小兒重癥肌無力血清乙酰膽堿受體抗體的測定及其臨床意義

王麗敏，譚 慧

（貴陽市婦幼保健院，貴州 貴陽 550002）

重癥肌無力（MG）是一種由乙酰膽堿受體抗體介導、細胞免疫依賴、補體參與，累及神經肌肉接頭突觸后膜，引起神經肌肉傳遞障礙，出現骨骼肌收縮無力的獲得性自身免疫性疾病，其主要發生機制是與乙酰膽堿的抗體含量有關，在相關文獻中對患兒的血清AcbR-Ab診斷MG具有一定的特異性診斷價值[1]。而在上世紀有關學者對MG患者的胸腺異常進行了研究，發現血清中的一些成分會對神經肌肉組織造成影響，致使血清中補體的水平降低，可以說明MG是一種免疫性疾病，但其發病機制仍是未知，但相關推斷說明此病可能是由多基因調控與多種機制參與調節的復雜型疾病[2]。本次調查針對ELISA檢測法對44例患兒的血清中AchR-Ab進行檢測，對其臨床意義展開探討，現主要內容如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料

遴選2015年5月—2020年4月44例我院神經科病房收入的MG患兒（≤18周歲），根據癥狀、體征及實驗室檢查結果，以新斯的明試驗和乙酰膽堿受體抗體為主。被確診為MG，其中男性患兒20例，女性患兒24例，年齡平均數為（4.2±1.11）歲（1歲2月～13歲）。已經確診的患者經腎上腺皮質激素與溴化吡啶斯的明治療后，2個月后對治療患者或者家屬進行電話隨訪，確認臨床癥狀消失后，無異常表現，患者康復；對照組為健康體檢者21例與非MG患者16例，年齡平均數為（9.12±0.97）歲（3～6歲）。根據患者Osseman進行分級判定：其中Ⅱa型43例、Ⅱb型1例，根據病程對其進行調查。

1.2 血清中AchR-Ab的檢測

利用ELISA檢測法、AchR-Ab試劑（此種試劑主要涵蓋標準陽性試劑與標準陰性），主要內容為：①包被糖原，利用純化糖原0.1 ml/孔，表面包被聚苯乙烯微量反應扳凹孔后，于4℃條件下保存一夜，以PH7.4，0.01 mol/L的PBST溶液進行反復洗滌，共洗滌3次，每次持續3分鐘以上。②封板，以5%的小牛血清以及PH值為7.4的PBSTQ ml/孔，在37℃下予以溫浴保存。③將待測血清稀釋為Q1m1/孔，所有血清樣本可設置復孔，而每塊板均可以陽性或者陰性進行對照，37℃下予以溫育反應1.5 h，而PBSTQ的洗滌環節如上。④加酶標抗體，可用稀釋后的HRP-鼠抗體IgGMcAbQ1m1/孔，于37℃下對其進行溫育反應15分鐘，以PBSTQ的洗滌環節，如上。⑤每孔位滴入5mol/LH2SO4予以滴止反應。⑥使用酶聯儀器在吸光度為490 nm處進行吸光度檢驗。

1.3 診斷標準

①將酶標儀器與打印機打開，在恒溫下將樣本預熱5 min。②將酶標儀的波長調試為492 nm，將其與單孔空白A1進行對照，反應板置于酶標儀后，待空白孔完成參數調零經后，將各部位的OD值進行測量。③當陽性表現的血清中的OD值高于陰性質控血清值2.5后，此時可以說明試劑盒的反應成功且實驗操作為正確，反之應當反復進行實驗論證結果的可行性。④當MG患者血清中的OD值與陰性質控血清中的OD值作比后，說明P/N的比值大于2.5表現為陽性，而P/N的比值小于等于2.5這說明為陰性表現[3]。

2 結 果

將ELISA檢測法對44例MG患者經治療前后的血清比較，其中AchR-Ab的確切陽性率表現為50.00%（22/44），1例可疑陽性2.27%（1/44），未見結果為18.18%（8/44）。

按年齡對MG患者予以分組，其中年齡在3歲以上的患者22例，陽性率為68.18%（15/22）；3歲以下的患者22例，陽性率表現為36.36%（8/22）。經卡方檢驗后，2組數據比較具有明顯差異（P＜0.05），見表1。對比MG組與對照組中血清AchR-Ab的變化狀況，其中健康組成員陽性率為0%，非MG患者組陽性率為0%，MG組為63.88%，其中組間比較差異較為明顯，可比較，P＜0.01。見表2。在MG患者組、非MG患者組、對照組中健康組成員P/N評分低于非MG患者同時低于MG組（P＜0.01），比較差異明顯可比較，而陽性率的比較中健康組等于非MG組，但低于MG組。

表1 MC患者的血清中AchR-Ab在年齡因素影響下的變化

表2 3組患者血清中AchR-Ab對比

3 討 論

重癥肌無力（MG）在臨床上可侵犯到神經-肌肉接頭處乙酰膽堿受體（AchR-Ab），屬于一種自身免疫性缺陷疾病。AchR-Ab是重癥肌無力的重要致病因素[4]。該抗體可通過補體對細胞進行破壞，而加快AchR-Ab的降解，而對AchR-Ab產生損害作用，對乙酰膽堿的傳遞造成阻礙，誘發小兒出現重癥肌無力。近些年來臨床實驗室通過對MG患兒與健康患兒的乙酰膽堿受體的分布狀況進行對比，在大量研究工作的落實下，結果說明MG患者的血清AchR-Ab的滴度表現在逐年遞增，在本次調查中的44例小兒患者中，乙酰膽堿受體抗體的陽性率表現為50%，與相關調查相符[5]。健康獻血人員與非MG患者的血清學檢測中并未出現一例陽性征表現。而MG組與對照組的比較中，差異較大，此項結果說明了乙酰膽堿對于MG疾病的抗體成分具有較高的敏感性，而乙酰膽堿受體抗體是MG疾病診斷中較為重要的特異性指標。本文作者認為血清中乙酰膽堿的測定對于臨床中疑似MG的病理表現具有較好的鑒別意義。

現階段對于ELISA鑒別MG患者中血清AchR-Ab診斷具有較高的靈敏度與特異性，具有操作簡便、經濟實惠以及無創等優勢，在臨床檢測中具備較高的價值，是目前在免疫學檢測中較為常用的技術。ELISA檢測主要通過抗原、抗體的特異性結合將其與待檢物形成復合結構的混合物，根據底物中的顯色變化，即OD值對結果進行判斷。抗原在免疫學中定義為可與抗體進行結合的免疫球蛋白具有較強的特異性。而免疫測定有關的免疫擔保主要包含IgG、IgM與IgA。機體出現微生物感染跡象后，進行免疫反應時首先產生IgM抗體，然后產生IgG抗體。在一段時間后，IgM抗體逐漸減少并消失，但IgG抗體可長期保存，并在疾病痊愈后仍可持續存在數年。抗原抗體結合的原理是通過抗原中的抗原決定簇和抗體的結合受體在化學結構與構型特點上進行互補，而抗原抗體具有較高的特異性表現。抗原抗體反應可將此類免疫測定通過特異的血清學檢測方法進行分離，用于觀察與鑒別。

綜上所述，MG患兒經治療后體內血清乙酰膽堿的變化水平較高，結果說明了治療后的患兒血清抗體水平得到了降低，這表明激素與溴化吡啶斯的明對于MG患者的發病具有較好的治療作用，而相關檢測患兒的血清中乙酰膽堿的血清分布水平對于MG療效同樣具有一定客觀參考意義。