絲裂原活化蛋白激酶4和波形蛋白聯合檢測對子宮內膜癌的早期診斷價值

王 冰, 楊 勇

(陜西省安康市中心醫院, 1. 婦科; 2. 核醫學科, 陜西 安康, 725000)

子宮內膜癌屬于婦科常見惡性腫瘤，是造成患者死亡的主要婦科腫瘤之一，相關數據顯示，每年大約有20萬新發病例。若未及時發現并進行準確診斷，隨著疾病進展，癥狀不斷加重，給患者帶來較大傷害，甚至危及生命安全，因此臨床選擇有效檢測方式成為關鍵[1]。絲裂原活化蛋白激酶4(MAP2K4)屬于編碼MAP激酶信號家族基因的主要成員之一，由于絲裂原活化蛋白激酶通道能夠介導細胞反應的信號系統，廣泛存在于多類細胞中，在細胞生長發育及凋亡中具有重要意義。若多種激酶組分出現異常活化可導致疾病發生[2-3], MAP2K4被激活后出現雙重特異性，促進細胞凋亡并使其發生惡性轉化。絲裂原活化蛋白激酶信號通路是細胞外信號受到刺激后產生細胞核反應的共同通路，也是介導上皮細胞、間充質轉化的細胞內信號分子，其中上皮細胞、間充質轉化主要是上皮細胞在特殊狀況下發生間質細胞分化，其特征以上皮細胞黏附分子表達降低為主，同時可能發生波形蛋白的重新表達[4-5]。雖然其在炎癥、癌癥轉移等疾病中具有重要作用，但關于MAP2K4和波形蛋白同時表達的報道較少。本研究探討MAP2K4和波形蛋白聯合檢測在子宮內膜癌早期診斷中的意義，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2016年5月—2018年1月納入的103例子宮內膜癌患者作為研究對象，年齡38～57歲，平均(3.58±1.02)歲; 絕經49例，未絕經54例; 組織學分型: 低分化者21例，中分化者35例，高分化者47例; 國際婦產科聯合會(FIGO) Ⅰ期81例, Ⅱ、Ⅲ期22例; 淋巴轉移者12例，未轉移者91例; 肌層浸潤深度≥1/2者16例，肌層浸潤深度<1/2者87例。分別提取所有患者的子宮內膜癌組織標本，每份標本分成2份，分別檢測MAP2K4、波形蛋白以及二者聯合檢測的陽性表達情況。

1.2 研究方法

試劑選擇SP試劑盒、兔抗人MAP2K4單克隆抗體、兔抗人波形蛋白單克隆抗體、二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒等。收集所有研究對象的子宮內膜癌組織標本，選擇4%中性福爾馬林固定，利用石蠟包埋，保持4 μm厚度持續切片并烤干。嚴格參照鏈霉親合素-生物素酶復合物法，免疫組化操作均遵照試劑盒說明書進行，一抗按照1∶100稀釋。另外，選擇已知的陽性片作為對照，而磷酸鹽(PBS)緩沖液代替一抗成為空白對照。其中MAP2K4和波形蛋白的表達均定位于胞漿，也可能出現胞核著色，細胞漿或者核內存在棕黃色顆粒為陽性。選擇400倍顯微鏡隨機觀察視野，按照陽性細胞數量所占比例、著色強度評分，采用所有得分相乘后的總分評價陽性結果。

1.3 觀察指標

① 陽性細胞所占比例: 無記為0分, ≤10%記為1分, 11%～50% 記為2分, 51%～75%記為3分, >75%記為 4分; ② 著色強度評分: 棕褐色記為3分，棕黃色記為2分，淡黃色記為1分，無色記為0分。判斷免疫組化的結果主要依照上述2個方面進行評價，若 ① ② 二者得分的乘積為0～1分記為陰性(-)，若乘積為2～3分記為陽性(+)，乘積≥4分記為強陽性()。選擇2名經驗豐富的專業人員對免疫組化染色結果進行獨立讀片，若出現意見分歧可討論后提出統一結果。

1.4 統計學方法

2 結 果

2.1 MAP2K4與波形蛋白的表達及臨床病理

因素的相關性

MAP2K4檢測陽性24例，強陽性15例，陰性64例; 波形蛋白檢測陽性32例，強陽性35例，陰性36例, MAP2K4檢測陽性率為37.86%(39/103), 低于波形蛋白的陽性率65.05%(67/103), 且陽性細胞所占比例積分及著色強度評分低于波形蛋白檢測，差異均有統計學意義(P<0.05), 見表1。

MAP2K4的陽性表達與患者的FIGO分期、淋巴轉移有顯著相關性(P<0.05), 而波形蛋白的陽性表達與患者的FIGO分期、組織學分型、浸潤深度及淋巴轉移有顯著相關性(P<0.05), 見表2。

表1 MAP2K4與波形蛋白陽性細胞所占比例積分及著色強度評分對比 分

與MAP2K4檢測比較, *P<0.05。

表2 MAP2K4與波形蛋白表達及臨床病理因素的相關性(n=103)

2.2 靈敏度、特異性

MAP2K4檢測的靈敏度、特異性分別為71.84%(74/103)、73.79%(76/103); 波形蛋白檢測分別為80.58%(83/103)、85.44%(88/103); 聯合檢測分別為92.23%(95/103)、95.15%(98/103)。MAP2K4和波形蛋白聯合檢測的靈敏度、特異性，高于單一檢測，差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討 論

近年來，中國子宮內膜癌的患病率逐年升高，其發生率約占女性生殖系統惡性腫瘤的第2位，已成為威脅女性身心健康及日常生活的主要疾病。若能夠盡早發現并及時給予有效治療，可快速穩定病情，延長生存周期[6]。MAP2K4屬于絲裂原活化蛋白激酶信號傳導途徑中主要成員，能夠刺激P38 MAPK、c-Jun N末端激酶，并主要定位于染色體片段，通常在人上皮性腫瘤上，尤其是乳腺癌、卵巢癌按照7%～10%的速度丟失[7-8]。因此, MAP2K4被公認為腫瘤抑制基因，但也曾有報道[9]提出MAP2K4對部分腫瘤可能存在促進作用。

本研究結果發現, MAP2K4檢測陽性率低于波形蛋白陽性率65.05%(67/103), 且陽性細胞所占比例積分及著色強度評分較波形蛋白顯著更低(P<0.05), 這提示了波形蛋白在子宮內膜癌組織中的陽性表達相對更高。進一步分析二者與臨床病理因素的相關性后發現, MAP2K4的陽性表達與患者的FIGO分期、淋巴轉移有關，而波形蛋白的陽性表達與患者的FIGO分期、組織學分型、浸潤深度及淋巴轉移有關。說明MAP2K4及波形蛋白均與患者的病情進展有一定關聯。事實上，波形蛋白屬于中間絲的常見蛋白質，可廣泛分布于正常間質細胞中，具有保證細胞完整的作用，并具有抵抗應力[10-12]。臨床上曾有較多報道表明，波形蛋白在多種上皮癌中出現過表達，可加速病灶生長，導致預后不良。由于上皮細胞、間充質轉化與胚胎發育密切相關，因此在腫瘤轉移過程中也存在一定作用，使上皮細胞失去活性，減少基質的黏附，導致細胞變形后活性增強，同時得到間質細胞的特性，提升腫瘤細胞的攻擊能力，促進遠處轉移[13-15]。而波形蛋白屬于β鏈蛋白/T細胞因子中的靶點，并在細胞黏附、轉移及細胞傳導中具有重要意義。若其表達在上皮細胞、間充質轉化中提高，說明存在腫瘤轉移現象，而此種現象的發生主要可能是由于其與MAP2K4共同參與到了絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路這一介導細胞反應的重要信號通路而致使腫瘤轉移的。此外，本研究結果表明, MAP2K4和波形蛋白聯合檢測的靈敏度、特異性，顯著高于單一檢測，提示MAP2K4、波形蛋白在子宮內膜癌中均具有一定的診斷價值，同時可用來評價疾病發展及轉移情況，為治療及預后提供前提。其中波形蛋白可促進疾病發展、分化、肌層浸潤、淋巴結轉移情況，可成為評估疾病的主要指標[16], 而AP2K4則可較好地反映出腫瘤轉移情況。因此, MAP2K4和波形蛋白檢測均在子宮內膜癌中具有不同程度的診斷價值，但單一檢測的靈敏度、特異性并不理想，聯合檢測后可增強診斷結果的準確性，為治療及預后提供保障。綜上所述, MAP2K4和波形蛋白聯合檢測可預測疾病發展、浸潤及轉移情況，對子宮內膜癌的治療具有重要作用。