急性白血病患兒血清轉鐵蛋白受體的表達變化及其意義

許惠敏，馬志英，郭楠

開封市兒童醫院兒童重癥監護室，河南 開封 475000

鐵元素是細胞增殖所必須的元素，與細胞周期調控、遺傳物質合成和表達、能量代謝等均有密切關系[1]。鐵蛋白（ferritin，SF）是水溶性氧化鐵磷酸化合物，其主要功能為儲存鐵。研究表明，鐵代謝異常與腫瘤細胞的增殖密切相關[2]。腫瘤組織分化早期，幼稚細胞增殖與分化需要大量鐵元素參與，腫瘤細胞轉鐵蛋白受體（transferrin receptor，TFR）大量表達，因而推測轉鐵蛋白（transferrin，TF）、TFR可能與腫瘤的發生發展有著一定聯系，可用于評估腫瘤的侵襲程度。本研究對急性白血病患兒血清TFR的表達情況進行分析，并對其與白血病患兒臨床特征、療效和預后的關系進行探討，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年1月至2018年1月開封市兒童醫院收治的82例急性白血病患兒為觀察組，所有患兒均經外周血細胞分析、骨髓形態學、免疫學等檢查確診為急性白血病；符合急性髓系白血病（復發難治性）中國診療指南（2011年版）[3]中相關診斷標準，且均未合并其他系統腫瘤、肝腎功能嚴重不全、認知障礙或精神疾病。觀察組中，男52例，女30例；年齡2～16歲，平均（10.95±4.27）歲；疾病類型：急性淋巴細胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）31例，急性髓細胞性白血病（acute myeloid leukemia，AML）51例；初診53例，復發29例；白細胞（white blood cell，WBC）計數為（16～128）×109/L，平均WBC計數為（32.15±26.34）×109/L；白血病細胞計數為（0.62～1.35）×109/L，平均白血病細胞計數為（1.05±0.31）×109/L；白血病危險分級：低危20例，中危29例，高危33例。另外，選取同期于開封市兒童醫院行健康體檢的健康兒童50例為對照組，均排除缺鐵性貧血、先天性TF缺乏等疾病；對照組中，男29例，女21例；年齡1～15歲，平均（11.03±5.02）歲。兩組受試者的年齡、性別比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審核批準，所有受試者及家屬均對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采集觀察組患兒入院2天內及對照組受試者體檢時的清晨空腹靜脈血5 ml，分別注入2個試管中，一份用于檢測血清中SF、TF、TFR蛋白水平，一份用于檢測TFRmRNA水平。采用酶聯免疫吸附（enzyme-linked immunoreaction，ELISA）法檢測血清SF、TF、TFR蛋白水平，試劑盒購自Beckman公司。TFRmRNA檢測標本經過硼酸鈉溶液重懸，加入淋巴細胞分離液，經離心后取中間白霧狀即單個核細胞層，經磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌、離心，去上清，加入3 ml PBS緩沖液，進行細胞計數。收集細胞加入0.5 ml TRIzol試劑（購自美國Invitrogen公司），經勻漿、離心處理后取無色水相層，沉淀RNA，再次離心取沉淀物，洗滌，離心棄上清，室溫下晾至沉淀物干燥，Nanodrop ND-2000紫外分光光度法鑒定RNA純度和完整性。Reverse Transcription Ki（t購自美國GIBICOL公司）將符合A260nm/A280nm≥1.8的RNA逆轉錄為cDNA，采用實時定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）系統定量7500 PCR儀（購自美國ABI公司）進行逆轉錄-聚合酶鏈反應（reverse transcription-polymerase，RT-PCR）反應，Primer Premier 6.0進行引物設計。瓊脂糖凝膠電泳，以β-actin作為內參，紫外燈下觀察結果。2-ΔΔCt法計算TFRmRNA的相對表達量。RT-PCR反應條件：95 ℃ 30 s，95 ℃ 15 s，72 ℃ 35 s，共32個循環。

1.3 治療方法及療效評價標準

AML患兒采用高三尖杉酯堿+阿糖胞苷治療，ALL患兒采用柔紅霉素+長春新堿+強的松+門冬酰胺酶治療。療效評價：治療結束2周，骨髓穿刺復查骨髓細胞形態，參照血液病學診斷及療效標準[4]分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、未緩解（NR）。所有患兒均隨訪至2019年1月，統計患兒死亡、腫瘤復發的比例，及無疾病進展生存率（progressive-free survival rate，PFS）。

1.4 統計學分析

采用SPSS 25.0軟件進行數據分析。計量資料經檢驗符合正態分布，以均數±標準差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，兩樣本比較采用獨立樣本t檢驗。計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；Cox比例風險回歸模型分析TFRmRNA是否為急性白血病患兒預后的危險因素。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清SF、TF、TFR蛋白和TFRmRNA水平的比較

觀察組受試者血清中SF、TF、TFR蛋白水平均明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.01）；觀察組受試者的TFRmRNA水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 不同組別受試者血清SF、TF、TFR蛋白和TFR mRNA水平的比較（±s）

表1 不同組別受試者血清SF、TF、TFR蛋白和TFR mRNA水平的比較（±s）

組別觀察組（n=82）對照組（n=50）t值P值SF（ng/ml）361.24±32.15 102.01±16.32 52.952 0.000 TF（g/L）3.67±0.25 2.13±0.19 37.441 0.000 TFR（mg/L）3.26±0.62 1.13±0.43 21.348 0.000 TFR mRNA 3.26±0.43 1.03±0.25 33.363 0.000

2.2 TFRmRNA 水平與急性白血病患兒臨床特征的關系

不同WBC計數、白血病細胞計數、白血病危險分級急性白血病患兒的TFRmRNA相對表達量比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）；不同性別、年齡、白血病類型急性白血病患兒的TFRmRNA相對表達量比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表2）

2.3 不同治療時間和療效急性白血病患兒TFR mRNA 水平的比較

治療后，急性白血病患兒的TFRmRNA相對表達量為（1.85±0.35），明顯低于治療前的（3.29±0.43），差異有統計學意義（F=23.159，P＜0.01）。治療后，82例急性白血病患兒中，CR 35例，PR 29例，NR 18例，分別作為CR組、PR組和NR組；CR組、PR組、NR組患兒的TFRmRNA的相對表達量分別為（2.43±0.26）、（3.33±0.45）、（4.71±0.52），差異有統計學意義（F=195.181，P＜0.01）；CR組急性白血病患兒的TFRmRNA相對表達量低于PR組和NR組，PR組急性白血病患兒的TFRmRNA相對表達量低于NR組，差異均有統計學意義（t=9.998、21.379、9.628，P＜0.05）。

表2 不同臨床特征急性白血病患兒TFR mRNA水平的比較

2.4 TFRmRNA水平與急性白血病患兒預后的關系

截至隨訪結束，82例急性白血病患兒的隨訪時間為6～36個月，中位隨訪時間為25個月，隨訪期間6例患兒死亡，16例患兒復發；PFS為73.2%（60/82）；Cox比例風險回歸模型分析結果顯示，TFRmRNA為急性白血病患兒預后的危險因素（RR=1.276，95%CI：1.105～1.467，χ2=13.562，P＜0.05）。

3 討論

鐵是人體發育所必需的微量元素，鐵通過腸道吸收與TF結合輸送至全身，并與TFR結合進入細胞內，參與細胞的生長、增殖等過程。鐵代謝異常可影響正常細胞及腫瘤細胞的增殖，導致機體出現貧血和免疫力下降[5]，因此，鐵代謝異常被認為是腫瘤發生的危險因素之一。SF作為反映機體貯存鐵的指標，與肺癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤的發生、發展密切相關[6-7]。相關研究表明，乳腺癌患者血清中SF呈高表達狀態，且其表達水平與乳腺癌患者的病理分級密切相關，表明血清SF在乳腺癌診斷中可能具有較高的臨床價值[8-9]。白血病屬于造血系統惡性腫瘤，患者多出現貧血、感染等癥狀，白血病細胞可浸潤機體的各個組織器官，導致多臟器、系統功能衰竭，臨床病死率較高[10-11]。血清TFR與急性白血病是否存在某種聯系尚需更多臨床研究證實。

本研究結果顯示，觀察組患兒的血清SF、TF、TFR蛋白水平及TFRmRNA水平均明顯高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.01）；其原因可能為白血病患兒機體鐵處于高度代謝狀態，腫瘤細胞大量增殖、分化均需要大量鐵元素參與，因此急性白血病患兒TFR表達水平明顯升高，以促進鐵元素向腫瘤細胞內轉運。本研究進一步觀察發現，不同WBC計數、白血病細胞計數、白血病危險分級急性白血病患兒的TFRmRNA相對表達量比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）；提示TFRmRNA水平與急性白血病患兒的病情嚴重程度、危險程度密切相關，TFRmRNA水平可以反映白血病患兒的病情。相關研究指出，白細胞可以分泌白細胞介素-4、白細胞介素-6等炎性因子，炎性因子與細胞膜受體結合可以促進TFR轉運至細胞外，白血病患兒機體炎癥程度越高，血清TFR水平越高，患兒貧血程度越嚴重，患兒的病情危險程度越大[12-14]；還有研究顯示，白血病患兒白血病細胞數量增多時，TF的合成和分泌也增多，導致血清TF水平明顯升高[15-16]。本研究結果顯示，白血病細胞計數高（≥0.8×109/L）的急性白血病患兒TFRmRNA表達水平高于白血病細胞計數低（＜0.8×109/L）的患兒（P＜0.05），提示TFRmRNA可能可以用于評估急性白血病患兒的病情。

本研究對TFRmRNA表達水平與急性白血病患兒臨床療效的關系進行分析，結果發現，治療后，急性白血病患兒的TFRmRNA相對表達量明顯低于治療前（P＜0.01），且CR組患兒的TFRmRNA相對表達量低于PR組和NR組（P＜0.05），表明化療后，急性白血病患兒的鐵代謝程度降低，貧血癥狀改善，提示TFRmRNA可以較好地反映白血病患兒的臨床治療效果，與相關研究結果一致[17-18]。已有研究顯示，SF相關檢測指標在成人白血病的療效評估中具有較好的價值[19]，但關于TFRmRNA與急性白血病患兒預后關系的研究較少。本研究對82例急性白血病患兒進行隨訪，并經Cox比例風險回歸模型分析，結果顯示TFRmRNA為急性白血病患兒預后的危險因素，提示TFRmRNA表達水平越低，患兒的PFS越高，TFRmRNA是影響白血病患兒預后的重要危險因素。翟勇等[20]對50例乳腺癌患者的血清TFR水平與5年生存率的關系進行分析，結果發現生存患者的血清TFR水平低于死亡患者，血清TFR水平與患者的5年生存率呈負相關，與本研究結果相似。上述研究結果提示，TFRmRNA表達水平與急性白血病患兒的預后有關，可能作為評價白血病患兒預后的重要指標。

綜上所述，急性白血病患兒TFRmRNA水平明顯增高，其表達水平與患兒的病情嚴重程度、臨床療效和預后均密切相關，臨床可通過檢測TFRmRNA水平輔助診斷急性白血病、評估患者病情、評價臨床療效和預測預后。