lncRNA CASC11在小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

劉麗麗，呂立麗，谷雪

唐山市人民醫(yī)院放化五科，河北 唐山 063000

小細(xì)胞肺癌是未分化癌的一種，發(fā)病率約占肺癌的15%[1]。小細(xì)胞肺癌具有極強(qiáng)的侵襲性，患者可于早期發(fā)生血行轉(zhuǎn)移或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，因此多數(shù)患者確診時(shí)就存在鎖骨以上區(qū)域轉(zhuǎn)移情況，即處于廣泛期[2]。小細(xì)胞肺癌患者中位生存時(shí)間僅1年左右，5年生存率低于5%，嚴(yán)重影響人類健康[3]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一種無完整開放閱讀框且無或較少蛋白編碼能力的RNA。臨床研究表明，lncRNA是細(xì)胞生理、病理活動(dòng)的重要參與因子，并且與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4]。腫瘤易感基因11（cancer susceptibility 11，CASC11）是新近發(fā)現(xiàn)的一種lncRNA。本研究探討小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11的表達(dá)及意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1月至2018年1月唐山市人民醫(yī)院收治的小細(xì)胞肺癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理組織學(xué)確診；②術(shù)前未行放化療等治療；③臨床隨訪資料保存完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他惡性腫瘤；②合并有心肝腎功能不全、感染、自身免疫系統(tǒng)性疾病等。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入小細(xì)胞肺癌患者90例，另選取外傷患者90例。小細(xì)胞肺癌患者中，男50例，女40例；年齡（51.46±9.22）歲；體重指數(shù)（22.03±3.15）kg/m2。外傷患者中，男55例，女35例；年齡（50.87±8.61）歲；體重指數(shù)（21.89±3.06）kg/m2。小細(xì)胞肺癌患者和外傷患者臨床特征比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。取小細(xì)胞肺癌患者的小細(xì)胞肺癌組織90例及外傷患者的正常肺組織90例。

1.2 檢測(cè)方法

選用Trizol法提取兩種組織總RNA，并選用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA純度、濃度，并對(duì)RNA樣本進(jìn)行凝膠電泳。取完整度高的RNA樣本，選用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time-polymerase chain reaction，qRT-PCR）法檢測(cè)CASC11表達(dá)水平，RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自大連寶生物工程有限公司，基因擴(kuò)增梯度PCR儀購(gòu)自冠森生物科技上海公司。CASC11及內(nèi)參上下游引物均由上海生工生物工程有限公司提供，CASC11上游引物：5'-CGACCCCAACACCTTCTTTG-3'；下游引物：5'-CTCACCCCTAAGTYCGCTGG-3'。內(nèi)參為β-actin，上游引物：5'-AGTGTGACGlDGACATCCGCAAAG-3'；下游引物：5'-ATCCACATCTGCTGGAAGGTGGAC-3'。檢測(cè)操作參照儀器及試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 治療方法

所有小細(xì)胞肺癌患者均行三維適形放療技術(shù)，劑量約為每次1.5 Gy，每天2次，總劑量約為45 Gy。同步進(jìn)行化療，放療第1天開始進(jìn)行依托泊苷+順鉑方案化療：20 mg/m2順鉑+100 mg依托泊苷靜脈滴注，d 1～5，28天為一個(gè)療程，持續(xù)2個(gè)療程。

1.4 資料收集

對(duì)小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行電話隨訪6～48個(gè)月，記錄患者一般資料、臨床癥狀及影像學(xué)檢查結(jié)果。同時(shí)記錄患者預(yù)后情況，計(jì)算患者無進(jìn)展生存時(shí)間和總生存時(shí)間。無失訪病例，截至隨訪日期，生存41例，死亡49例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，生存曲線采用Kaplan-Meier法繪制，生存情況比較采用Log-rank檢驗(yàn)，多因素分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小細(xì)胞肺癌組織和正常肺組織中l(wèi)ncRNA CASC11表達(dá)的比較

小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11表達(dá)量為（1.04±0.12），明顯低于正常肺組織的（8.41±1.21），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=57.501，P＜0.01）。

2.2 小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11的表達(dá)與 臨床特征的關(guān)系

根據(jù)本研究中l(wèi)ncRNA CASC11的平均表達(dá)水平，將lncRNACASC11＜1.04定義為低表達(dá)，lncRNA CASC11≥1.04定義為高表達(dá)。廣泛期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的小細(xì)胞肺癌患者的小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11低表達(dá)率分別明顯高于局限期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者（P＜0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征小細(xì)胞肺癌患者的小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11表達(dá)情況的比較（n=90）

2.3 小細(xì)胞肺癌中l(wèi)ncRNA CASC11的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

lncRNA CASC11低表達(dá)患者中位無進(jìn)展生存時(shí)間和總生存時(shí)間分別為11個(gè)月和18個(gè)月，分別短于lncRNA CASC11高表達(dá)患者的16個(gè)月和26個(gè)月，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=14.806、31.630，P＜0.05）。（圖1、圖2）

圖1 lncRNACASC11低表達(dá)（n=46）患者與lncRNA CASC11高表達(dá)（n=44）患者的無進(jìn)展生存曲線

圖2 lncRNACASC11低表達(dá)（n=46）患者與lncRNA CASC11高表達(dá)（n=44）患者的總生存曲線

2.4 小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析

將分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及l(fā)ncRNA CASC11表達(dá)進(jìn)行Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析，結(jié)果顯示，分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及l(fā)ncRNA CASC11表達(dá)均是小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響因素（HR=1.554、1.451、2.389、1.249，P＜0.01）。（表2）

表2 小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析

3 討論

小細(xì)胞肺癌具有淋巴細(xì)胞型、中間細(xì)胞型以及混合型3種亞型，疾病危險(xiǎn)因素與吸煙、遺傳以及環(huán)境因素等有關(guān)[5-6]。患者癥狀與非小細(xì)胞肺癌相似，如咳血、胸痛、氣喘等[7]。相較非小細(xì)胞肺癌，小細(xì)胞肺癌病灶倍增速度更快，惡性程度更高，轉(zhuǎn)移時(shí)間更早，并且異常內(nèi)分泌綜合征發(fā)生率更高[8-9]。基于這種病理特征，小細(xì)胞肺癌治療方案以全身性化療、手術(shù)等為主。雖然小細(xì)胞肺癌早期對(duì)放化療具有較高敏感性，但至今臨床依然無法治愈本病[10]。因此，探究小細(xì)胞肺癌病理機(jī)制，分析本病早期診斷及預(yù)后評(píng)估方法，并尋找靶向治療新方向成為臨床研究熱點(diǎn)。

lncRNA因基本不參與蛋白質(zhì)編碼，而被認(rèn)為是基因轉(zhuǎn)錄的“噪音”[11]。但近些年的研究顯示，lncRNA的核苷酸鏈具有特定、復(fù)雜的結(jié)構(gòu)空間，可為蛋白質(zhì)結(jié)合提供大量位點(diǎn)，同時(shí)還可借助堿基互補(bǔ)配對(duì)原則與DNA、RNA特異性、動(dòng)態(tài)性結(jié)合，并調(diào)控多種基因表達(dá)[12-13]。lncRNA可通過多種層面參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，其不但是腫瘤分子水平診斷的重要標(biāo)志物，還是基因治療以及預(yù)后評(píng)估的重要介質(zhì)[14]。lncRNA CASC11是位于人染色體8q24區(qū)域上的一種lncRNA，具有誘導(dǎo)MYC基因位點(diǎn)的遠(yuǎn)程染色質(zhì)環(huán)生成功能，并促進(jìn)MYC啟動(dòng)子與增強(qiáng)子相互作用。有研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者lncRNA CASC11高表達(dá)可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移能力，并導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶的敏感性下降[15]。還有研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11表達(dá)水平顯著下降，并且其表達(dá)水平與腫瘤轉(zhuǎn)移與否密切相關(guān)[16]。本研究中，小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11表達(dá)水平明顯低于正常肺組織，表明lncRNA CASC11低表達(dá)與小細(xì)胞肺癌密切相關(guān)，這與前述研究結(jié)果相似。本研究還發(fā)現(xiàn)，廣泛期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11低表達(dá)率明顯高于局限期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，表明lncRNA CASC11低表達(dá)還與小細(xì)胞肺癌分期、淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示臨床或可通過檢測(cè)lncRNA CASC11分析小細(xì)胞肺癌患者分期、淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA CASC11低表達(dá)患者無進(jìn)展生存時(shí)間和總生存時(shí)間分別為11個(gè)月和18個(gè)月，分別短于lncRNA CASC11高表達(dá)患者的16個(gè)月和26個(gè)月，表明lncRNA CASC11表達(dá)水平還與小細(xì)胞肺癌患者生存期密切相關(guān)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析結(jié)果顯示，分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及l(fā)ncRNA CASC11表達(dá)是小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響因素。

hnRNP-K蛋白屬于hnRNP家族，主要表達(dá)于真核生物體內(nèi)，該蛋白具有多種生物活性，如RNA轉(zhuǎn)錄、DNA復(fù)制及重組以及前體mRNA剪接等[17]。大多數(shù)hnRNP家族蛋白被證實(shí)與多種腫瘤密切相關(guān)。hnRNP-K具有l(wèi)ncRNA CASC11結(jié)合能力，并且lncRNA CASC11可調(diào)控hnRNP-KmRNA的穩(wěn)定性。有研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA CASC11可通過增強(qiáng)hnRNP-KmRNA的穩(wěn)定性增強(qiáng)hnRNP-K表達(dá)水平，而hnRNP-K對(duì)lncRNA CASC11的表達(dá)具有反作用[18]，該學(xué)者推測(cè)lncRNA CASC11與hnRNP-K兩者間的正反饋?zhàn)饔每赡芘c其復(fù)合物介導(dǎo)的下游基因有關(guān)，但兩組結(jié)合后影響腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制尚不明確。

本研究對(duì)小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11表達(dá)水平及其意義進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)lncRNA CASC11表達(dá)水平與小細(xì)胞肺癌分期、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)，lncRNA CASC11或可成為小細(xì)胞肺癌分期、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后的評(píng)估指標(biāo)。此外，lncRNA CASC11可能通過hnRNP-K蛋白參與小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展，這或可成為小細(xì)胞肺癌的靶向治療新方向。

綜上所述，小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA CASC11表達(dá)明顯降低，與臨床特征及預(yù)后有一定關(guān)系，值得進(jìn)一步研究。