Survivin、AQP9和HLA-G在子癇前期患者中的表達水平及相關性

曾玲娟 湯艷 喻玲 丁依玲 賴微斯 胡蕓

1中南大學湘雅二醫院婦產科（長沙410000）；2湖南省婦幼保健院B 超室（長沙410008）

子癇前期是一種妊娠并發癥，嚴重危害產婦和嬰兒的健康，其發病機制目前尚未明確。臨床研究指出，胚胎滋養細胞凋亡以及其侵襲力異常是造成子癇前期發病重要原因［1］。Survivin 是近幾年新發現的凋亡抑制蛋白，Smac 與Survivin 之間具有緊密的聯系［2］，目前關于Survivin 是否參與子癇前期發病，相關研究較少。水通道蛋白9（aquaporin9，AQP9）在細胞的分化和遷移過程中發揮著重要作用，AQP9 顯示高表達，會導致滋養細胞加速凋亡，其遷移能力降低，抑制細胞分化和融合，造成胎盤組織發生缺血缺氧［3］。有研究指出，子癇前期的發生發展主要和絨毛膜外滋養細胞的侵襲能力下降有關，人類白細胞抗原G（human leukocyte antigen G，HLA-G）屬于HLA-Ⅰ類分子，對母體與胎兒的免疫耐能力起到誘導作用［4-5］。本文旨在研究Survivin、AQP9 和HLA-G 在子癇前期患者中的表達水平及相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料本文選取2016年6月至2018年6月在我院就診的子癇前期患者50例，分為子癇前期組，年齡23～40 歲，平均（31.5 ± 5.1）歲，孕周30～40 周，平均（35.1±3.0）周；另外選取在我院進行產檢的健康妊娠期產婦50例作為正常組，年齡22～38 歲，平均（30.5 ± 5.3）歲，孕周28～40 周，平均（34.8 ± 3.6）周。兩組研究對象在平均年齡、平均孕周上比較，無統計學差異（P＞0.05），具有可比性。納入標準：均符合子癇前期的診斷標準；有完整的產檢記錄患者；正常孕婦無任何妊娠期合并癥。排除標準：排除有嚴重心肺功能不全的患者；排除患有精神疾病的患者；排除病例資料不全的患者，畸形胎兒患者；患者孕前患有心血管疾病并且服用治療心血管的藥物患者。本次研究均得到所有研究對象及其家屬均知情，并簽署了家屬知情同意書，且經過我院倫理委員會批準，倫理批準文號（2014）倫審批第（27）號。

1.2 方法

1.2.1 標本采集搜集孕婦分娩5 min 內留取臍帶根部的胎盤組織1 cm × 1 cm × 1 cm，使用生理鹽水將殘留的血液清洗干凈，之后使用濾紙將組織上的水分吸干，在凍存管中保存。

1.2.2 免疫透射比濁法檢測Survivin 表達水平取3 個試管，分別標記為空白管、標準管以及測定管。空白管中加入15 μL 生理鹽水和350 μL Tris緩沖液，標準管中加入15 μL CRP 定標液和350 μL Tris 緩沖液，測定管中加入15 μL 待測標本和350 μL Tris 緩沖液，對3 個試管分別搖晃混勻后，在37 ℃的環境中保存5 min，在波長340～700 nm處讀各管吸光度。之后在3 個試管中分別加入羊抗人CRP 抗血清，分別搖晃混勻后在37 ℃的環境中保存5 min，在波長340～700 nm 處讀各管吸光度，并對Survivin 水平進行計算。

1.2.3 酶聯免疫吸附測定AQP9 和HLA-G 表達水平采用酶聯免疫吸附測定檢測：50 mmol/L碳酸鹽包被緩沖液將抗原進行溶解，濃度為10-20 μg/mL，在96孔酶標板中加入100 μL/孔，4 ℃過夜保存。第二天舍棄包被液，采用PBST 洗滌3 次，沒孔中加入1%的150 μL BSA，在37 ℃環境中封閉1 h。之后采用PBST洗滌3次，在每孔中加入100 μL不同倍比稀釋度的血清，加入對照樣品，37 ℃孵育2 h。采用PBST 洗滌5 次，加入100 μL，稀釋后的HRP 標記的二抗，37 ℃孵育1 h。PBST 洗滌5 次，之后，使用顯色劑顯色20 min 后，在酶標儀上讀取A405 吸收值，從而測定AQP9和HLA-G的表達情況。

1.3 統計學方法采用SPSS 20.0 統計軟件進行分析，計量資料采用（）進行描述，兩組間比較采用實施獨立樣本t檢驗，P＜0.05 則說明差異具有統計學意義。相關性采用Pearson 相關性分析。

2 結果

2.1 正常組、子癇前期組兩組Survivin、AQP9 和HLA-G 表達水平比較如表1 所示，子癇前期組患者Survivin、HLA-G 表達水平低于正常組，AQP9表達水平高于正常組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。說明Survivin、HLA-G 可能參與子癇前期疾病發生發展。

表1 兩組Survivin、AQP9 和HLA-G 表達水平比較Tab.1 Comparison of Survivin，AQP9 and HLA-G expression levels in two groups ±s

表1 兩組Survivin、AQP9 和HLA-G 表達水平比較Tab.1 Comparison of Survivin，AQP9 and HLA-G expression levels in two groups ±s

組別正常組子癇前期組t 值P 值例數50 50 Survivin 31.42±1.04 10.13±0.49 130.361 0.001 AQP9 0.19±0.01 0.65±0.03 103.186 0.001 HLA-G 50.69±3.05 27.35±1.23 50.137 0.001

2.2 Survivin、AQP9 和HLA-G 表達水平與子癇前期患者臨床相關性比較如表2 所示，Survivin、AQP9 和HLA-G 表達水平與子癇前期患者年齡、孕周無相關性（P＞0.05）。Survivin、AQP9 和HLA-G表達水平與子癇前期患者流產次數、病情嚴重程度有關（P＜0.05）。流產次數≥3 次、重度子癇患者Survivin、HLA-G 表達水平較低，AQP9 表達水平較高，具有統計學差異（P＜0.05）。說明Survivin、HLA-G、AQP9 表達水平與子癇前期患者流產、子癇程度有關。

2.3 Survivin、AQP9 和HLA-G 之間的相關性分析如表3 所示，Survivin、AQP9 和HLA-G 之間進行相關性分析，Survivin 和AQP9 之間呈負相關，AQP9 和HLA-G 之間之間呈負相關，Survivin 和HLA-G 之間之間呈正相關，具有統計學差異（P＜0.05）。說明Survivin、AQP9 和HLA-G 之間具有相關性，參與了子癇前期的發病過程。

表2 Survivin、AQP9 和HLA-G 表達水平與子癇前期患者臨床相關性比較Tab.2 Comparison of Survivin，AQP9 and HLA-G expression levels with clinical correlation in patients with preeclampsia±s

表2 Survivin、AQP9 和HLA-G 表達水平與子癇前期患者臨床相關性比較Tab.2 Comparison of Survivin，AQP9 and HLA-G expression levels with clinical correlation in patients with preeclampsia±s

臨床資料年齡（歲）流產次數（次）病情嚴重程度孕周（周）＜30≥30＜3≥3輕度子癇前期重度子癇前期＜35≥35例數26 24 15 35 28 22 25 25 Survivin 10.02±0.55 10.16±0.57 15.23±1.44 10.23±0.53 15.27±0.49 5.438±0.17 10.20±0.48 10.21±0.49 t 值0.902 18.062 90.093 0.092 P 值0.372 0.001 0.001 0.927 AQP9 0.61±0.03 0.63±0.04 1.02±0.06 0.67±0.02 1.09±0.20 0.22±0.02 0.71±0.04 0.69±0.04 t 值2.293 31.805 20.125 1.768 P 值0.026 0.001 0.001 0.083 HLA-G 27.34±1.47 27.56±1.32 35.78±2.12 28.72±0.76 38.46±1.34 20.06±0.94 28.38±0.51 28.11±0.98 t 值0.551 17.430 54.553 1.248 P 值0.584 0.001 0.001 0.218

表3 Survivin、AQP9 和HLA-G 之間的相關性分析Tab.3 Correlation analysis among Survivin，AQP9 and HLA-G

3 討論

在正常妊娠過程中，絨毛內細胞會分化為合體滋養細胞以及絨毛外滋養細胞。在妊娠早期，絨毛外滋養細胞會脫離絨毛基底部，侵入蛻膜層及蛻膜組織，會取代血管內皮細胞，對血管中層肌的彈力纖維產生破壞作用，導致螺旋動脈擴張，實現子宮螺旋動脈重鑄［6-7］。研究數據顯示，滋養細胞侵襲能力降低會導致子宮內膜浸潤缺乏，導致子宮螺旋動脈重鑄出現障礙，全身血管內皮受到損傷，造成子癇前期的病理以及生理表現［8］。

Survivin 屬于一種最強的凋亡抑制因子。研究［9-10］指出，Survivin 對滋養細胞的存活和增殖有一定的促進作用，參與胚胎著床和胎盤發育，有助于維持產婦正常妊娠。Survivin 表達異常與滋養細胞凋亡及侵襲有關，造成胎盤絨毛發育不良，導致胎盤缺血以及缺氧，對新生兒的體重以及胎盤質量產生直接的影響，嚴重的會導致新生兒和產婦死亡［11-12］。本文研究結果顯示，子癇前期患者的胎盤組織中，Survivin 表達水平降低，說明Survivin能夠對妊娠期產婦的情況進行表達，可能參與了疾病的發病過程。周小娜［13］研究發現，子癇前期組患者的胎盤組織中Survivin 表達水平下降，與本文研究保持一致。因為Survivin 表達水平降低造成滋養細胞增殖能力與細胞侵襲性降低，滋養細胞大量凋亡，導致胎盤著床較淺，胎盤組織缺乏血液供應，表明Survivin 參與子癇前期的發病［14-15］。

重度子癇前期患者的AQP9 表達水平高于輕度子癇患者，AQP9 參與滋養細胞凋亡過程，對滋養細胞凋亡有促進作用，造成胎盤缺氧，導致患者發病［16］。研究發現，在羊膜上皮細胞中AQP9 水平與正常妊娠孕婦已經妊娠高血壓患者相比，其表達水平較高［17］。本文研究數據顯示，子癇前期患者的胎盤組織中，AQP9 表達水平升高，推測AQP9參與子癇前期的發生和發展，AQP9 表達異常在胎盤組織滋養細胞中作用更加重要。HLA-G 表達水平下降會造成滋養細胞受到母體免疫細胞攻擊，導致子宮螺旋動脈重鑄受到阻礙，胎盤缺氧，最終子癇前期發生［18-19］。本文結果顯示，子癇前期患者的胎盤組織中，HLA-G 表達水平降低，說明HLA-G參與子癇前期發病過程。駱守玲［20］研究顯示，子癇前期患者血清中HLA-G 水平與HLA-GmRNA 呈正相關，進一步表明，HLA-G 參與了胎盤組織相應血管的生理性變化。

本文研究數據顯示，流產次數≥3 次、重度子癇患者Survivin、HLA-G 表達水平較低，AQP9 表達水平較高，說明Survivin、AQP9 和HLA-G 表達水平與子癇前期患者流產次數、病情嚴重程度有關，Survivin、HLA-G 表達隨著子癇前期患者病情進展降低，AQP9 表達隨著子癇前期患者病情進展升高。本文研究數據顯示，AQP9 和Survivin、HLA-G之間具有負相關性，當AQP9 表達升高時，Survivin、HLA-G 受到抑制，Survivin、AQP9 和HLA-G參與了子癇前期的發展，在子癇前期中起到重要的調節作用。

綜上所述，Survivin、AQP9 和HLA-G 表達與子癇前期具有相關性，Survivin、AQP9 和HLA-G 的異常表達，參與了子癇前期的發展，在子癇前期的臨床診斷中具有重要意義。