術前血清miR-483-5p水平在肝內膽管細胞癌診斷及預后中的價值

仝麟龍，劉占兵

(1.鄭州人民醫院，河南 鄭州 450000；2.北京大學第一醫院，北京 100034)

肝內膽管細胞癌(ICC)是僅次于肝細胞癌的第二大常見原發性肝癌，具有較高的發病率和病死率[1]。目前治療ICC最有效的方法是根治性切除術，但由于大多數患者明確診斷時已處于晚期，且常伴淋巴結轉移，根治性切除后易復發轉移，預后較差[2]。因此早期診斷及有效的預后評估對改善預后具有重要意義。微小RNA(miRNA)是一類非編碼小分子RNA，在多種惡性腫瘤中異常表達，與腫瘤的發生、發展及轉移等多個過程密切相關[3]。miR-483-5p是近年發現的一種miRNA，在腎上腺皮質癌、食管癌及肝癌中均存在異常表達，但其與ICC的發生、發展及預后關系的研究報道尚少[4-6]。本研究旨在檢測ICC患者術前血清miR-483-5p水平，分析其診斷及預后的評估價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年12月—2017年12月在鄭州人民醫院收治的行根治性切除治療的ICC患者91 例作為ICC組，其中男52 例，女39 例，年齡(53.8±13.2) 歲。另選同期40 例健康體檢者作為對照組，其中男23 例，女17 例，年齡(52.1±14.5) 歲。兩組受試者的性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。本研究通過鄭州人民醫院倫理委員會批準，所有研究對象均知情同意。納入標準：腫瘤首發且行根治性切除治療；術后病理學檢測確診為ICC者；術前未進行放化療；臨床資料及術后隨訪資料完整。排除標準：組織病理學檢測為ICC合并肝細胞癌者；術前接受輔助治療者；圍手術期死亡者；合并其他器官功能障礙或惡性腫瘤者。

1.2 方法

1.2.1 一般資料

統計ICC患者的年齡、性別、HBV感染、肝硬化、腫瘤數目、最大腫瘤直徑、腫瘤分化程度、TNM分期、血管侵犯、鄰近器官侵犯、淋巴結轉移及術后輔助治療等資料。

1.2.2 qRT-PCR檢測血清miR-483-5p水平

收集健康體檢者及患者(術前1～3 d內)的清晨空腹靜脈血，離心取上清，并利用RNA提取試劑盒提取總RNA，采用紫外分光光度計檢測總RNA的濃度和質量。利用反轉錄試劑盒將RNA反轉錄為cDNA，然后進行實時定量PCR分析，所有操作步驟嚴格按照試劑盒說明進行。PCR擴增條件：95 ℃預變性10 min，95 ℃ 14 s，60 ℃ 20 s，共40個循環。以U6為參照，利用2-△△Ct法計算miR-483-5p的相對表達量。

1.3 術后隨訪

治療結束后1 年內每2～3個月隨訪1 次，1 年后若無復發轉移癥狀則改為3～6個月隨訪1 次，若隨訪過程中出現復發或轉移，則改為每2～3個月隨訪1 次。本研究隨訪截止于2018年12月，存活隨訪時間為12～36個月。

1.4 統計學方法

2 結 果

2.1 miR-483-5p在ICC患者血清中的表達

采用qRT-PCR法檢測血清中miR-483-5p的表達水平，結果顯示，ICC組患者血清miR-483-5p相對表達量為2.84±0.45，顯著高于對照組的2.33±0.57，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 血清miR-483-5p診斷ICC的能力

ROC曲線分析顯示，miR-483-5p診斷ICC的曲線下面積(AUC)為0.758，敏感性55.00%，特異性86.81%，最佳截點值為2.39(見圖1)。

圖1 ROC曲線分析

2.3 miR-483-5p不同表達水平組間臨床資料比較

根據miR-483-5p的中位值將ICC患者分為低表達組和高表達組。兩組患者一般臨床資料見表1。

2.4 不同miR-483-5p表達水平組間生存情況分析

Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，高表達組患者的整體生存期明顯低于低表達組患者(P<0.05)(見圖2)，說明術前高miR-483-5p水平與術后生存期有關。

2.5 ICC患者總生存期的單因素及多因素分析

單因素Cox回歸分析發現，血清miR-483-5p水平及HBV感染、腫瘤數目、最大腫瘤直徑、TNM分期、血管侵犯、鄰近器官侵犯、淋巴結轉移及術后輔助治療與ICC患者術后生存期有關(見表2)。多因素Cox回歸分析進一步表明，HBV感染、腫瘤數目、最大腫瘤直徑、TNM分期、血管侵犯、鄰近器官侵犯及淋巴結轉移是ICC患者術后生存期的獨立影響因素(見表3)。

表1 不同miR-483-5p表達水平組間臨床資料比較

圖2 Kaplan-Meier生存曲線分析

3 討 論

miRNA已成為腫瘤研究的熱點，在多種惡性腫瘤患者血清及腫瘤組織中異常表達，與腫瘤的發生、發展密切相關，可作為早期診斷腫瘤的檢測指標。miR-483-5p是近年來發現的與腫瘤相關的miRNA，在舌鱗癌、卵巢癌及前列腺癌等腫瘤的發生、發展過程中有促癌作用[7-9]。劉媛等[10]研究發現，結直腸癌組織中的miR-483-5p相對表達量明顯高于癌旁正常組織，且miR-483-5p診斷結直腸癌的AUC為0.713，敏感性和特異性分別為50.67%和85.33%。Xu等[11]研究發現miR-483-5p在口腔鱗狀細胞癌患者血清中顯著升高，與腫瘤遠處轉移、TNM分期及淋巴結轉移顯著相關，同時其診斷口腔鱗狀細胞癌的AUC為0.85，敏感性特異性分別為0.853和0.746。林延延等[12]研究肝細胞癌患者血清中miR-483-5p表達水平明顯高于慢性乙肝患者和健康對照者，且miR-483-5p診斷肝細胞癌的AUC值為0.74，靈敏性和特異性分別為74%和66%，說明miR-483-5p對肝癌具有一定的診斷價值。本研究結果顯示ICC組患者的血清miR-483-5p水平明顯高于對照組；ROC曲線分析顯示，血清miR-483-5p診斷ICC的AUC為0.758，敏感性和特異性分別為55.00%和86.81%，說明miR-483-5p在ICC的發生發展中扮演重要角色，對ICC的診斷具有一定的準確性，與其在肝細胞癌中的作用一致[6，12-14]。

表2 單因素分析

根治性切除術是ICC的常用臨床治療方案，但術后復發率較高，預后較差，因此尋找有效的術前預后評估指標對于改善ICC預后具有重要作用，但目前尚缺乏特異性較高的術前預后評估指標[15]。研究發現miR-483-5p與多種惡性腫瘤患者的預后相關。Xue等[16]研究表明，食管鱗狀細胞癌癌組織中miR-483-5p表達水平明顯高于癌旁正常組織，且與TNM分期、淋巴結轉移、T分期呈正相關；同時高miR-483-5p水平患者的總體生存期明顯縮短，且miR-483-5p表達是食管鱗狀細胞癌患者總體生存期和無病生存期的獨立預后因素。Wang等[17]研究發現低濃度miR-483-5p鼻咽癌患者5 年生存期優于高濃度的鼻咽癌患者。Qu等[18]研究發現高血漿miR-483-5p水平骨髓瘤患者的無進展生存期明顯低于低miR-483-5p水平患者。本研究結果顯示，術前高miR-483-5p水平ICC患者的整體生存期明顯低于低miR-483-5p水平患者；單因素及多因素Cox回歸分析發現，血清miR-483-5p水平與ICC患者術后生存期有關，但不是生存期的獨立影響因素，說明術前血清miR-483-5p水平與腫瘤患者預后有關，與現有關于惡性腫瘤的研究結論基本一致[18-19]。此外，本研究還發現，HBV感染、腫瘤數目、最大腫瘤直徑、TNM分期、血管侵犯、鄰近器官侵犯及淋巴結轉移是ICC患者術后生存期的獨立影響因素，與之前的研究結果一致[20-21]。

表3 多因素Cox回歸分析結果

綜上所述，ICC組患者血清miR-483-5p水平明顯升高，且具有一定診斷價值，同時術前高miR-483-5p水平患者的生存期相對較短，推測其可作為ICC早期診斷及預后評估參考指標之一。但由于本研究的標本數量及標本來源存在局限性，血清miR-483-5p水平對ICC的診斷價值及預后評估價值仍需要進行大數據及多中心的臨床實驗研究。