二氫槲皮素對高脂飼料聯(lián)合酒精狂飲小鼠肝臟脂肪蓄積的干預(yù)機制

吳 梅，喬春瑩，葉 歡，吳艷玲，南極星，廉麗花

(延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林 延吉 133002)

長期大量的酒精攝入對肝臟有直接損害作用，其損傷機制主要是肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂所導(dǎo)致脂肪沉積。由于人體代謝能力有限，長期以高蛋白、高脂膳食為主，飲酒等習(xí)慣會引起大量脂肪堆積，從而導(dǎo)致脂肪肝。高脂飲食和酒精攝入可協(xié)同誘導(dǎo)氮化應(yīng)激、線粒體應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等，但酒精對高脂引起的脂肪肝的影響及其潛在機制卻尚不清楚。二氫槲皮素(dihydroquercetin或taxifolin，TAX)是落葉松、花旗松中含量較高的二氫黃酮醇類化合物[1]。本研究通過小鼠高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合酒精狂飲模型，探討TAX對肝臟脂肪積蓄的干預(yù)機制。

1 材料

1.1 藥物與試劑TAX(純度>98%，成都普思公司)；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑條(Arkray公司)；甘油三酯(TG)試劑盒(南京建成研究所)；固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1(sterol-regulatory element binding protein 1，SREBP-1)抗體(Abcam公司)。

1.2 實驗動物SPF級ICR小鼠, ♂，8～10周齡，購自長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司[SCXK(吉)-2016-0003]。

2 方法

2.1 動物分組將48只小鼠隨機分為8組，即正常組(N)、對照飼料組(LFD)、高脂飼料組(HFD)、模型組(HFD+ETOH)、TAX組(25、50、100 mg·kg-1)、單獨給藥組(TAX100)，每組6只。

2.2 造模及給藥每天1次對TAX組與TAX100組進(jìn)行不同濃度的TAX灌胃，共給藥4次。小鼠處死前一晚禁食，可自由飲水。d 4處死當(dāng)日末次灌胃給藥1 h后，N組、HFD組及TAX100組灌胃麥芽糊精，其余5組各灌胃濃度為31.25%的酒精(5 g·kg-1，20 mL·kg-1)。9 h后處死小鼠，收集血液和肝臟。

2.3 血清及肝臟指標(biāo)測定全自動生化分析儀SP-4430(Arkray)檢測ALT、AST、TG的含量。

2.4 肝臟組織的病理觀察參照李秀俠等[2]的方法，將肝臟石蠟切片用HE染色；肝臟冷凍切片進(jìn)行油紅O染色。顯微鏡下觀察分析病理學(xué)變化。

Tab 1 Determination of liver and serum related biochemical indicators in

2.5 免疫組織化學(xué)實驗石蠟包埋肝組織，切片，60 ℃烘片，常規(guī)免疫組化染色，在顯微鏡下觀察SREBP-1表達(dá)情況。利用Image Pro-Plus 6.0軟件對小鼠肝臟中的SREBP-1陽性表達(dá)進(jìn)行分析。

3 結(jié)果

3.1 TAX對小鼠肝臟生化指標(biāo)的影響Tab 1結(jié)果顯示，與模型組相比，TAX給藥組ALT、AST活性降低，HFD+ETOH+TAX25組，HFD+ETOH+TAX100組均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與正常組相比，模型組的血清及肝臟的TG含量明顯增高(P<0.01)，TAX給藥組與模型組比較，HFD+ETOH+TAX25組、HFD+ETOH+TAX50組、HFD+ETOH+TAX100組血清的TG含量都明顯降低(P<0.01)，且HFD+ETOH+TAX25組肝臟的TG含量也呈下降趨勢(P<0.05)。

3.2 TAX對小鼠肝組織病理變化的影響HE染色結(jié)果可見，與正常組相比，模型組肝細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)內(nèi)分布有許多脂肪空泡，肝小葉界限模糊。TAX給藥組隨著濃度增高，肝組織病理變化明顯減弱。油紅O染色結(jié)果顯示，模型組染色的脂滴較正常組明顯增多。TAX給藥后染色變淺，且有一定的劑量依賴性，說明小鼠肝臟脂質(zhì)含量明顯下降。

3.3 TAX對小鼠肝臟SREBP-1表達(dá)的影響免疫組化檢測顯示，與正常組細(xì)胞質(zhì)中只有少量散在分布淺黃色顆粒相比，模型組中央靜脈附近有大量棕黃色顆粒沉積，表明小鼠肝組織中SREBP-1表達(dá)明顯增加(P<0.01)。與模型組相比，TAX給藥組的SREBP-1染色明顯較淺，且其中的HFD+ETOH+TAX25組有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，染色結(jié)果呈與正常組相接近的趨勢(Tab 2)。

4 討論

流行病學(xué)研究表明，高蛋白、高膽固醇攝入與肝纖維化、肝炎風(fēng)險增加有關(guān)，其已被證明可誘導(dǎo)嚴(yán)重的脂肪變性、炎癥和纖維化[3-4]。飲酒和高脂肪飲食是導(dǎo)致脂肪肝的主要因素，無論是否患有非酒精性脂肪肝病，長期酗酒都可能導(dǎo)致酒精性肝病。據(jù)Chang等[5]報道，在高脂飼料喂養(yǎng)的情況下，酒精狂飲可引發(fā)急性肝損傷，凸顯了肥胖/超重個體酗酒的風(fēng)險。本研究顯示，小鼠模型組的肝臟內(nèi)脂滴沉積，炎性細(xì)胞浸潤，說明酒精與高脂飼料飼養(yǎng)小鼠成功建立脂肪肝，且TAX給藥組的小鼠肝臟內(nèi)脂肪沉積隨著TAX濃度的增加而有所改善。綜上所述，TAX能夠改善并逆轉(zhuǎn)高脂飼料聯(lián)合酒精狂飲所引起的脂肪蓄積，對肝臟具有一定的保護作用，其在治療酒精性與非酒精性脂肪肝方面具有一定的潛力，確切機制有待深入探索。

Tab 2 Effect of TAX on immunohistochemical detection of SREBP-1 in mouse