黃芪注射液對子癇前期大鼠胎盤NF-κB、MMP-9、轉錄因子的影響

戴 妮

子癇前期是孕婦妊娠期多見的并發癥，有調查表明，子癇前期在全球范圍的發生率約為2%～8%[1]。相關研究指出，胎盤核轉錄因子（NF-κB）、基質金屬蛋白酶9（MMP-9）及相關轉錄因子表達紊亂與子癇前期的發生、發展具有密切聯系[2]。黃芪注射液具有擴張血管、改善腎功能、降壓等功能，是治療子癇前期的有效藥物[3]。為進一步明確黃芪注射液治療子癇前期的作用機理，本課題主要研究黃芪注射液對子癇前期大鼠尿蛋白、胎盤NF-κB、MMP-9及相關轉錄因子表達水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑及設備 黃芪注射液 （哈爾濱圣泰制藥股份有限公司，國藥準字號：Z23020822），N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME，Cayman 公司，批號：lot14H0135），尿蛋白酶聯免疫吸附試驗試劑盒（江蘇晶美生物科技有限公司）；RT-PCR 儀（型號：ABI 7000型，上海朗賦實業有限公司）及配套試劑。

1.2 實驗動物 妊娠 （妊娠第12 d）SD大鼠30只，購自鄭州大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（豫）2008-1-003。 飼養條件：室溫 18～26 ℃，空氣濕度（55±5）%，環境安靜、通風，予以自由飲食，充分給水。

1.3 實驗方法 將實驗鼠隨機分為模型組、黃芪組和對照組，在妊娠第13～15 d，模型組及黃芪組大鼠皮下注射L-NAME 50 mg/(kg·d)，以建立子癇前期大鼠模型；對照組大鼠注射等量生理鹽水。妊娠第16 d起，黃芪組腹腔注射黃芪注射液[0.024 ml/(g·d)+5%葡萄糖注射液共1 ml]，另外兩組注射同體積5%葡萄糖注射液。各組均1次/d，連續給藥5 d。

1.4 檢測指標 分別在妊娠第15、20 d時，采集實驗鼠24 h全尿，運用鄰苯三酚法測量24 h尿蛋白量。血壓檢測：于安靜環境下，把實驗用袖帶套入大鼠尾部檢測動脈壓，每只檢測3次，每次隔60 s，取3次之和的平均值為動脈壓。24 h尿標本采集后，腹腔注射10%水合氯醛（3 ml/kg）麻醉大鼠，取出胎盤，用生理鹽水漂洗，-70℃保存備用。以RT-PCR 法 檢 測 胎 盤 組 織 NF-κB、PLGF、NFAT-5、MMP-9、sFlt-1mRNA表達水平。

1.5 統計學方法 應用SPSS19.0統計軟件分析，計量資料以x±s表示，多組比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 不同時段動脈壓和尿蛋白水平 在妊娠第15 d，對照組動脈壓和尿蛋白水平明顯降低（P＜0.05），余下兩組間未見明顯差異（P＞0.05）；在妊娠第20 d與15 d相比，模型組和對照組的動脈壓和尿蛋白水平未見明顯變化（P＞0.05），而黃芪組明顯低于模型組（P＜0.05），且與對照組比較無明顯差異（P＞ 0.05）。 見表 1。

2.2 各因子mRNA表達水平 在妊娠第20 d，各組各因子mRNA表達水平均有顯著差異（P＜0.05）；sFlt-1mRNA、NF-κB 表達水平：模型組最高，對照組最低（P＜0.05）；MMP-9 mRNA表達水平：模型組最低，對照組最高（P＜0.05）；模型組 NFAT-5 mRNA表達水平明顯升高，PLGF mRNA表達水平明顯降低（P＜ 0.05），且余下兩組間未見明顯差異（P＞ 0.05）。見表2。

3 討論

黃芪注射液屬于中藥制劑，具有顯著降壓效果。相關研究指出，黃芪能夠提高腎小球濾過及腎血流量，緩解免疫復合物對腎小球基底膜造成的損傷，有效清除氧自由基，促進腎功能恢復，從而提高尿量，實現降壓、利尿的治療效果[4]。本實驗結果表明，在妊娠第20 d，黃芪組尿蛋白水平、動脈壓明顯比模型組低，表明黃芪注射液能顯著降低子癇前期大鼠血壓值和尿蛋白水平，與楊雙燕等[5]研究結果一致。

表1 各組不同時段動脈壓和尿蛋白水平比較（n=10）

表2 各組各因子mRNA表達水平比較(n=10）

子癇前期母體胎盤滋養細胞侵襲能力顯著降低，而MMP-9表達不足會弱化其侵襲子宮螺旋動脈的能力，使得胎盤植入淺，血流灌注減少。本實驗結果顯示，在妊娠第20 d，MMP-9 mRNA表達水平為：對照組＞黃芪組＞模型組，說明黃芪注射液能有效增加子癇前期大鼠胎盤組織MMP-9 mRNA的表達，與林娟[6]研究結論一致。

妊娠期胎盤低氧導致NF-κB被激活，不僅能降低滋養細胞浸潤功能，同時誘發血管狹窄[7-8]。子癇前期孕婦滋養細胞凋亡增加，PLGF mRNA表達隨之減少[9-11]。相關實驗表明，與空白組相比，子癇前期模型組胎盤組織內sFlt-1因子水平明顯升高，表明sFlt-1與子癇前期發生具有相關性[12]。小鼠腎臟細胞之中，滲透壓升高能夠激活NFAT5，同時持續低氧影響，可能引起子癇前期或者胎兒生長受限等嚴重并發癥.并誘導NFAT5 mRNA表達。本實驗顯示，子癇前期大鼠胎盤組織sFlt-1 mRNA、NF-κB表達水平為：對照組＜黃芪組＜模型組，說明黃芪注射液可提高子癇前期大鼠胎盤組織Flt-1mRNA、NF-κB表達水平，與馬合紅等[11]研究觀點相符。

本實驗結果還顯示，在妊娠第20 d，模型組NFAT-5 mRNA表達水平明顯最高，PLGF mRNA表達水平明顯最低，且余下兩組未見顯著差異，提示黃芪注射液能抑制NFAT-5 mRNA表達，同時增強PLGF mRNA表達水平。

綜上所述，黃芪注射液能抑制子癇前期大鼠胎盤組織中 sFlt-1 mRNA、NFAT-5、NF-κB 的表達，增加PLGF mRNA、MMP-9表達，這可能是其治療子癇前期的作用機理。