妊娠期Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子與抗磷脂抗體表達及對妊娠結局的影響

崔佳 郭瑩 高偉 王霞 王娜 帖彥清

河北省人民醫(yī)院1檢驗科，3護理部抽血室，4老年病二科（石家莊050051）；2河北省秦皇島市婦幼保健院生殖醫(yī)學科（河北秦皇島066000）

目前對于妊娠不良結局的引發(fā)機制尚不明確，認為妊娠不良結局的發(fā)生與多種因素相關，且對于不良妊娠結局的認識主要集中于血栓形成而導致的子宮胎盤堵塞病理生理原因研究中[1]。目前隨著生殖免疫學的發(fā)展，人們逐漸發(fā)現(xiàn)免疫因素可導致妊娠不良結局的產(chǎn)生，且發(fā)生不良妊娠結局的產(chǎn)婦大多伴隨著自身免疫失調(diào)[2]。研究[3-4]認為由自身免疫反應所引發(fā)的妊娠不良結局與抗磷脂抗體具有一定的相關性，目前抗磷脂抗體已經(jīng)成為自身免疫反應研究的熱點。有學者認為，妊娠期Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子的表達與妊娠合并疾病相關，但并無研究認為其與妊娠不良結局有關，在本文研究中分析妊娠期Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子與抗磷脂抗體表達對妊娠結局的影響，以證實妊娠期Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子、抗磷脂抗體與妊娠結局的關系，為臨床上妊娠不良結局進行預防和控制提供支持。

1 對象與方法

1.1 研究對象收集2014年1月至2017年12月河北省人民醫(yī)院就診的產(chǎn)婦作為研究對象，采用酶聯(lián)免疫吸附法對全部入組產(chǎn)婦測定血清抗心磷脂抗體IgA/G/M和抗β2糖蛋白I抗體IgA/G/M，將血清抗心磷脂抗體IgA/G/M陽性產(chǎn)婦作為對照組，共85例，將血清抗心磷脂抗體IgA/G/M和抗β2糖蛋白I（β2-GP1）抗體IgA/G/M同時陽性作為研究組，共86例。對照組所有產(chǎn)婦均為初產(chǎn)婦，年齡22～44歲，平均（32.12±10.32）歲，孕周6～16周，平均（11.22±5.01）周；觀察組所有產(chǎn)婦也均為初產(chǎn)婦，年齡22～43歲，平均（31.11±9.92）歲，孕周6～15周，平均（11.20±5.33）周，所有入組產(chǎn)婦年齡、孕期等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。排除標準：排除生殖道畸形的產(chǎn)婦；排除患有內(nèi)分泌疾病的產(chǎn)婦；排除患有遺傳性疾病的產(chǎn)婦；排除患有精神障礙、溝通障礙的產(chǎn)婦。本次研究所有產(chǎn)婦及其家屬均知情，均簽署了知情同意書，且經(jīng)過我院倫理委員會批準[倫理審批號：（2018）科研倫理審批第（107）號]。

1.2 方法

1.2.1 Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子相對表達量檢測取兩組產(chǎn)婦產(chǎn)前靜脈血3 mL將血漿分離出后在-80℃的環(huán)境下保存，使用Ficoll分離液將外周血單核細胞分離出，加入1 mL Trizol，在-80℃的環(huán)境下保存，提取RNA，之后對RNA純度、含量進行檢測，使用Takara逆轉錄試劑盒行逆轉錄處理后獲得cDNA，之后使用Primer 5.0軟件對引物序列進行設計，使用RT-PCR方法檢測產(chǎn)婦IL-33、ST2、GATA3 mRNA表達量，采用2-△△Ct方法計算出需要檢測的IL-33、ST2、GATA3 mRNA表達量。IL-33引物序列：上游：5′-TGACGGTGTTGATGGTAAGATG-3′，下游：5′-ACAGACTGTTCCTTGTTGTTGG-3′；ST2 引物序列：上游：5′-AGATGAGTCACTGGCATACG-3′，下游：5′-GAGAGGCTGGATGTTGTATT-3′；GATA3 引物序列：上游：5′-TTGTGGTGGTCTGTACAGTTC-3′，下游：5′-AGTACAGCTCCGGACTCTTC-3′；β-actin 引物序列：上游：5′-TGGCACCCAGCACAATGAA-3′，下 游 ：5′-CTAAGTTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3′。

1.2.2 妊娠不良結局統(tǒng)計對兩組產(chǎn)婦妊娠不良結局發(fā)生率進行統(tǒng)計，包括習慣性流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、胎盤早剝等。

1.2.3 抗磷脂抗體滴度值檢測取兩組產(chǎn)婦產(chǎn)前靜脈血3 mL，在室溫環(huán)境下靜置30 min，之后使用離心，3 000 r/min離心15 min，分離上層血清，在溫度為-70℃的環(huán)境下保存。使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測產(chǎn)婦ACA-IgA、ACA-IgG、ACA-IgM、β2-GP1-IgA、β2-GP1-IgA、β2-GP1-IgM抗體，使用全自動酶標儀定量檢測ACA-IgA、ACA-IgG、ACA-IgM、β2-GP1-IgA、β2-GP1-IgG、β2-GP1-IgM抗體滴度值，操作及結果判斷均按照試劑盒說明書進行，ACA陽性標準為＞12 RU/mL，抗β2-GP1陽性標準為20 RU/mL。

1.3 統(tǒng)計學方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。計量資料采用均數(shù)±標準差描述，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料比較采用百分率描述，兩組間比較采用χ2檢驗；相關性采用Pearson相關性分析，P＜0.05為具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組產(chǎn)婦Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子表達比較如表1所示，研究組產(chǎn)婦Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子IL-33 mRNA、ST2 mRNA、GATA3 mRNA相對表達量均低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1 兩組產(chǎn)婦Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子相對表達量比較Tab.1 Relative expression of type II intrinsic lymphocyterelated molecules in two groups of parturients ±s

表1 兩組產(chǎn)婦Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子相對表達量比較Tab.1 Relative expression of type II intrinsic lymphocyterelated molecules in two groups of parturients ±s

例數(shù)85 86組別對照組研究組t值P值IL-33 mRNA 1.03±0.16 0.78±0.01 14.460 0.001 ST2 mRNA 1.02±0.15 0.86±0.03 6.698 0.001 GATA3 mRNA 0.76±0.12 0.35±0.06 28.310 0.001

2.2 兩組產(chǎn)婦妊娠結局比較如表2所示，研究組產(chǎn)婦總不良妊娠結局發(fā)生率顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表2 兩組產(chǎn)婦妊娠結局比較Tab.2 Comparison of pregnancy outcomes between two groups 例（%）

2.3 妊娠期Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子與抗磷脂抗體表達與不良妊娠結局的相關性分析妊娠期Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子與抗磷脂抗體表達與不良妊娠結局的相關性采用Pearson相關性分析，結果如表3所示，IL-33與習慣性流產(chǎn)正相關，與早產(chǎn)、死胎、胎盤早剝無關；ST2與習慣性流產(chǎn)、死胎呈正相關，與早產(chǎn)、胎盤早剝無關；GATA3與習慣性流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、胎盤早剝均呈正相關；ACA-IgA、ACA-IgG、ACA-IgM與習慣性流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎盤早剝均呈現(xiàn)為正相關；β2-GP1-IgA、β2-GP1-IgG、β2-GP1-IgM抗體與習慣性流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、胎盤早剝均呈現(xiàn)為正相關。

3 討論

從生殖免疫學的觀點來看，妊娠的過程為一種特殊的機體免疫狀態(tài)，而妊娠不良結局的發(fā)生與機體免疫異常相關。

目前研究發(fā)現(xiàn)，在妊娠不良結局發(fā)生后，母體帶負電荷的蛋白質和血液中的蛋白質復合后通過免疫機制產(chǎn)生抗磷脂抗體，在正常的情況下機體處于磷脂細胞膜的脂質雙層保護中，母嬰界面處的磷脂不會被機體的免疫系統(tǒng)所識別[5-6]。目前臨床上已經(jīng)有病理學證據(jù)證實，抗心磷脂抗體在不良妊娠過程的發(fā)生中，會對前列環(huán)素的合成產(chǎn)生抑制作用，進而增加胎盤微血栓形成的幾率；抗心磷脂抗體抑制抗凝血蛋白、抗凝血酶Ⅲ，進而對凝血機制產(chǎn)生較為嚴重的破壞[7-8]。研究[9-11]認為，抗磷脂抗體的實質為與抗磷脂抗體相關一組抗體，其臨床表現(xiàn)為動靜脈血栓形成，進而成為血栓形成特征的抗體綜合征。抗磷脂抗體屬于自身免疫性抗體組合，包括抗β2糖蛋白I抗體、抗心磷脂抗體、狼瘡樣抗凝物[12]。當人體內(nèi)的抗磷脂抗體呈現(xiàn)為陽性后會發(fā)生動靜脈血栓，且此類動靜脈血栓的種類較多，包括視網(wǎng)膜血栓、深靜脈血栓、胎盤血栓、肺栓塞等[13-14]。另外WANG等[15]研究顯示，抗磷脂抗體會累及產(chǎn)婦子宮胎盤進而導致胎兒宮內(nèi)生長受限、子癇前期、流產(chǎn)以及胎盤早剝的發(fā)生?；谏鲜鲅芯?，在本文研究中，分析血清抗心磷脂抗體IgA/G/M和抗β2糖蛋白I抗體IgA/G/M陽性和血清抗心磷脂抗體IgA/G/M和抗β2糖蛋白I（β2-GP1）抗體IgA/G/M同時陽性產(chǎn)婦妊娠不良結局，結果顯示，抗心磷脂抗體IgA/G/M和抗β2糖蛋白I（β2-GP1）抗體IgA/G/M同時陽性產(chǎn)婦妊娠不良結局發(fā)生率較好，此結果說明抗磷脂抗體與產(chǎn)婦妊娠結局相關，與上述WANG等[15]研究結果保持一致。

表3 妊娠期Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子與抗磷脂抗體表達與不良妊娠結局的相關性分析Tab.3 Analysis of the relationship between expression of type II intrinsic lymphocyte-related molecules and anti-phospholipid antibody and adverse pregnancy outcomes±s

表3 妊娠期Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子與抗磷脂抗體表達與不良妊娠結局的相關性分析Tab.3 Analysis of the relationship between expression of type II intrinsic lymphocyte-related molecules and anti-phospholipid antibody and adverse pregnancy outcomes±s

相對表達量 早產(chǎn) 死胎IL-33 mRNA 0.67±0.12 ST2 mRNA 0.68±0.13 GATA3 mRNA 0.51±0.14 ACA-IgA 6.25±0.23 ACA-IgG 3.45±0.36 ACA-IgM 2.96±0.28 β2-GP1-IgA 23.98±3.86 β2-GP1-IgG 19.23±2.25 β2-GP1-IgM 20.12±3.15習慣性流產(chǎn)r=0.312 P=0.006 r=0.202 P=0.003 r=0.358 P=0.012 r=0.215 P=0.009 r=0.369 P=0.006 r=0.458 P=0.002 r=0.256 P=0.001 r=0.415 P=0.000 r=0.316 P=0.002 r=0.042 P=0.086 r=0.025 P=0.076 r=0.236 P=0.001 r=0.582 P=0.030 r=0.435 P=0.041 r=0.526 P=0.020 r=0.247 P=0.006 r=0.316 P=0.001 r=0.225 P=0.004 r=0.425 P=0.254 r=0.326 P=0.003 r=0.427 P=0.000 r=0.215 P=0.001 r=0.162 P=0.008 r=0.036 P=0.003 r=0.321 P=0.032 r=0.215 P=0.005 r=0.123 P=0.002胎盤早剝r=0.135 P=0.068 r=0.268 P=0.968 r=0.315 P=0.003 r=0.128 P=0.016 r=0.425 P=0.008 r=0.216 P=0.023 r=0.124 P=0.024 r=0.248 P=0.009 r=0.414 P=0.000

Ⅱ型固有淋巴細胞在Th2所介導的免疫應答中具有重要的意義[16]。有研究[17]發(fā)現(xiàn)，Ⅱ型固有淋巴細胞相關因子GATA3與子癇前期有關，GATA3是一種在1991年HolC等所報道的轉錄因子，對Th2細胞分化具有轉錄調(diào)節(jié)作用，屬于一種Th分化所必需的轉錄因子，且其表達盡在Th2細胞中。IL-33屬于IL-1家族中較為重要的成員之一，可介導機體炎癥的發(fā)生[18]。目前臨床上有研究認為，IL-33、ST2參與多種不良妊娠結局的發(fā)生，而ST2屬于IL-33的特異性受體[19]。在本文研究中，發(fā)現(xiàn)與單純抗心磷脂抗體IgA/G/M呈現(xiàn)為陽性的產(chǎn)婦相比，抗心磷脂抗體IgA/G/M和抗β2糖蛋白I抗體IgA/G/M同時呈現(xiàn)為陽性的產(chǎn)婦Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子IL-33 mRNA、ST2 mRNA、GATA3 mRNA相對表達量顯著降低，此結果說明，Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子與妊娠不良結局相關，與費倩倩等[20]研究中認為IL-33與復發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生有關的結果保持一致。在本文研究中對Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子、抗磷脂抗體的表達與不良妊娠結局的相關性進行分析，結果顯示，Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子IL-33、ST2、GATA3、ACA-IgA/G/M、β2-GP1-IgA/G/M與不良妊娠結局的發(fā)生有關。

綜上所述，妊娠期Ⅱ型固有淋巴細胞相關分子與抗磷脂抗體表達與妊娠不良結局具有一定的相關性，早期檢測IL-33、ST2、GATA3、ACA-IgA/G/M、β2-GP1-IgA/G/M可對妊娠不良結局進行預防和控制。