組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶hMOF和p53蛋白在非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)及臨床意義

韓麗麗，韓性運(yùn)

1周口市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河南 周口 466000

2周口職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)科，河南 周口 466000

非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是臨床常見的一種惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著患者的生命健康，導(dǎo)致患者的生活質(zhì)量明顯下降[1-2]。在揭示NSCLC發(fā)病機(jī)制的過程中可以發(fā)現(xiàn)，腫瘤調(diào)控相關(guān)因子的改變能夠通過影響肺上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、分化及浸潤(rùn)過程異常，進(jìn)而促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生[3]。組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶hMOF能夠通過參與上皮細(xì)胞的分化、DNA損傷性修復(fù)或癌基因的突變誘導(dǎo)過程，增加上皮細(xì)胞惡性病變的風(fēng)險(xiǎn)[4]；p53是一種重要的抑癌基因，能夠通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的激活，抑制腫瘤細(xì)胞的持續(xù)性增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[5-6]。一項(xiàng)關(guān)于p53蛋白與生殖系統(tǒng)惡性腫瘤關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)，p53蛋白表達(dá)水平升高與晚期卵巢漿液性腺癌患者的臨床分期密切相關(guān)[7]。目前，關(guān)于hMOF、p53蛋白表達(dá)與NSCLC關(guān)系的研究尚少。本研究對(duì)hMOF、p53蛋白在NSCLC患者中的表達(dá)情況進(jìn)行分析，并對(duì)其與NSCLC患者臨床特征的關(guān)系進(jìn)行探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2018年1月周口市中心醫(yī)院收治的NSCLC患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為NSCLC；②手術(shù)前未行放化療等抗腫瘤治療；③病歷資料及手術(shù)標(biāo)本保存完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤；②合并肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等其他嚴(yán)重疾病。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入NSCLC患者89例作為NSCLC組，并收集患者的NSCLC組織標(biāo)本。另外，選取同期于周口市中心醫(yī)院行手術(shù)切除的肺良性病變患者47例作為對(duì)照組，所有患者均經(jīng)病理組織學(xué)確診，且均未合并肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等其他嚴(yán)重疾病；其中肺大皰14例，肺結(jié)核12例，炎性假瘤15例，支氣管擴(kuò)張6例，收集肺良性病變患者的肺良性病變組織標(biāo)本。NSCLC組和對(duì)照組患者的性別、年齡、體重指數(shù)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表1），具有可比性。

表1 兩組患者的基本臨床特征

1.2 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)hMOF和p53蛋白表達(dá)

采用免疫組織化學(xué)法對(duì)NSCLC組織和肺良性病變組織中hMOF和p53蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。石蠟包埋組織，行連續(xù)性切片，厚度為3 μm，60℃烤片60 min，常規(guī)脫水后，采用乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）進(jìn)行抗原修復(fù)，加入 10 μl蒸餾水，加入 10%過氧化氫 5 μl，室溫下孵育30 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌3次，每次3 min，加 入hMOF、p53單克隆抗體（1∶1000，購(gòu)自羅氏公司），37℃孵育60 min，PBS洗滌3次，每次3 min，加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的hMOF、p53二抗（1∶2000，購(gòu)自羅氏公司），37 ℃孵育20 min，PBS洗滌3次，每次3 min，加入二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）后，PBS沖洗和復(fù)染，脫水后在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.3 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果判定

hMOF、p53蛋白定位于細(xì)胞核，呈黃色顆粒狀；隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，總計(jì)500個(gè)細(xì)胞，采用半定量積分法對(duì)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例進(jìn)行評(píng)分。染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分：＜10%為1分，11%～30%為2分，31%～50%為3分，≥51%為4分。最終得分為染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例得分之積，分?jǐn)?shù)≥4分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用多元Logistic回歸分析法對(duì)影響NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白表達(dá)的因素進(jìn)行分析；相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 hMOF、p53蛋白表達(dá)水平的比較

hMOF、p53蛋白均定位于細(xì)胞核，呈黃色顆粒狀。NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為58.4%（52/89）和61.8%（55/89），均高于肺良性病變組織的14.9%（7/47）和12.8%（6/47），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=23.732、29.894，P＜0.05）。（圖1）

圖1 NSCLC 組織和肺良性病變組織中hMOF和p53蛋白的表達(dá)情況（免疫組化染色，×400）

2.2 hMOF、p53蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床特征的關(guān)系

TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.634、17.311，P＜0.05）；TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=21.515、18.495、11.855，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的表達(dá)情況（n=89）

2.3 NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白表達(dá)影響因素的多因素分析

多元Logistic回歸分析結(jié)果顯示：TNM分期、分化程度均為NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白表達(dá)的獨(dú)立影響因素（OR=2.67、2.39，P＜0.01）；TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均為NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白表達(dá)的獨(dú)立影響因素（OR=2.41、2.49、2.63，P＜0.01）。（表3、表4）

表3 89例NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白表達(dá)影響因素的多因素分析

表4 89例NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白表達(dá)影響因素的多因素分析

2.4 NSCLC組織中hMOF和p53蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析

NSCLC組織中hMOF和p53蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（rs=0.838，P＜0.05）。（表5）

表5 NSCLC組織中hMOF和p53蛋白表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

遺傳易感因素、長(zhǎng)期吸煙等均能夠促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞的持續(xù)性病變，增加NSCLC的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。在合并有呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤家族史的人群中，NSCLC的發(fā)病率可進(jìn)一步上升[8]。NSCLC患者臨床預(yù)后較差，其中位生存時(shí)間不足34個(gè)月，采用綜合性措施治療后，NSCLC患者的病死率仍超過35%[9-11]。免疫靶向治療能夠在肺癌患者的輔助治療過程中發(fā)揮重要作用，而本研究對(duì)NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行探討，不僅能夠?yàn)樯钊虢沂綨SCLC的發(fā)病機(jī)制提供參考，同時(shí)還能夠?yàn)镹SCLC患者免疫靶向治療的靶點(diǎn)選擇提供參考。

hMOF為組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶家族成員，其能夠通過激活上皮細(xì)胞內(nèi)的不同信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的異常增殖和分化，進(jìn)而導(dǎo)致上皮來(lái)源惡性腫瘤的發(fā)生。hMOF蛋白可以通過乙酰化修飾腫瘤細(xì)胞的DNA，提高癌基因上游轉(zhuǎn)錄因子的活性，進(jìn)而增加癌基因的擴(kuò)增風(fēng)險(xiǎn)。hMOF蛋白表達(dá)水平升高時(shí)，能夠通過誘導(dǎo)癌基因突變，降低癌基因的錯(cuò)配修復(fù)能力，促進(jìn)惡性腫瘤的病情進(jìn)展。p53是抑癌基因家族成員，能夠判斷DNA的變異程度。當(dāng)DNA變異較小時(shí)，p53可以促進(jìn)細(xì)胞的自我修復(fù)；但當(dāng)DNA變異較大時(shí)，p53則會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[12]。姜愛英等[13]對(duì)hMOF、p53蛋白在NSCLC患者中的表達(dá)情況進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)hMOF、p53蛋白表達(dá)水平升高與NSCLC的發(fā)生過程密切相關(guān)，但缺乏對(duì)hMOF、p53蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床特征關(guān)系的研究。

本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)了hMOF、p53蛋白在NSCLC患者NSCLC組織中的表達(dá)情況，并探討了hMOF、p53蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床特征的關(guān)系，結(jié)果顯示NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均高于肺良性病變組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示hMOF、p53蛋白的表達(dá)水平升高均能影響NSCLC的發(fā)生過程，究其原因可能與hMOF、p53蛋白的下述幾個(gè)方面的作用有關(guān)[14-16]：①hMOF表達(dá)水平升高會(huì)導(dǎo)致組蛋白酶的修飾異常，過度的乙酰化修飾能夠提高上游啟動(dòng)子在腫瘤細(xì)胞中的活性，提高腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)增速度；②p53蛋白具有抑癌作用，但在NSCLC患者中p53蛋白的表達(dá)水平升高，這主要由于腫瘤細(xì)胞的過度增殖，能夠反饋性誘導(dǎo)p53蛋白的釋放，從而參與到腫瘤細(xì)胞的增殖調(diào)控過程。郁俊[17]研究表明，NSCLC患者NSCLC組織中，p53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率可平均上升40%以上，特別是在合并有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或腫瘤病情進(jìn)展較為明顯的患者中，p53蛋白的表達(dá)水平升高更為明顯。在探討hMOF、p53蛋白表達(dá)與NSCLC患者臨床特征的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化的患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示hMOF、p53蛋白表達(dá)水平均與NSCLC患者的病情進(jìn)展有關(guān)，究其原因可能為hMOF、p53蛋白的表達(dá)水平升高能夠影響肺泡上皮細(xì)胞分化成熟，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞低分化的發(fā)生；而hMOF和p53蛋白可使腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)及侵襲能力發(fā)生改變，從而促進(jìn)肺癌患者臨床分期的進(jìn)展。多因素分析結(jié)果顯示，TNM分期、分化程度均為NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白表達(dá)的獨(dú)立影響因素（P＜0.05），而TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均為NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白表達(dá)的獨(dú)立影響因素（P＜0.05），提示不同臨床病理因素可能對(duì)hMOF、p53的表達(dá)水平產(chǎn)生影響，而這主要由于相關(guān)臨床病理特征的進(jìn)展能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)腫瘤信號(hào)通路的激活，最終導(dǎo)致hMOF、p53的異常表達(dá)。本研究結(jié)果還顯示，NSCLC組織中hMOF和p53蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，提示兩者在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的協(xié)同作用，但具體作用機(jī)制尚未明確。

綜上所述，NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白表達(dá)水平均明顯升高，且hMOF、p53蛋白的表達(dá)水平均與NSCLC患者的臨床分期及腫瘤細(xì)胞分化程度有關(guān)。