全自動細胞處理系統與手工法制備冰凍解凍去甘油紅細胞效果研究

唐靜 黃文杰 范恩勇

[摘要] 目的 探討全自動細胞處理系統與手工法制備冰凍解凍去甘油紅細胞制備效果。 方法 對2016年6月～2017年8月40袋原料血冰凍紅細胞按照洗滌方法的不同分為手工對照組和全自動試驗組，每組20袋，試驗組采用全自動細胞處理系統制備冰凍解凍去甘油紅細胞，對照組采用手工開放式洗滌法進行制備。對試驗組和對照組制備的產品進行紅細胞產品容量（mL）、血紅蛋白含量（g/袋）、游離血紅蛋白含量（g/L）、白細胞殘留量（×107個/袋）、甘油殘留量（g/L）、紅細胞回收率（%）及無菌試驗等指標的檢測分析。 結果 兩組洗滌法制備的冰凍解凍去甘油紅細胞產品各項質量指標均符合國家相關規定標準要求，試驗組中血紅蛋白含量、紅細胞回收率明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;游離血紅蛋白含量、甘油殘留量等指標均低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）。試驗組與對照組在容量、白細胞殘留量質量指標方面基本一致，差異無統計學意義（P>0.05）。結論 全自動細胞處理系統可有效保證臨床對Rh（D）陰性患者的緊急搶救用血，為患者搶救生命贏得時間，同時也可減少因手工開放操作而引起的血液細菌污染的可能性，提高采供血機構工作人員工作效率，提升冰凍解凍去甘油紅細胞的產品質量，從而確保血液質量和臨床用血安全。

[關鍵詞] 冰凍解凍去甘油紅細胞;冰凍紅細胞;血紅蛋白含量;甘油殘留量

[中圖分類號] R446.1 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] B ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2019）29-0087-03

Effect study of automatic cell processing system and manual method on preparation of frozen thawed deglycerol red blood cells

TANG Jing ? HUANG Wenjie ? FAN Enyong

Yangzhou Central Blood Station in Jiangsu Province， Yangzhou ? 225007， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of the automatic cell processing system and the manual method on the preparation of frozen thawed deglycerol red blood cells. Methods Red blood cells of 40 bags of raw blood from June 2016 to August 2017 were frozen and divided into the manual control group and the automatic experiment group according to the washing method， with 20 bags in each group. In the experiment group， the automatic cell processing system was used to prepare frozen thawed glycerol free erythrocyte， while in the control group， the manual open washing method was used. Indicators， including red blood cell product volume （mL）， hemoglobin content （g/bag）， free hemoglobin content （g/L）， leukocyte residual amount （×107 cells/bag）， glycerol residual amount （g/L）， red blood cell recovery rate （%） and sterility test of the two groups were detected and analyzed. Results The quality indices of the frozen thawed glycerol free erythrocyte products prepared by both the experiment group and the control group were in compliance with the relevant national standards. The experiment group was significantly higher than the control group in hemoglobin content and red blood cell recovery rate， with statistically significant differences（P<0.05）， and was significantly lower than the control group free hemoglobin content， glycerol residual and other indicators， with statistically significant differences（P<0.05）. The experiment group and the control group were similar in volume and leukocyte residual， with no statistically significant differences （P>0.05）. Conclusion The automatic cell processing system can effectively guarantee the emergency rescue blood for patients with negative Rh （D）， win time for rescuing life， as well as reduce the possibility of blood bacterial contamination caused by manual open operation， improve the working efficiency of blood collection and supply agencies， and improve the product quality of frozen thawed glycerol free erythrocyte， thus ensuring blood quality and clinical blood safety.

[Key words] Frozen thawed glycerol free erythrocyte; Frozen red blood cells; Hemoglobin content; Glycerol residues

近年來，隨著臨床醫療技術水平的發展和輸血技術的進步，臨床對稀有血型的需求量呈逐年上升，Rh血型系統作為人類第2大血型系統，在輸血醫學中具有極其重要的臨床意義，特別是在產科手術、新生兒輸血及急診輸血等方面需求較大，Rh（D）陰性血供應的難點不只是獻血者的稀有，更重要的是應急性和及時性[1]。當前，國、內外絕大部分采供血機構對于Rh（D）陰性血的保存主要采用高濃度甘油冰凍保存，保存時間長，能有效緩解臨床突發事件對Rh（D）陰性血的需求，且冰凍解凍去甘油紅細胞制劑的作用是其他制劑不能替代的[2]。對于冰凍紅細胞解凍去甘油制備方法，主要有全自動細胞處理系統和手工法制備兩種。由于冰凍解凍去甘油紅細胞的制備操作復雜，洗滌液的添加量、添加速度等極易受人為因素影響，制備時間也較長，工作效率不高，同時易造成冰凍解凍去甘油紅細胞質量的不穩定[3-8]。為提高冰凍解凍去甘油紅細胞產品的制備質量和安全，本站于2016年5月引進ACP215全自動血細胞處理系統進行冰凍解凍去甘油紅細胞產品的制備，取得了較好效果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

40袋血液產品均來自揚州市中心血站2016年6月～2017年8月成品庫，原料血均為2 U/袋的冰凍紅細胞，符合《全血及成分血質量標準》[9]，冰凍紅細胞的制備按照《血站技術操作規程》（2015版）的要求進行，將采集的6 d內且各項指標檢測均為合格的Rh（D）陰性全血或懸浮紅細胞制備成冰凍紅細胞，并將其置于-65℃以下條件保存，本血站冰凍紅細胞全部由去白細胞懸浮紅細胞制備。

1.2 方法

取待解凍的冰凍紅細胞置37℃恒溫水浴箱約30 min進行解凍，按照洗滌方法的不同分為對照組和試驗組，每組20袋。

（1）對照組：采用手工制備法進行解凍-復蘇-去甘油化-洗滌過程，將解凍后的冰凍紅細胞在4℃×2500 r/min×10 min 條件下離心，去除上清液;加入9%氯化鈉溶液160 mL復蘇，混勻后再離心擠出上清液;然后連接 0.9%氯化鈉聯袋進行洗滌，每次加入1袋氯化鈉溶液250 mL，混勻、離心擠出上清液;重復上述步驟3～5次，直至離心后紅細胞上清液澄清為止，去除上清液后加入0.9%氯化鈉溶液，使其容量達到（400±40）mL即為冰凍解凍去甘油紅細胞[10]。全部洗滌過程約需3 h。

（2）試驗組：采用ACP215全自動細胞處理系統進行洗滌。首先將融化后的紅細胞稱重并與ACP215細胞處理系統的235型耗材采用無菌接駁機進行連接，將程序選擇為去甘油洗滌，安裝好耗材，根據設定的程序，分別加入9%氯化鈉溶液復蘇和0.9%氯化鈉溶液進行梯度洗滌，經過2次稀釋、5次洗滌，最后加入一定量的0.9%氯化鈉溶液，即制備成冰凍解凍去甘油紅細胞。具體操作方法依據ACP215細胞處理系統操作手冊進行。全部洗滌過程結束約需56 min。

1.3 主要儀器與材料

ACP215細胞處理系統（美國血液技術公司生產）及配套一次性235型去甘油洗滌耗材;Com poDock型無菌接管機（德國費森尤斯）、6000i型大容量冷凍離心機（德國賀利氏）、DK-600型電熱恒溫水槽（上海精宏實驗設備有限公司）、MEK-7222K全自動血細胞計數儀（日本光電）、BD-9050全自動細菌培養系統（美國BD公司）、Microlab 300半自動生化儀（荷蘭威圖）;9%NaCl溶液、0.9%生理鹽水（1000 mL）、0.9%生理鹽水四聯袋、一次性無菌空袋等均由山東威高集團公司生產。

1.4 檢測指標

按照國家相關標準[9]對兩組的產品容量（mL）、血紅蛋白含量（g/袋）、游離血紅蛋白含量（g/L）、白細胞殘留量（×107個/袋）、甘油殘留量（g/L）、紅細胞回收率（%）及無菌試驗等進行檢測，由本血站質量技術科進行測定。血紅蛋白含量、紅細胞回收率等測定采用全自動血細胞分析儀進行，游離血紅蛋白、甘油殘留量采用半自動生化儀進行測定，白細胞殘留量采用Nageotte細胞計數盤計數，無菌試驗采用全自動細菌培養系統進行培養。

1.5 統計學處理

采用SPSS 19.0軟件進行數據處理及統計學分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

兩種不同方法制備的冰凍解凍去甘油紅細胞產品質量指標檢測情況比較，試驗組中血紅蛋白含量、紅細胞回收率明顯高于對照組，游離血紅蛋白、甘油殘留量明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

冰凍紅細胞作為Rh（D）陰性血、稀有血型的有效保存手段，也是臨床稀有血型患者緊急搶救用血的重要來源和保障[11]，可應對臨床突發事件對Rh（D）陰性血或稀有血的需求，為搶救患者生命贏得時間，但手工法制備冰凍解凍去甘油紅細胞的時間較長，每U約需3 h左右，不僅屬于半開放環境操作，存在被細菌污染或交叉污染的安全隱患，而且制備過程復雜，影響因素較多，受凍存前白細胞的濾除、制備原料血（冰凍紅細胞）質量、甘油化過程、甘油添加量、去甘油化的離心速度、處理時間等諸多因素影響[12-16]。如何能最大化保證產品質量的同時，縮短制備時間，確保臨床急救用血的及時性和有效性，已成為當前采供血機構的共識。

本研究表1結果顯示，兩組洗滌法制備的產品質量均符合國家相關規定標準要求，但有些質量指標有所差異，試驗組中血紅蛋白含量、紅細胞回收率明顯高于對照組，游離血紅蛋白含量、甘油殘留量等指標均低于對照組（P<0.05）。說明全自動細胞處理系統紅細胞回收率較對照組高，且洗滌后殘留游離血紅蛋白、甘油含量較低，說明洗滌效果較好。較高的紅細胞回收率及較好的細胞洗滌效果，可提高紅細胞攜氧量，減少因游離血紅蛋白和甘油對患者的影響，可更好地充分利用稀有血液資源，有效提高患者輸血的治量效果。試驗組在容量、白細胞殘留量等方面與對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05），主要原因為本血站制備冰凍紅細胞的原料血為去白細胞懸浮紅細胞，在制備冰凍紅細胞前已將白細胞通過白細胞濾器去除;容量方面，表面看似相近，實際上是為滿足《全血及成分血質量標準》中“容量”的要求時，手工添加進去的生理鹽水，主要區別為手工法制備的最終產品中紅細胞量較少，生理鹽水較多;而自動處理系統洗滌的最終產品中紅細胞量較多，生理鹽水量相對較少。表面上看，與手工法相比較，雖然容量無差異，但紅細胞的含量卻有明顯增高，細胞攜氧能力及治療效果會更好。

全自動細胞處理系統由于其制備時間短，自動化程度高，減少人為差錯的發生，耗時僅1 h左右，可為搶救患者生命爭取寶貴時間;同時，該系統可進一步避免血液開袋操作引發的細菌污染或交叉污染的安全隱患，越來越受到國內采供血機構的認可。全自動細胞處理系統除用于冰凍解凍去甘油紅細胞的制備，也可用于原料血液冰凍紅細胞的制備，對于添加甘油的量可以準確計算并添加[17]，從而保證原料血液的質量，對于下一步的冰凍解凍去甘油紅細胞的制備、確保最終產品的合格奠定基礎。全自動細胞處理系統的缺點是設備和耗材較貴，會給患者帶來一定的經濟負擔。

綜上所述，全自動細胞處理系統可有效保證臨床對Rh（D）陰性患者的緊急搶救用血，為患者搶救生命贏得時間，同時也可減少因手工開放操作而引起的血液細菌污染的可能性，提高采供血機構工作人員工作效率，提升冰凍解凍去甘油紅細胞的產品質量，從而確保血液質量和臨床用血安全。

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（收稿日期：2019-03-25）