8種復方龍膽碳酸氫鈉片中5種蒽醌苷含量比較研究

陳學艷，張敏娟，魏文芝，張耀元，阿玉梅

復方龍膽碳酸氫鈉片是由碳酸氫鈉、大黃膏（粉）、龍膽膏（粉）、丁香油、薄荷油和適宜的輔料組成的復方制劑，用于胃酸過多、食欲不振、消化不良。組方中的大黃具有清熱解毒、活血祛瘀等功效[1]，可作用于胃覺感受器和胃黏膜，在碳酸氫鈉中和過多胃酸后起到增加食欲、促進消化的作用。大黃中蒽醌類衍生物，主要包括大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酸等[2]，研究發現，大黃所含的蒽醌類衍生物具有調節胃腸道蠕動、促進胃排空等作用[3]。因此，大黃質量的優劣直接影響該復方制劑的療效。本課題通過對比不同企業復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃成分5種蒽醌苷的含量，對2018年流通領域抽檢的該品種進行質量評價研究。

1 材料與方法

1.1 儀器設備 Sartorius BS224S型及CP225D型電子天平；Waters e2695-2998型高效液相色譜儀；KQ-500DE型數控超聲儀；HH-S6數顯恒溫水浴鍋；98-1-C型數字控溫電熱套。

1.2 試藥 復方龍膽碳酸氫鈉片（分別來自編號為 A、B、C、D、E、F、G、H 的國內 8 家藥品企業）；大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚對照品由中國食品藥品檢定研究院提供；甲醇（HPLC級），水（超純水），其他試劑均為AR級。

1.3 檢測方法 采用甲醇超聲和酸回流法，提取復方龍膽碳酸氫鈉片中的游離大黃蒽醌和總蒽醌（結合型蒽醌水解后所得5種蒽醌苷元）。采用HPLC法測定大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚5種成分含量：流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；檢測器為二極管陣列，檢測波長：254 nm；柱溫 30 ℃；流速 1.0 ml/min；進樣量 20 μl。

1.4 統計學方法 采用Excel軟件，對檢測數據進行處理，應用SPSS23.0軟件進一步進行聚類分析。

2 結果

2.1 8家企業復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃游離蒽醌含量測定結果 從表1可知，5種游離蒽醌指標成分中，大黃酚含量最高。D企業產品中未檢出游離蘆薈大黃素和游離大黃酸；E企業產品中游離蒽醌含量較其余廠家高。根據《中國藥典》2015版規定[4]，大黃藥材中游離蒽醌的含量限度為0.2%，大黃在復方龍膽碳酸氫鈉片中的處方占比為16.6%，計算得游離蒽醌在復方龍膽碳酸氫鈉片中的理論含量應為0.3320 mg/g。據此判定8家企業產品中，5家合格，3家不合格，合格率為62.5%。

2.2 8家企業復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃總蒽醌含量測定結果 從表2可知，5中蒽醌苷元總體含量最高的仍為大黃酚，D企業產品中5批次均未檢出大黃酸。E企業產品中總蒽醌含量較其余廠家高。根據《中國藥典》2015版規定，大黃藥材中總蒽醌的含量限度為1.5%，大黃在復方龍膽碳酸氫鈉片中的處方占比為16.6%，計算得總蒽醌在復方龍膽碳酸氫鈉片中的理論含量應為2.4900 mg/g。據此判定：8家企業產品全部合格，合格率為100%。

2.3 不同企業產品的質量評價 復方龍膽碳酸氫鈉片為中西藥復方制劑，由4味藥材與碳酸氫鈉組成。中藥材（飲片）由于來源、產地、采收時間等不同，其內在質量差異較大。從上述結果得知，D企業蒽醌類含量較其他企業低，且未檢出游離蘆薈大黃素和大黃酸；5中蒽醌苷元中大黃酚對總蒽醌含量貢獻最大，屬于大量成分，其余4種苷元屬少量成分。各企業產品大黃蒽醌類含量數據較為離散，不易直觀地進行比較分析，因此，進一步采用聚類分析，將所有產品按各自屬性分為不同群類進行評價，結果見圖1。綜合大黃酸及總蒽醌含量對8家企業產品排名，由優到劣依次為：E、G、H、F、A、C、B、D。

由圖1可知，可將8家企業產品按大黃成分中5種蒽醌類含量分為3類，第1類包括D、C、B、A 4個企業，此類樣品大黃蒽醌類總量較低，尤其是大黃酸和大黃素含量偏低；第2類包括C、A兩個企業的大黃蒽醌類含量較高樣品；第3類包括H、G、F、E 4個企業，此類樣品大黃蒽醌類總量較高，大黃酸和大黃素含量明顯高于第1類樣品。大黃酸含量較高的大黃藥材被稱作大黃酸型，評價為優質大黃藥材[5]。因此，可認為上述第3類廠家投料使用的大黃藥材質量較佳，可起到更好地調節胃腸功能，增加食欲的作用[6]。相反，屬于第1類的產品，在療效上欠佳。

相關文獻報道[7]，偽品大黃與正品大黃在蒽醌苷總量上幾乎無太大差別，但偽品中大黃酸含量微少，幾乎沒有。提示上述第1類產品投料用大黃藥材的真偽值得進一步驗證，尤其是D企業產品中均未檢出游離大黃酸，且有5批次經水解后也未檢出大黃酸成分，因此，高度懷疑D企業有使用偽品或參偽的行為。A、C兩企業大黃蒽醌類含量批間差異較大，致使二者在聚類統計時分屬于第1類和第2類。此現象若排除生產工藝問題，有可能是投料用大黃由3種不同基源大黃混雜所導致。

2015年版《中國藥典》（一部）規定，大黃藥材應來源于蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatum L.）、唐古特大黃（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）或藥用大黃（Rheum officinale Baill.），不同基源大黃質量存在較大差異，目前市場流通的大黃多為3種基源大黃的混雜品[8-10]，進而導致生產出的含大黃制劑在質量上的不穩定。

表1 8家企業復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃游離蒽醌含量測定結果(n=3)

表2 8家企業復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃總蒽醌含量測定結果（n=3）

3 討論

目前，大黃藥材中已知的化學成分復雜多樣，且活性成分較多。《中國藥典》中將大黃素與大黃酚的含量測定結果作為含大黃制劑評價指標的品種較多，5個成分同時作為評價指標的品種較為少見[11]。而復方龍膽碳酸氫鈉片的現行質量標準中，對大黃組分的質量控制僅采用薄層色譜鑒別和大黃酚檢查。成分含量與藥效、毒性相關分析表明，大黃酸對大黃藥材整體的貢獻顯著大于大黃酚[12]，因此，有必要對大黃其他成分的含量加以控制。

含大黃制劑投料用藥材質量控制在正品大黃市場價較高時，存在生產企業用華北大黃、河套大黃、藏邊大黃等偽品替代投料的風險。正品大黃中的蒽醌苷類成分含量較高，偽品大黃中僅含微量蒽醌苷類成分[13]，且偽品大黃中含有特征性成分土大黃苷。本研究在后續試驗中已建立復方龍膽碳酸氫鈉片土大黃苷的測定方法，對偽品大黃進行了篩查，結果D企業的樣品中檢出了土大黃苷成分，結合其蒽醌苷類含量分析，可判定D企業存在使用大黃偽品投料的情況。

大黃屬于多基源藥材，且含大黃復方制劑生產工藝復雜，投料用大黃形式多樣，制劑中難以判斷大黃的來源。目前，多數含大黃復方制劑質量標準中對所含成分定性、定量項目設置不完善，不能客觀反映投料大黃的整體質量情況。本實驗通過同時控制大黃5種指標性成分的含量，運用適宜的統計分析方法，對來自8家企業的43批次復方龍膽碳酸氫鈉片的質量進行了評價研究，對含大黃復方制劑加強批間一致性控制，防止投料中參偽行為的發生，具有重要的參考意義。