從一名三歲女童帶菌者直腸拭子中分離出0139群霍亂弧菌

鄒紅敏 張景怡

（資中縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科 四川 資中 641200）

2007年9月12日，我市東興區(qū)發(fā)生一起農(nóng)村舉辦喪葬宴而引發(fā)食源性O(shè)139群霍亂暴發(fā)流行[1]，受此疫情波及，我疾控中心從一名未預(yù)防服藥三歲女童直腸拭子、2份病家?guī)S水中分離出O139群霍亂弧菌。由于報告及時，處理得當(dāng)，使疫情迅速得以控制，未出現(xiàn)二代病例和人員死亡，現(xiàn)報告如下。

1.流行病學(xué)概況

2007年9月12日，我市東興區(qū)發(fā)生一起食源性霍亂暴發(fā)流行，在進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查時發(fā)現(xiàn)我縣有4名同時進(jìn)餐人員。我疾控中心在接到通知后，迅速趕赴現(xiàn)場，進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。采集4名同時進(jìn)餐人員直腸拭子（其中3人已進(jìn)行預(yù)防性服藥；1人家長認(rèn)為孩子才3歲，且一直沒有腹瀉、腹痛、嘔吐、發(fā)熱等任何不適癥狀，不會感染霍亂，沒給孩子服藥），5名密切接觸者直腸拭子，缸水2份，病家?guī)S水2份，門前泥土2份，餐具2份，進(jìn)行病原菌分離鑒定。4名同時進(jìn)餐人員和5名密切接觸者均無腹瀉、腹痛、嘔吐、發(fā)熱等任何不適癥狀。

2.檢驗(yàn)方法

2.1 材料

堿性蛋白胨水、堿性瓊脂、四號瓊脂、TCBS瓊脂、霍亂弧菌生化鑒定管（11種×20支）、氧化酶試劑均由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)；粘絲試驗(yàn)，試劑現(xiàn)配；O1群霍亂弧菌診斷血清、O139群霍亂弧菌診斷血清均由蘭州生物制品研究所生產(chǎn)；O1群霍亂弧菌檢測試劑盒（膠體金法）、O139群霍亂弧菌檢測試劑盒（膠體金法）均由北京莊笛浩禾生物醫(yī)學(xué)科技有限公司內(nèi)蒙古生物試劑廠生產(chǎn)；藥敏紙片由北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。所有試劑均在有效期內(nèi)。

2.2 霍亂弧菌檢驗(yàn)

所有樣本均按《霍亂診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則GB 15984-1995》和《霍亂防治手冊》（第五版）[2]進(jìn)行霍亂弧菌檢測。

2.2.1 第一次增菌 將所有樣本接種于堿性蛋白胨水，37℃，6～8h進(jìn)行第一次增菌。

2.2.2 分離培養(yǎng)、第二次增菌和快診試驗(yàn) 取表層增菌液分別劃線接種于堿性瓊脂、四號瓊脂、TCBS瓊脂，37℃，20～24h分離培養(yǎng)；接種堿性蛋白胨水，37℃，6～8h進(jìn)行第二次增菌；同時用O1群、O139群霍亂弧菌檢測試劑盒（膠體金法）做快診試驗(yàn)。

2.2.3 觀察菌落特征、涂片染色、血清學(xué)試驗(yàn)、純培養(yǎng) 挑取四號瓊脂平板上2～4mm、微凸、圓形、中心黑色、光滑、濕潤菌落；TCBS上深黃色、微凸、1～2mm、圓形、光滑、濕潤、粘稠菌落進(jìn)行涂片染色，與霍亂弧菌O1群、O139群診斷血清進(jìn)行玻片凝集。挑取革蘭氏陰性、與霍亂診斷血清凝集的單個典型菌落接種于普通營養(yǎng)瓊脂斜面進(jìn)行純培養(yǎng)。

2.2.4 氧化酶試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、粘絲試驗(yàn)、生化試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn) 取純培養(yǎng)物做氧化酶試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)和粘絲試驗(yàn)，將氧化酶陽性，粘絲試驗(yàn)陽性，與霍亂診斷血清凝集的純培養(yǎng)物接種霍亂弧菌生化鑒定管，同時用改良K-B氏瓊脂擴(kuò)散法做藥物敏感試驗(yàn)。

2.2.5 第二次增菌后的培養(yǎng)物檢驗(yàn)步驟同第一次增菌。

2.3 結(jié)果

2.3.1 所有樣本的第一次增菌培養(yǎng)物O1群、O139群霍亂弧菌檢測試劑盒（膠體金法）快診試驗(yàn)均為陰性，堿性瓊脂、四號瓊脂、TCBS瓊脂平板上無典型菌落，不與霍亂弧菌O1群、O139群診斷血清凝集，未檢出霍亂弧菌。

2.3.2 一名同時進(jìn)餐人員（三歲女童）的直腸拭子第二次增菌培養(yǎng)物、2份病家?guī)S水的第二次增菌培養(yǎng)物O1群、O139群霍亂弧菌檢測試劑盒（膠體金法）快診試驗(yàn)陽性，堿性瓊脂、四號瓊脂、TCBS瓊脂平板上有典型霍亂弧菌菌落生長，不與O1群霍亂弧菌診斷血清凝集，與O139群霍亂弧菌診斷血清凝集，生理鹽水對照不凝集。

2.3.3 生化結(jié)果 氧化酶陽性，粘絲試驗(yàn)陽性，葡萄糖、VP、MR、蔗糖、甘露醇、賴氨酸陽性，靛基質(zhì)、阿拉伯糖、肌醇、精氨酸陰性。

2.3.4 結(jié)合血清學(xué)試驗(yàn)和生化結(jié)果，判定為O139群霍亂弧菌。與內(nèi)江市疾病預(yù)防控制中心復(fù)核確認(rèn)結(jié)果一致。

2.3.5 藥敏結(jié)果 對鏈霉素、新霉素、四環(huán)素、氯霉素、氨芐西林、紅霉素、強(qiáng)力霉素耐藥，對痢特靈中度敏感，對環(huán)丙沙星、阿米卡星、妥布霉素、諾氟沙星、復(fù)方新諾明敏感。

3.討論

3.1 所有樣本第一次增菌培養(yǎng)物均未檢出霍亂弧菌，陽性標(biāo)本是在第二次增菌后才分離出O139群霍亂弧菌，考慮與標(biāo)本含菌量少有很大關(guān)系，因?yàn)樵撆恢睕]有腹瀉、腹痛、嘔吐、發(fā)熱等任何不適癥狀。提醒我們在以后的工作中為避免漏檢，對含菌量少的標(biāo)本（如帶菌者、恢復(fù)期病人、服藥后的標(biāo)本）應(yīng)進(jìn)行二次增菌。

3.2 未服用預(yù)防藥的分離出O139群霍亂弧菌的三歲女童進(jìn)餐者。未分離出O139群霍亂弧菌的進(jìn)餐者都按規(guī)定服用預(yù)防藥物。說明預(yù)防服藥在控制霍亂疫情的蔓延上有一定積極作用。同時也告誡我們在預(yù)防服藥時應(yīng)該加強(qiáng)宣傳和技術(shù)指導(dǎo)，督促落實(shí)到位。

3.3 未預(yù)防服藥者檢出霍亂弧菌，已服藥者未檢出霍亂弧菌，提示我們?yōu)楸苊馑幬飳z驗(yàn)結(jié)果的影響應(yīng)盡量在用藥前采集標(biāo)本。

3.4 O139群霍亂帶菌者和輕癥病人遠(yuǎn)較典型病人為多[2]，但本例帶菌者只有三歲，實(shí)為罕見。

3.5 因受實(shí)驗(yàn)室條件和技術(shù)限制，所分離菌株未做霍亂弧菌毒力相關(guān)基因檢測，也未與東興區(qū)分離出的霍亂弧菌做同源性檢測，是本次實(shí)驗(yàn)的缺陷。