川崎病患兒外周血中性粒細胞CD64表達水平研究

林淑斌 黃宏琳

川崎病屬于全身免疫性血管炎，患兒的癥狀主要為手足腫脹、口腔黏膜充血、皮疹、淋巴結腫大、發熱[1]。近幾年，該疾病發生率明顯升高。如果不及時對患兒進行治療，有20%～25% 的患兒會發生心血管損傷，引發冠狀動脈狹窄、冠脈瘤、冠脈擴張，甚至是心肌梗死的發生。如果及時確診，并為患兒注射免疫球蛋白進行治療，則可以顯著降低動脈異常風險的發生[2]。當前臨床診斷川崎病的依據主要為臨床癥狀，并沒有明確的生物標志物可以使用，且川崎病發生早期并沒有明顯的臨床癥狀，尤其在發生指（趾）端脫皮前，這為早期對患兒進行治療造成了很大的難度[3-6]。此次研究主要是對川崎病患兒外周血中性粒細胞CD64 表達水平進行探討，希望可以為臨床盡早診斷川崎病，給予患兒及時的治療提供一定的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016 年10 月-2019 年10 月本院收治的川崎病患兒200 例作為研究組，同時選取健康兒童200 例作為對照組。納入標準：（1）符合川崎病的診斷標準，發熱5 d 以上，同時伴隨有下列5 項臨床表現中的其中4 項，排除其他疾病后則可以判斷為川崎病，①四肢，手足硬性水腫、急性期掌趾紅斑；恢復期指趾端膜狀脫皮；②眼結膜充血，非化膿性；③多形性皮疹；④頸淋巴結腫大；⑤舌乳頭突起，充血呈草莓舌，口腔黏膜彌漫充血，唇充血皸裂；⑥如果以上5 項臨床表現中不足4 項，但是通過超聲心動圖發現存在冠狀動脈損害，也可以判斷為川崎病。（2）對照組兒童經檢查一切正常。排除標準：（1）存在先天性的心臟不完全疾病；（2）智力障礙；（3）搜集的相關資料不齊全。患兒家屬均知情研究，研究已經倫理學委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 全自動免疫分析儀（Cobas e601）由瑞士羅氏公司生產并提供；流式細胞分析儀由美國貝克曼庫爾特公司生產并提供；全自動血細胞分析儀（XE 2100）由日本希森美康集團生產并提供；全自動生化分析儀（羅氏Modular）由瑞士羅氏公司生產并提供；高速離心機流式試管由美國貝克曼庫爾特公司生產并提供；PBS 緩沖液由美國Hyclone 公司生產并提供；PCT 測定試劑由瑞士羅氏公司生產并提供；CRP 測定試劑盒由上海德賽診斷系統公司生產并提供；紅細胞裂解液由北京Solarbio 公司生產并提供；抗體對照CD45-PC5、鼠抗人CD64-FITC 由美國貝克曼庫爾特公司生產并提供。

1.2.2 CD64 水平檢測 兩組人群均在治療前清晨采集外周靜脈血2 mL，之后使用流式細胞儀、抗體陰性對照（美國貝克曼庫爾特）試劑對CD64 水平進行檢測[7]。

1.2.3 PCT 測定 兩組人群均在治療前清晨采集外周靜脈血2 mL，離心分取血清后使用全自動免疫分析儀、配套試劑進行PCT 進行檢測，操作嚴格按照說明書進行。

1.2.4 CRP 測定 兩組人群均在治療前清晨采集外周靜脈血2 mL，之后使用全自動生化分析儀、C 反應蛋白測定試劑盒，使用顆粒增強免疫透射比濁法對CRP 進行檢測，操作嚴格按照說明書進行。

1.2.5 Neu%、WBC 測定 兩組人群均在治療前清晨采集外周靜脈血2 mL，之后使用全自動血細胞分析儀、配套試劑盒進行檢測，操作嚴格按照說明書進行。

1.3 觀察指標 （1）比較研究組與對照組外周血中性粒細胞CD64、白細胞（WBC）、中性粒細胞百分含量（Neu%）、C 反應蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）水平[4]。（2）比較典型川崎病與不典型川崎病患兒治療前外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT 水平[5]。（3）分析WBC、Neu%、CRP、PCT 與CD64 的相關性。

1.4 統計學處理 采用SPSS 18.0 軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（）表示，比較采用t 檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗。相關性使用Pearson 變量線性檢驗。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 研究組200 例，其中典型患兒120 例，不典型患兒80 例；女72 例，男128 例；年齡2 個月～5 歲，平均（2.9±0.1）歲；對照組200 例，女82 例，男118 例；年齡2 個月～5 歲，平均（2.9±0.1）歲。兩組一般資料比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 研究組與對照組外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT 水平比較 研究組外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT 水平均高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.3 典型川崎病與不典型川崎病患兒外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT 水平比較 典型川崎病與不典型川崎病患兒外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT 水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表1 兩組外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT水平比較（）

表1 兩組外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT水平比較（）

表2 典型川崎病與不典型川崎病患兒外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT水平比較（）

表2 典型川崎病與不典型川崎病患兒外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT水平比較（）

2.4 WBC、Neu%、CRP、PCT 與CD64 的相關性分析 WBC、Neu%、CRP 與CD64 均無明顯的相關性（r=0.111、0.167、0.077，P=0.432、0.217、0.642）；PCT 與CD64 呈正相關（r=0.448，P=0.001）。

3 討論

川崎病是臨床小兒發生率較高的一種全身炎癥病變，該疾病引發冠狀動脈損傷的概率為13.9%～57.7%，對其進行盡早診斷與治療更有利于減輕冠狀動脈損傷[6]。

此次研究結果顯示，研究組外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT 水平均高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。有學者對存在自身免疫性疾病且處于活動期、非活動期、合并細菌感染的患者、健康人群的中性粒細胞CD64 水平進行了檢測，結果發現，合并細菌感染的患者CD64 水平更高，而處于活動期、非活動期、健康人群的中性粒細胞CD64 水平沒有明顯的變化[7]。還有學者對系統性紅斑狼瘡患者進行研究發現，感染組外周血中性粒細胞CD64 水平高于非感染組、正常對照組（P＜0.05），非感染組與正常對照組相比，差異無統計學意義（P＞0.05）[8]。因此，合并感染的系統性紅斑狼瘡患者CD64 水平明顯升高；而感染組與非感染組各組內疾病活動期和非活動期CD64 水平相比，差異均無統計學意義（P＞0.05），因此，系統性紅斑狼瘡患者CD64 水平表達與感染有關系，與疾病的活動性沒有關系[9]。故本次研究結果中研究組外周血中性粒細胞CD64 水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），部分患兒考慮可能存在疾病早期合并細菌感染。

此次研究結果顯示，典型川崎病與不典型川崎病患兒外周血中性粒細胞CD64、WBC、Neu%、CRP、PCT 水平比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），考慮這是由于典型川崎病與不典型川崎病的發病機制是相同的，均是免疫性血管炎，因此兩者之間各指標無明顯差異。此次研究結果顯示，WBC、Neu%、CRP 與CD64 均無明顯的相關性（r=0.111、0.167、0.077，P=0.432、0.217、0.642）；PCT 與CD64 呈正相關（r=0.448，P=0.001）。這就說明中性粒細胞CD64 水平與炎性指標WBC、Neu%、CRP 是沒有明顯關系的。白細胞是機體抵抗感染的第一道防線，在非特異性免疫中發揮著重要的作用，臨床上一般通過WBC、Neu%判斷機體是否存在細菌感染。通常情況下，細菌感染后WBC、Neu%水平均會升高，病毒感染時無明顯變化甚至會降低[9]。但是，WBC、Neu%容易受到免疫、環境、應激、創傷、生理、疾病、年齡等的影響，在判斷細菌感染時的特異度、敏感度不是很高，部分嚴重的感染中，WBC 甚至會下降[10]。有學者研究發現，在嚴重的細菌感染中，WBC 敏感度較低，僅僅為47%，特異度為76%[11]。CRP 是一種急性時相反應蛋白，有學者發現在急性感染患者血清中有一種蛋白會與肺炎雙球菌細胞壁上的C 多糖發生反應，該蛋白就是CRP[12]。正常情況下CRP 主要存在于細胞膜中，在血清中很難檢測到[13]。當身體受到感染后，機體會分泌多種細胞因子，在這些因子的影響下肝臟會分泌較多的CRP 因子。通過血清CRP 可以對細菌感染進行判斷[14]。發生細菌感染時，CRP 水平明顯升高，在發生病毒感染時，CRP水平正常或者是輕度升高[15]。臨床研究發現，在結締組織疾病中，血清CRP 水平有所升高[16]。另外，妊娠、性別、年齡、種族都會對外周血CRP水平產生影響[17]。因此，在免疫性疾病中無法將WBC、Neu%、CRP 作為判斷合并細菌感染的指標，也不能對細菌感染嚴重程度直觀的反映[18]。川崎病屬于自身免疫性炎癥疾病，臨床實驗室檢查WBC、Neu%、CRP 有所升高，因此無法將其作為判斷患兒合并有細菌感染的指標，因此，在此次研究中，WBC、Neu%、CRP 與患兒外周血中性粒細胞表面CD64 水平無明顯的關系[19]。PCT 是一種無激素活性的降鈣素前體，是一種糖蛋白，主要由降鈣素羧基端肽、不成熟降鈣素、氨基酸降鈣素原組成。生理狀態下PCT 主要來自于甲狀腺C 細胞，在健康人的血清中PCT 水平很低，幾乎無法監測到，且在體內外的穩定性均比較強，不會受到機體內各種激素的影響[20]。機體發生感染后，在細菌內毒素、各種細胞因子的刺激下，會使脂肪、肌肉、腎臟、肝臟細胞釋放大量的PCT 進入血液，使得機體內的PCT水平明顯升高。同時，血清中PCT 水平與感染嚴重程度成正比，隨著感染的控制機體內的PCT 水平會逐漸下降，因此，臨床上可以通過PCT 判斷病情與預后。

綜上所述，川崎病臨床診斷中，可以將CD64水平作為診斷與治療效果判斷的參考指標，且CD64 水平變化與PCT 有一定的關系。