acari，Tetranychidae）[J]. Journal of Applied Entomology，2004，128（6）：397-402.

[4]Marcic D. Acaricides in modern management of plant-feeding mites[J]. Journal of Pest Science，2012，85（4）：395-408.

[5]Xu L C，Zhan N Y，Liu R，et al. Joint action of phoxim and fenvalerate on reproduction in male rats[J]. Asian Journal of Andrology，2004，6（4）：337-341.

[6]Coors A，F(xiàn)rische T.Predicting the aquatic toxicity of commercial pesticide mixtures[J]. Environmental Sciences Europe，2011，23（1）：1-18.

[7]He L，Zhao Z M，Deng X P，et al. Resistance risk assessment：realized heritability of resistance to methrin，abamectin，pyridaben and their mixtures in the spider mite，Tetranychus cinnabarinus[J]. International Journal of Pest Management，2003，49（4）：271-274.

[8]何 林，趙志模，鄧新平，等. 甲氰菊酯與阿維菌素單用、輪用和混用對朱砂葉螨抗性進化的影響[J]. 蛛形學報，2002，11（1）：54-57.

[9]黎金嘉. 善待農藥殺螨劑炔螨特[J]. 農藥市場信息，2010（16）：15-17.

[10]Kabir K H，Chapman R B，Penman D R.Monitoring propargite resistance in European red mite，Panonychus ulmi Koch（Acari：Tetranychidae）[J]. New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science，1993，21（2）：133-138.

[11]Stavrinides M C，van Nieuwenhuyse P，van Leeuwen T，et al. Development of acaricide resistance in Pacific spider mite （Tetranychus pacificus） from California vineyards[J]. Experimental and Applied Acarology，2010，50（3）：243-254.

[12]沈慧敏，楊寶生. 二點葉螨對16種殺蟲、殺螨劑的抗藥性[J]. 植物保護學報，2001，28（4）：362-366.

[13]陳 洋，冉 春，熊 琳，等. 不同柑橘種質資源對橘全爪螨酶活性及其對藥劑敏感性的影響[J]. 西南農業(yè)學報，2006，19（3）：434-437.

[14]陳道茂，方培林，林荷芳，等. 橘全爪螨對克螨特抗藥性測定[J]. 浙江農業(yè)學報，2000，12（5）：62-63.

[15]Knowles C O.Mechanisms of resistance to acaricides[M]//Molecular mechanisms of resistance to agrochemicals. Berlin：Springer，1997：57-77.

[16]Teodoro A V，F(xiàn)adini M A，Lemos W P，et al. Lethal and sub-lethal selectivity of fenbutatin oxide and sulfur to the predator Iphiseiodes zuluagai （Acari：Phytoseiidae） and its prey，Oligonychus ilicis （Acari：Tetranychidae），in Brazilian coffee plantations[J]. Experimental and Applied Acarology，2005，36（1/2）：61-70.

[17]Beers E H，Riedl H，Dunley J E. Resistance to abamectin and reversion to susceptibility to fenbutatin oxide in spider mite （Acari：Tetranychidae） populations in the Pacific Northwest[J]. Journal of Economic Entomology，1998，91（2）：352-360.

[18]Herron G A，Edge V E，Rophail J. The influence of fenbutatin-oxide use on organotin resistance in two-spotted mite Tetranychus urticae Koch （Acari：Tetranychidae）[J]. Experimental and Applied Acarology，1994，18（11/12）：753-755.

[19]沈 娟，黃啟良，夏建波，等. 分散劑及黃原膠對多菌靈懸浮劑流變性質的影響[J]. 農藥學學報，2008（3）：354-360.

[20]van Leeuwen T，van Pottelberge S，Tirry L. Comparative acaricide susceptibility and detoxifying enzyme activities in field-collected resistant and susceptible strains of Tetranychus urticae[J]. Pest Management Science，2005，61（5）：499-507.

[21]Busvine J R. Recommended methods for measurement of resistance to pesticides[J]. Plant Production and Protection，1980，21：49-54.

[22]Mansour N A，Eldefrawi M E，Toppozada A，et al.Toxicological studies on the Egyptian cotton leaf worm，Prodenia litura. Ⅵ. Potentiation and antagonism of organophosphorus and carbamate insecticides[J]. Journal of Economic Entomology，1966，59（2）：307-311.

[23]王小藝，王躍龍，歐曉明. 農藥混劑配比研究的一種實用尋優(yōu)方法初探[J]. 農藥學學報，2005，7（1）：40-44.

[24]鄧新平，張 偉，張 衛(wèi)，等. 數(shù)學模型在二元復配殺螨劑最優(yōu)配比篩選中的應用[J]. 蛛形學報，2005，14（1）：28-32.

[25]Sun Y P，Johnson E R.Analysis of joint action of insecticides a gainst house flies[J]. Journal of Economic Entomology，1960，53（5）：887-892.[HJ1.6mm]

[26]He L，Gao X W，Wang J J，et al. Genetic analysis of abamectin resistance in Tetranychus cinnabarinus[J]. Pesticide Biochemistry and Physiology，2009，95（3）：147-151.

[27]Xu Z F，Zhu W Y，Liu Y C，et al.Analysis of insecticide resistance-related genes of the carmine spider mite Tetranychus cinnabarinus based on a de novo assembled transcriptome[J]. PLoS One，2014，9（5）：e94779.

[28]何 林，趙志模，鄧新平，等. 朱砂葉螨對3種殺螨劑的抗性選育及抗性治理研究[J]. 中國農業(yè)科學，2003，36（4）：403-408.

[29]Ilias A，Roditakis E，Grispou M，et al.Efficacy of ketoenols on insecticide resistant field populations of two-spotted spider mite Tetranychus urticae and sweet potato whitefly Bemisia tabaci from Greece[J]. Crop Protection，2012，42：305-311.

[30]楊振國，謝道燕，江秀均，等. 桑園專用高效安全殺螨農藥的室內篩選試驗[J]. 蠶業(yè)科學，2015，41（1）：48-52.