太陰病(脾陽虛證)脾與胰腺組織結構變化實驗研究

李秉岳，李 杰，鄭 靖，吳 萍，王仁嬡，張發斌，趙協慧，楊 艷，陳湘宏，劉占厚，高 威

(青海大學 醫學院，青海 西寧 810001)

中醫學認為脾胃主運化和受納，若脾的功能發生障礙，則出現受納、吸收、轉輸等功能失常，故脾胃與現代醫學的消化系統的關系很密切。現代醫學認為，飲食物的消化、吸收不僅是胃腸的主要功能，而且與胰腺有著密切的關系。為了弄清中醫學的脾胃與胰腺是否存在相關性，我們通過觀察太陰病(脾陽虛證)模型大鼠脾與胰腺組織形態學變化，探討太陰病(脾陽虛證)脾與胰腺的相關性。

1 材料

1.1 實驗動物

健康未孕SD大鼠840只，購自甘肅中醫藥大學科研實驗中心，許可證號：SYXK(甘)2011-0001，合格證號：62001000000133。雌雄各半，質量180～220 g。

1.2 藥物制備

造模用大承氣湯：按《傷寒論》配伍，芒硝、大黃、枳實、厚樸(購自青海中藏藥材市場)比例為3∶4∶5∶5，參照王琦所著《經方應用》折合今量。大黃粉碎后冷水浸泡12 h，絞汁、水浴加熱濃縮至所需劑量[1]；枳實、厚樸冷水浸泡12 h，于煎藥機中煮沸40 min后三層紗布過濾，如此煎煮2次，將2次濾液合并、水浴加熱濃縮至所需劑量；最后將大黃液、枳實厚樸混煎液、芒硝液混合，使得混合液含生藥2 g/mL，4 ℃冰箱保存備用。

1.3 儀器

常規手術器械；PL203電子天平(上海梅勒特-托利多儀器有限公司)；100 mL量筒，1 000 mL量筒；5 L燒杯；DC-NSG多功能提取濃縮機組(上海達程實驗設備有限公司)；電熱恒溫水溫箱(北京西城區醫療器械廠)；電熱恒溫培養箱(上海公私合營國光醫化儀器廠)；Leitz石蠟切片機(德國Leitz公司)；載玻片和蓋玻片；倒置相差顯微鏡(日本Olympus公司)。

2 方法

2.1 分組

所購SD大鼠到達實驗室后，置于恒溫(20±2) ℃，相對濕度為(40±5)%的環境中，適應性分籠喂養3天后，剔除不健康大鼠；將健康大鼠隨機分為正常組240只、模型組288只、干預組288只，藥物組隨機均分為藥物1組、藥物2組，各組均雌雄各半分籠；實驗組、藥物組大鼠進行太陰病(脾陽虛證)造模。每組實驗動物再隨機分成28組，每組10～13只。

2.2 造模

根據文獻[2]及預實驗經驗，采用大承氣湯室溫灌胃法造模。造模過程分為兩個階段，共12天。第一階段1～6天，模型組、藥物組大鼠在室溫下用大承氣湯灌胃，劑量為3.5 mL/200g，1次/d，以損傷大鼠脾氣，空白組大鼠以相同劑量的生理鹽水灌胃；第二階段7～12天，模型組、藥物組大鼠在室溫下用大承氣湯灌胃，劑量為4.0 mL/200g，以損傷大鼠脾陽，空白組大鼠以相同劑量的室溫生理鹽水灌胃。造模過程中大鼠均采用自由取食飲水，3天稱量1次體重。

2.3 理中湯干預

大鼠造模成功后，將干預組大鼠在室溫下用理中湯灌胃，劑量為3.5 mL/200 g，連續干預12天。

2.4 標本采集

正常組、模型組均從造模成功后第2天開始，在以后的12天中，每天各隨機抽取10～13只大鼠，斷頭處死大鼠并迅速解剖取出脾臟和胰腺；干預組于造模成功后第2天開始，以后12天中，分別予理中湯干預12 h，然后隨機抽取10～13只斷頭處死，取脾臟和胰腺。所有大鼠處死前均稱重，記錄體重。

2.5 標本處理及制備

2.5.1 脾臟與胰腺的處理 用0.9%生理鹽水洗凈表面血跡，然后置于0.4%中性甲醛中固定。

2.5.2 病理切片 脾臟、胰腺固定24 h后制作病理切片。具體過程如下：①取材：脾臟、胰腺縱切，取一塊厚約2 mm左右組織，與標簽紙一起置于專用銅盒中；②脫水：將銅盒放在不同濃度乙醇中浸泡；③浸蠟：脫水后將銅盒依次置于苯蠟、蠟Ⅰ、蠟Ⅱ中浸泡；④包埋：浸蠟后打開銅盒，將組織置于裝有液態石蠟的銅格中，脾臟和胰腺平埋；⑤切片：待蠟塊冷卻后將其固定于切片機上切片，厚度5 mm。攤片，水溫48 ℃。貼片，用載玻片撈取無皺折的2片，并在載玻片打磨處用鉛筆標記。65 ℃電熱恒溫培養箱中烤片4 h；⑥HE染色：浸泡在二甲苯、梯度乙醇中脫蠟，然后浸泡在蘇木素、伊紅中染色；⑦透明：放入梯度乙醇、二甲苯浸泡脫水透明；⑧封片觀察：加拿大樹膠封片，蓋上蓋玻片，在光學顯微鏡下觀察并記錄結果。

3 結果

3.1 脾臟的組織病理學觀察

光鏡下觀察造模結束第1天的正常組大鼠脾臟，鏡下可見：脾臟被膜清楚、無增厚，紅、白髓質邊緣結構正常，脾小體結構正常，無明顯增生及萎縮，脾竇及血管無明顯擴張。觀察造模結束第1天后模型組大鼠的脾臟可見：脾臟被膜清楚、無增厚，紅、白髓質邊緣結構正常，脾小體結構正常，無明顯增生及萎縮，脾竇及血管無明顯擴張，但脾小梁靜脈血管明顯擴張充血；理中湯干預后第12天，干預組大鼠脾小梁靜脈血管無明顯擴張充血，與正常組比較，無明顯病理改變，說明理中湯干預對脾臟組織有明顯的改善作用。見圖1。

造模結束后第1天正常組40× 造模結束后第1天后模型組20× 干預第12天后干預組20×

3.2 胰腺的組織病理學觀察

光鏡下觀察造模結束第1天正常組大鼠的胰腺組織，鏡下可見：胰腺組織中胰島數及島內細胞較多，細胞排列整齊，胞漿豐滿，結構清楚，胰島毛細血管蟠曲呈球狀，血管管徑基本一致，無擴張現象；觀察造模結束后第1天模型組大鼠的胰腺組織可見：胰腺組織中胰島數及島內細胞數無明顯變化，但少數細胞呈空泡狀，胰島毛細血管無擴張。理中湯干預12天后，胰腺組織中胰島數及島內細胞數無明顯變化，少數空泡狀細胞消失，細胞分布均勻，核大小基本相等，無核固縮，胰島未見毛細血管擴張，與正常組比較，無明顯病理改變，說明理中湯干預對胰腺組織有明顯的改善作用。見圖2。

造模后第1天正常組20× 造模后第1天模型組40× 干預第12天干預組 40×

4 討論

有學者認為無論是從解剖實質、生理功能還是病理變化來看，胰腺應屬于“脾”的一部分[3，4]。

4.1 脾與胰腺生理功能的相關性

就生理功能而言，中醫學認為，脾的主要功能是運化，即指胃在受納、腐熟水谷，將之變為食糜后，再通過胃的“降濁”功能將食糜降至小腸，脾(小腸)進一步將之化為水谷精微(“化”)，然后經過脾之升清功能將其運達全身(“運”)。現代醫學認為，飲食物消化首先是胃通過容受性舒張，接受來自食管的食物(“受納”)，并通過推進性蠕動進行初步消化，使之成為食糜(“腐熟”)。食糜在小腸內進行進一步的消化，而消化的過程主要依靠消化酶的作用來完成。消化酶主要來源于胰腺的外分泌液——胰液。胰液中的胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶能將糖類、脂類、蛋白質三大類物質分解成細小、易通過腸黏膜吸收的微粒或小分子物質，這與中醫脾主“化”(化生精微)的功能十分相似。上述微粒或小分子物質可被腸黏膜吸收進入血液循環，進而運達全身。這與中醫脾主“運”(運達全身)的功能又十分相似，這些與中醫學“脾主運化”的功能相契合，胰的功能可納于“脾”之“升清”“散精”功能范疇之中，即運化水谷精微、運行布散津液精氣。由此可見現代醫學的胰腺與中醫學之“脾”在生理功能上的關系是非常密切的。

清末至民國時期醫家張山雷先生在《難經匯注箋正·四十二難》中指出：“謂有散膏半斤，則脾不中虛，膏何可貯？今西國學者，謂胃后有甜肉一條……所生之汁，如口中津水，則古所謂散膏半斤，蓋即指此。古之所謂脾者，固并此甜肉而言……亦所以助消化者，正與古人脾運化之義符合。”[5]現代著名中醫學家任繼學先生則對“散膏”有著進一步的論述，任繼學指出：“散膏乃由先天之精化生而成，其體有多種肌核組成，內通經絡血脈，為津、精之通道，外通玄府，以行氣液，故人體內外之水精，其升降出入皆由‘散膏’行之。”[6]按照此理論，散膏相當于現今之胰腺，其功能與脾相吻合。

4.2 脾與胰腺病理變化的相關性

若太陰病(脾陽虛證)發生時，脾陽虛衰，運化無權，“脾”之運化水谷、運化水濕的功能失職，則可出現納少腹脹、腹痛腹瀉或完谷不化、或肢體浮腫等癥狀。這與現代醫學胰臟外分泌功能障礙、胰酶不足時引起的“胰源性腹瀉”的狀況相一致。患者可表現為消化功能不良、腹水、腹痛、黃疸、發育遲緩、消瘦等。季鳳清等[7]對脾虛大鼠胰腺進行組織化學研究發現，脾虛組胰腺泡細胞的RNA、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、三磷酸腺苷酶、葡萄糖-6-磷酸酶和硫胺素焦磷酸酶含量和活性均低于對照組，H.E染色標本中脾虛組胰腺泡細胞中酶原顆粒比對照組減少，說明胰腺泡細胞能量代謝降低。胰腺泡細胞在合成消化酶的過程中，要消耗大量的能量，而能量供應不足，勢必影響消化酶的合成，導致消化酶的合成下降。這些研究表明脾虛證時胰腺外分泌功能減弱可能是導致消化吸收障礙的重要原因之一，此與脾虛證出現一系列消化功能下降和失常有密切關系。當脾虛動物經加味四君子湯治療后，胰腺泡細胞RNA和這幾種酶活性可恢復到接近對照組水平；與自然恢復組相比，腺細胞功能狀態與正常對照組相近，表明加味四君子湯對脾虛證有良好的治療作用。

本研究的實驗結果也表明：太陰病(脾陽虛證)模型大鼠造模結束后第1天脾臟組織中脾小梁靜脈血管明顯擴張充血；同時在模型組大鼠的胰腺組織中出現少數細胞呈空泡狀。而在理中湯干預第12天后，干預組大鼠脾臟組織中脾小梁靜脈血管無明顯擴張充血；同時干預組大鼠胰腺組織中少數空泡狀細胞消失。說明理中湯干預不僅對脾臟組織有明顯的改善作用，同時對胰腺組織也有明顯的改善作用，這些變化是同步的。究其原因，主要是由于：太陰病的主要病機是脾陽虛損、脾氣不升、寒濕內生。一方面由于寒性收引凝滯，使氣血凝結阻滯、澀滯不通，體內產生瘀血，這是脾臟組織充血形成的主要原因；另一方面由于脾與胰腺的關系較為密切，當脾陽虛損、運化失司，脾氣不升時，勢必會影響到胰腺，因此在組織結構上出現少數細胞呈空泡狀變化，在功能上使胰腺的分泌功能低下，表現為胰腺外分泌功能障礙、胰酶不足，導致“胰源性腹瀉”的發生。而理中湯具有溫中陽、祛寒邪、益脾氣、助運化的作用，使脾胃升清降濁機能得以恢復。表現為氣血在陽氣的推動下，運行暢通，瘀血得散；由于脾陽恢復，運化功能正常，對胰腺的影響得以消除，因此在理中湯干預12天后，脾臟充血現象消失的同時大鼠胰腺組織中少數空泡狀細胞也隨之消失，二者的變化是同步的。這從另一個角度進一步說明了脾與胰腺之間存在密切的聯系，即機體發生病證時，它們的組織結構有著同步的變化；當針對病證進行治療后，它們的組織結構改善的變化又是同步的。

綜上所述，從脾與胰腺的生理功能、病理變化及組織結構的實驗結果來看，太陰病(脾陽虛證)脾與胰腺有著密切的聯系。中醫學之“脾臟”與現代醫學的胰腺關系密切，胰腺應視為“脾”的一部分。此理論為臨床治療太陰病(脾陽虛證)提供了有益參考。