市售農藥殘留快速檢測酶試劑盒對有機磷和氨基甲酸酯類農藥靈敏度的測定

摘要：了解農藥殘留快速檢測酶試劑盒對不同農藥的靈敏度。通過4種市售酶試劑盒對克百威等5種農藥分別進行5個濃度的測定，來比較試劑盒的優劣。4種酶試劑盒不是對所有的有機磷農藥和氨基甲酸酯類農藥都敏感;4種試劑盒優劣為：試劑盒A>試劑盒C>試劑盒B>試劑盒D。在日常檢測中需要對所購買的快檢產品進行一定的實驗驗證，選取適合的產品。在條件允許的情況下對于抑制率超過50%的樣品不僅需要復測，還需要采用色譜、質譜定性、定量等方法進行檢測。

關鍵詞：酶試劑盒;有機磷;氨基甲酸酯類農藥;靈敏度

中圖分類號：S-3

文獻標識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191215006

引言

在食品安全問題越來越受到關注的今天，水果蔬菜中的農藥殘留超標問題日益突出，嚴重危害人體健康，因此準確又快速篩查出果蔬中的農藥殘留是否超標具有重大意義[1，2]。當前農藥殘留檢測的主要方法為酶抑制率法和色譜法等[3]。酶抑制率法由于成本低、操作簡便、時間短等優點被廣泛應用于流通市場及蔬菜基地的快速篩查中，在果蔬的農藥殘留的監管中，成為一種重要的監管手段[4-6]。市面上出現了多種農藥殘留快速檢測酶試劑盒，質量參差不齊，且在進行農藥殘留檢測時，僅能檢測大部分有機磷和氨基甲酸脂類農藥，而且對不同的農藥品種靈敏度是不一樣的[7]。作為農藥殘留酶試劑的生產廠家，為了更好地改進、研發酶試劑以及為使用者在選購產品時提供一定的參考借鑒，采購了2種市售其他家的酶試劑和自身生產的2種不同狀態的酶對5種農藥的靈敏度進行了測試，以KJ201710國家食藥監總局2017年第113號公告附件中的方法為依據來進行評價。

1材料與方法

1.1實驗儀器

GNSPRD-16型16通道農殘速測儀（廈門綠安分析儀器有限公司）;HH-2型恒溫水浴鍋（金壇區白塔金昌實驗儀器廠）;JJ-200電子天平（河南雙杰計量儀器有限公司）;5mL移液槍（寧波托普森科學儀器有限公司）;100μL移液槍（美國Thermo公司）。

1.2試劑

酶試劑盒A（鄭州華洲，顯色劑、底物、緩沖劑為粉末狀，酶為液態）;酶試劑盒B（鄭州華洲，酶、顯色劑、底物、緩沖劑均為粉末狀）;酶試劑盒C（外采品牌，顯色劑、底物、緩沖劑為粉末狀，酶為液態）;酶試劑盒D（外采品牌，顯色劑、底物、緩沖劑為粉末狀，酶為液態）。在實驗前按照說明書要求將試劑盒里的緩沖劑、酶試劑（粉末狀需要配制，液態狀直接使用）、顯色劑、底物進行配制：緩沖劑用500mL的蒸餾水溶解配制，粉末狀酶試劑和顯色劑分別用10mL的緩沖液溶解混勻，底物用10mL的純凈水進行溶解配制。

克百威、敵百蟲、丙溴磷、敵敵畏、滅多威5種農藥標準品（1000μg/mL，農業環境保護科研檢測所），使用時按照需要梯度稀釋成1μg/mL標準中間液。

1.3實驗設計

本實驗參照KJ201710蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威、克百威、敵敵畏殘留的快速檢測中第1種方法酶抑制率法，根據方法中給出的檢測限：敵百蟲0.1mg/kg，丙溴磷0.5mg/kg，滅多威0.2mg/kg，克百威0.02mg/kg，敵敵畏0.2mg/kg為依據，不同的農藥按照檢出限不同設置5個濃度梯度，每1個濃度梯度設置3次重復。

1.4對照液的測試

分別移取3mL緩沖溶液于10mL 帶蓋的玻璃瓶中，再加入0.1mL的酶液、0.1mL的顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋中放置15min，再加入0.1mL底物搖勻，立即放入儀器的比色池中，用農殘儀測定3min內的吸光度變化值即為ΔA0。

1.5樣品處理方法

向1.3中制備的5個濃度的農藥中分別加入10mL緩沖液，混勻后備用。分別移取3mL的樣品提取液于10mL 帶蓋的玻璃瓶中，依次往提取液中加入0.1mL的酶液、0.1mL的顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋中放置15min，再加入0.1mL底物搖勻，立即放入儀器的比色池中，用農殘儀測定3min內的吸光度變化值，通過儀器讀出其抑制率。

1.6實驗數據的處理

根據每一個處理的3次測定值計算出平均值，根據平均值列出抑制率、農藥濃度的數據表（見表1），根據數據比較4種不同酶試劑盒對5種農藥的靈敏度。

4種酶試劑盒在KJ201710中5種農藥檢出限濃度的抑制率與農藥濃度的對應關系（見表2），根據數據可以看出更接近或優于標準方法的酶試劑盒。

2結果分析

從表1中可以看出，對于克百威來說，試劑盒A和試劑盒C均在推薦的檢出限濃度可以測出陽性，試劑盒A在克百威濃度為0.005mg/L時抑制率即為60.8%，而試劑盒C在克百威濃度為0.02mg/L時抑制率為59.1%，試劑盒B在克百威濃度為0.04mg/L時抑制率為57.1%。說明對于克百威來說，試劑盒C是最佳的選擇。

對敵百蟲來說，濃度為0.01mg/L時，試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D的抑制率分別為77.8%、80.1%、70.6%，試劑盒A在敵百蟲濃度為0.03mg/L抑制率為59.9%，而此時另外3種試劑盒抑制率均超過90%，說明這4種試劑盒對敵百蟲都比較敏感，尤其是試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D，同時也反應出對于試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D應該稀釋更低的濃度去進行實驗。

對丙溴磷來說，濃度為0.05mg/L時，試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D的抑制率分別為60.8%、60.0%、66.2%，而試劑盒A在丙溴磷濃度為0.5mg/L時抑制率為69.2%，說明對于丙溴磷來說，試劑盒A是最佳選擇，其他3種試劑盒普遍存在對丙溴磷較敏感。

對敵敵畏來說，濃度為0.03mg/L時，試劑盒B、試劑盒C、試劑盒D的抑制率均超過90%，試劑盒A在敵敵畏濃度為0.06mg/L時抑制率為53.9%，在敵敵畏濃度為0.2mg/L時抑制率為72.7%，其它3種試劑盒的抑制率均達到100%，說明4種試劑盒均對敵敵畏比較敏感，而試劑盒A在敵敵畏濃度增加過程種，抑制率增幅不大，比較穩定。

對滅多威來說，4種試劑盒的抑制率趨勢不一樣，試劑盒D在實驗的5個濃度中始終沒有達到50%以上，試劑盒C在滅多威濃度為0.2mg/L，抑制率達到50%以上，而試劑盒A、B在濃度為0.1mg/L時，抑制率即達到50%以上，但是在濃度為0.2mg/L抑制率增加的并不多。

表2主要是對表1進行簡化，能夠更直觀的反應出4種試劑盒的優劣，在方法推薦的檢出限下，試劑盒A整體要優于另外3種試劑盒，尤其是對敵百蟲、丙溴磷、敵敵畏來說。

3結論

在方法推薦的檢出限下，4種試劑盒優劣為：試劑盒A>試劑盒C>試劑盒B>試劑盒D，從表1和表2中也可得知，如果蔬菜中殘留了一定量的敵百蟲、丙溴磷、敵敵畏，因為試劑盒B、C、D均對低濃度的這3種農藥敏感，就很容易導致假陽性的出現;而如果蔬菜中殘留了一定量的克百威、滅多威，因為試劑盒D對這2種農藥不靈敏反而容易導致假陰性的出現。根據國標和行業標準的規定[8]，樣品的抑制率達到50%則判定樣品農藥殘留超標，因為國家限量標準對每一種農藥的限量不同，每種試劑盒對每一種農藥的敏感度也不一樣，因此在日常檢測中需要對所購買的快檢產品進行一定的實驗驗證，選取適合的產品。在條件允許的情況下對于抑制率超過50%的樣品不僅需要復測，還需要采用色譜、質譜定性、定量等方法進行檢測。

參考文獻

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[8]GB/T 5009.199-2003蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢測[S].

作者簡介：

張欣（1987-），女，碩士，檢測部經理。研究方向：食用農產品快速檢測。