尿紅細胞與尿隱血檢測方法評價及影響因素分析

殷賢斌 朱曉麗 黃小玲 朱翔 謝萍 方中濤 許大海 趙偲

(馬鞍山市臨床檢驗中心，安徽 馬鞍山 243000)

尿常規檢查可以檢測尿液的物理、化學性質和尿液有形成分，對泌尿系統疾病及一些全身性疾病的診斷和鑒別診斷具有非常重要的意義[1]。而在日常工作中，該測試方法易受試紙、儀器設備、尿液中某些藥物等因素的影響，導致尿沉渣分析儀紅細胞的檢測結果、尿隱血檢測結果與尿沉渣鏡檢比較，易出現假陽性和假陰性。收集我院門診患者資料，發現尿隱血陽性檢出率達到20%左右，與姚登攀等報道相符[2]。我實驗室本著提高尿液檢測質量，更好的服務臨床的目的，特別對尿隱血假陰性、儀器法尿紅細胞計數假陽性、尿中不耐熱酶導致尿隱血假陽性的原因做了進一步探討。

1 資料與方法

1.1標本來源 選擇54例干化學法檢測尿液隱血陽性的患者，其中男20例，女34例，年齡17～92歲，平均(62.11±17.70)歲。另選擇34例干化學法檢測尿液隱血陰性而尿沉渣分析儀檢測紅細胞超出參考范圍內的患者，其中男12例，女22例，年齡17～95歲，平均(60.02±17.04)歲。

1.2儀器與試劑 COBIO全自動尿液分析工作站及購自德國科寶公司原裝配套計數板及配套試條，尿有形成分質控液為伯樂尿液質控，尿液干化學質控為迪瑞公司尿液質控。普通雙目生物顯微鏡(Olympus)；Fuchs-Rosenthal計數板；阿辛藍—派洛寧B染色液、專用一次性尿杯、尿試管。

1.3檢測方法 儀器近期均經過廠家校準。嚴格按照儀器操作規程進行，質控在控后進行標本檢測。標本在留取后2 h內完成。(1)儀器法：每日留取標本在科寶全自動尿液有形成分分析儀上完成干化學及尿紅細胞計數的檢測。(2)膠體金法：將膠體金試條放入混勻后的尿中，不得超過控制線，3～5 min看結果。(3)顯微鏡法：將每天上機后的標本(采用未離心，S染色液染色法)立即充分混勻后沖入一次性Fuchs-Rosenthal計數板進行計數，算出1 μL尿液內的細胞數[4]。顯微鏡的檢查均由兩位有經驗的專業技師[5]采用盲法獨立完成，取兩人計數結果的均值。(4)煮沸實驗：立即取上述干化學法檢測尿液隱血陽性標本(54例)各5 mL煮沸，迅速冷卻后再用干化學法檢測尿隱血[6]，目的為去除尿中不耐熱過氧化物酶。

1.4統計學方法 數據采用SPSS16.0軟件進行統計分析，計數資料采用卡方檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1以顯微鏡檢測為金標準的尿隱血陽性標本結果比較 干化學法檢測尿隱血陽性的患者尿標本不離心顯微鏡鏡檢紅細胞，同時采用膠體金單克隆抗體法檢測尿隱血，54例患者中29例顯微鏡鏡檢紅細胞正常，但膠體金單克隆抗體法54例尿隱血均陽性，見表1。

表1 以顯微鏡檢測為金標準與煮沸后尿標本隱血結果比較(n)

2.2兩種方法尿液煮沸前后隱血結果比較 以顯微鏡鏡檢結果為金標準比較：尿隱血結果為1+標本煮沸后，僅有22%的標本隱血仍為陽性，假陽性率>50%；尿隱血結果為2+和3+煮沸后干化學結果，假陽性率為0，結果與顯微鏡鏡檢符合率為100%。顯微鏡鏡檢紅細胞25例超出參考范圍，煮沸后再測隱血有23例陽性。見表2。

表2 兩種方法與尿液煮沸前后隱血結果比較(n)

2.3以顯微鏡檢測為金標準尿隱血陰性標本結果比較 尿沉渣分析儀檢測紅細胞超出參考范圍內而干化學法檢測尿隱血陰性的患者尿標本不離心顯微鏡鏡檢紅細胞，同時采用膠體金單克隆抗體法檢測尿隱血，34例患者標本中24例顯微鏡鏡檢紅細胞超出正常范圍，其中18例尿紅細胞均為變形紅細胞，其余6例是邊緣為鋸齒樣的紅細胞，且膠體金法測隱血均為陽性。同時對34例患者標本進行冰醋酸破壞實驗。顯微鏡鏡檢紅細胞在正常范圍內的10例樣本中，其中儀器將草酸鈣結晶誤認為紅細胞有4例，膠體金法測隱血均為陰性。剩余30例標本按照科寶XS儀器檢測白細胞結果分組，見表3。

表3 儀器法計數尿WBC陽性、陰性組的尿RBC計數結果比較(n)

3 討 論

血尿是腎臟疾病的一個重要臨床表現，引起血尿的常見病因包括結石、炎癥、外傷、腫瘤、畸形[7-9]。干化學測隱血和尿沉渣檢查紅細胞是篩查血尿的常規方法。尿液干化學檢測隱血呈假陽性常見因素：(1)堿性尿、低比重尿使尿中存在的紅細胞溶解致血紅蛋白溢出，難以找到完整RBC[10]，本試驗中4例pH為8.0，比重1.005的標本上機檢測，2例標本的紅細胞計數結果超出正常范圍，可能與我室的科寶XS的尿沉渣具有自動離心，最終提高了陽性率有關。(2)尿中肌紅蛋白、易熱酶[11]等可造成 BLD假陽性，不耐熱酶通過煮沸實驗可以大致鑒別。經試管煮沸后血紅蛋白雖凝固，但不會影響隱血試驗的反應，即煮沸尿液不會導致假陰性結果，需要注意的是所有標本的相關實驗均應在2 h內完成[12]。本研究顯示，不耐熱酶造成尿干化學隱血(1+)假陽性率達到50%以上，而尿干化學隱血(2+及以上)假陽性率為0，提醒我們尿隱血煮沸試驗可能僅適用于干化學隱血1+的標本。通過實驗我們也不難看出如果以煮沸實驗后尿隱血結果與顯微鏡金標準存在差異，但絕不是煮沸實驗陰性，就說明無紅細胞，仍會出現假陰性，造成漏檢。尿隱血煮沸試驗主要意義為：臨床如果有患者尿隱血為1+，顯微鏡鏡檢紅細胞為陰性，可使用煮沸試驗判斷是否為不耐熱酶干擾，但煮沸試驗尿隱血仍為陽性，應引起重視；對于尿干化學隱血2+及以上的標本，我們就不應使用煮沸試驗來加以判斷，而應引起高度重視，積極尋找原因，早日明確診斷。(3)有些型號試帶過于敏感[13]，可配合使用膠體金法輔助診斷。本研究顯示：膠體金法陽性率高于干化學陽性率，與黃燕婷[14]等報道的不太相符，提示膠體金法或不能很好地排除尿隱血假陽性。膠體金單克隆抗體法是利用免疫學方法進行隱血檢測，原理是金標抗人血紅蛋白(Hb)抗體特異性地結合人Hb成分后，向上擴散分別與測試區的另一抗人Hb(夾心法)結合，使膠體金顆粒聚集呈紅色，可很好地鑒別肌紅蛋白尿和血紅蛋白尿，特別是當臨床標本儀器干化學法3+，膠體金陰性或極弱陽性，鏡檢紅細胞正常，而患者有過劇烈運動等原因造成的肌肉損傷，則可大致判斷是肌紅蛋白尿。

尿液干化學檢測隱血假陰性常見因素：尿液中存在大劑量維生素C及高比重和高蛋白尿時均可影響隱血試驗[15]，引起假陰性。而本文中34例(均排除大劑量維生素C、高比重和高蛋白干擾)紅細胞超出參考范圍內而干化學法檢測尿隱血陰性的患者，有24例顯微鏡鏡檢紅細胞超出正常范圍，(其中18例標本紅細胞計數結果接近科寶XS的cut-off值，6例紅細胞計數>15.00個/μL)。接近科寶XS的cut-off值18例標本中的紅細胞均為變形紅細胞，可能其由于經過腎小球濾過膜的擠壓，及體內滲透壓的不斷變化，導致細胞中血紅蛋白丟失、破壞，再加上晨尿標本體內停留過久的因素，最終使得血紅蛋白的過氧化物酶反應性降低，使干化學呈假陰性；而紅細胞值>15.00個/μL的6例標本臨床診斷分別為腦梗死、后循環出血、腦出血、腦供血不足，腦出血患者尿中的紅細胞均為鋸齒狀均一型紅細胞。可能因為腦出血時引發腦水腫，機體血漿晶體滲透壓隨之降低，進入紅細胞水分增多導致紅細胞膨脹，變形能力降低。當此類紅細胞出現在尿中時，其血紅蛋白可能已變性，難以與試劑反應，最終導致假陰性。由于本組研究樣本量偏小，存在一定的局限性；因此腦出血病類患者尿紅細胞陽性但尿隱血呈陰性是巧合還是存在關聯，尚待加大樣本量進一步研究。

本次研究發現造成尿沉渣分析儀紅細胞呈假陽性的主要原因為：草酸鈣結晶干擾(具體為單水草酸鈣結晶和體積較小的雙水草酸鈣結晶)；結合顯微鏡鏡檢發現，儀器將白細胞(主要為淋巴細胞)誤認為紅細胞，這類白細胞體積較小，無顆粒，形狀類似紅細胞，儀器不能識別造成假陽性；尿沉渣分析儀紅細胞呈假陰性的主要原因為檢測標本背景物質較多，本文中的3例假陰性標本(2例含有大量粘液絲、1例含有較多白細胞)，由于背景物質包裹或覆蓋了紅細胞，使得紅細胞未被標識，造成假陰性。對于此類標本，我室利用科寶XS的尿沉渣分析儀，根據其特有的全視野實景成像原理，我們可以根據拍攝圖片再行人工顯微鏡檢查，以保證結果準確。