硫辛酸對(duì)蛋雞早期抗氧化及免疫功能的影響

崔 君， 秦 蕾， 田川堯， 李留安， 張建斌

（1. 吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，吉林長春130062；2.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津300384）

α-硫辛酸（alpha-lipoic acid，LA）是由脂肪酸和半胱氨酸合成，作為一種條件必需營養(yǎng)素，在線粒體能量代謝、機(jī)體的抗氧化（Bilska，2005；Packer，1995）及人類疾病的預(yù)防與保健等方面有重要作用。隨著人們對(duì)畜產(chǎn)品品質(zhì)需求的提高，其開始在肉雞（Chen，2011）和豬（Bai，2011）日糧中應(yīng)用。研究表明在肉雞日糧中添加硫辛酸可以改善脂肪代謝（Imik，2009）和肌肉品質(zhì)（Arshad，2011）。 同時(shí)還可以降低鵪鶉葡萄糖和甘油三酯的含量（Hamano，2002）。 另外， 其在提高動(dòng)物機(jī)體抗氧化、緩解氧化應(yīng)激、抑制機(jī)體脂質(zhì)過氧化水平方面的作用已有報(bào)道， 但鮮有硫辛酸對(duì)雪山雞血液抗氧化及免疫功能作用的報(bào)道。

雪山雞是以我國優(yōu)質(zhì)地方良種藏雞、 茶花雞為主要素材， 經(jīng)多種雜交選育而成的品種（欒德琴，2007）。 具有早期生長快、繁殖性能高、肉質(zhì)鮮美等特點(diǎn)，深受廣大消費(fèi)者喜愛（宋益等，2015）。本試驗(yàn)選擇22 周齡的雪山雞作為研究對(duì)象，通過在飼料中添加不同濃度的硫辛酸， 研究其對(duì)雪山雞血液中抗氧化功能及免疫功能作用的影響，以期為雪山雞的生產(chǎn)提供指導(dǎo)， 同時(shí)也為硫辛酸在雪山雞中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 硫辛酸為淡黃色、黃色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，幾乎無味，購于西安澤邦生物科技有限公司，含量為99.0%。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)動(dòng)物選用22 周齡雪山雞288 只。 試驗(yàn)共進(jìn)行7 周，其中預(yù)飼期1周， 正式試驗(yàn)6 周。 整個(gè)飼養(yǎng)試驗(yàn)均在雞舍內(nèi)進(jìn)行，采用籠養(yǎng)方式，自由飲水，每天飼喂2 次（8：00和14：00），收蛋2 次（10：00 和16：30），雞舍采用人工光照和自然光照相結(jié)合，早晚補(bǔ)光方式，每天光照時(shí)間為16 h，室內(nèi)通風(fēng)良好，定期消毒與清除糞便。 其他管理按常規(guī)進(jìn)行。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與日糧 試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組和試驗(yàn)組共3 個(gè)處理，對(duì)照組為基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)1 組為基礎(chǔ)日糧+300 mg/kg 硫辛酸， 試驗(yàn)2 組為基礎(chǔ)日糧+500 mg/kg 硫辛酸。 每個(gè)處理6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)16 只雞。 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 血液樣本采集及測定 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各處理組每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1 只雞，共6 只雞，于清晨空腹翅靜脈采血，2000 g 離心分離血清，-20 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?采用日立7600 全自動(dòng)生化分析儀對(duì)谷胱甘肽過氧化物酶 （GSH-Px）， 超氧化物歧化酶（SOD）， 血清總抗氧化能力 （T-AOC）， 丙二醛（MDA）， 白細(xì)胞介素-2 （IL-2）， 白細(xì)胞介素-4（IL-4）， 腫瘤壞死因子-α （THF-α）， 干擾素-γ（INF-γ），免疫球蛋白A （IgA），免疫球蛋白M（IgM），免疫球蛋白G（ IgG），肌酐（CRE），γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶（GGT），尿酸（UA）進(jìn)行測定。

1.5 數(shù)據(jù)分析 對(duì)所有數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件中的ANOVA 程序進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行鄧肯氏（Duncan）多重比較。 P ＜0.05 為差異顯著，P ＜0.01 為差異極顯著，所有測定結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧中添加硫辛酸對(duì)蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表2 可知，試驗(yàn)1 組和試驗(yàn)2 組GSH-Px和SOD 顯著高于對(duì)照組（P ＜0.05），試驗(yàn)2 組高于試驗(yàn)1 組， 但差異不顯著（P ＞0.05）。 試驗(yàn)組TAOC 均高于對(duì)照組，差異不顯著（P ＞0.05）。試驗(yàn)組MDA 均低于對(duì)照組，但差異不顯著（P ＞0.05）。

表2 日糧中添加硫辛酸對(duì)蛋雞血液抗氧化指標(biāo)的影響

2.2 日糧中添加硫辛酸對(duì)蛋雞血清免疫功能的影響 由表3 可知， 試驗(yàn)組IgM 顯著高于對(duì)照組（P ＜0.05），試驗(yàn)組IgG 高于對(duì)照組，但各組間差異不顯著（P ＞0.05），試驗(yàn)組IL-2 顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05），試驗(yàn)2 組IL-4 顯著低于試驗(yàn)1 組和對(duì)照組（P ＜0.05），試驗(yàn)1 組低于對(duì)照組（P ＞0.05）。 試驗(yàn)組TNF-α 均低于對(duì)照組（P ＞0.05），試驗(yàn)組INF-γ 均高于對(duì)照組（P ＞0.05）。

表3 日糧中添加硫辛酸對(duì)蛋雞血清免疫功能的影響

2.3 日糧中添加硫辛酸對(duì)蛋雞血清肌酐、γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶及尿酸的影響 由表4 可知， 試驗(yàn)2組CRE 高于對(duì)照組，試驗(yàn)1 組低于對(duì)照組，但各組間差異不顯著（P ＞0.05）。 試驗(yàn)2 組GGT 顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05），試驗(yàn)1 組與對(duì)照組差異不顯著（P ＞0.05）。 試驗(yàn)組UA 低于對(duì)照組，但差異不顯著（P ＞0.05）。

表4 日糧中添加硫辛酸對(duì)蛋雞血清肌酐、γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶及尿酸的影響

3 討論

3.1 日糧中添加硫辛酸對(duì)蛋雞血液抗氧化功能的影響 GSH-Px 是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶，可清除體內(nèi)活性氧和自由基，是檢測機(jī)體抗氧化能力的常用指標(biāo)之一（王月蘭，2002）。 SOD 也是機(jī)體中發(fā)揮抗氧化功能的一種重要酶，可以清除氧自由基和羥基自由基，從而保護(hù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能（楊耀翔，2017）。 本研究發(fā)現(xiàn)， 隨著硫辛酸的添加， 蛋雞血清中GSH-Px 和SOD 含量顯著高于對(duì)照組，這表明，硫辛酸可以減少脂質(zhì)過氧化物的生成， 從而提高機(jī)體對(duì)氧化損傷的抵抗能力。T-AOC 是衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)（李亮，2017）。 本研究發(fā)現(xiàn)，添加硫辛酸對(duì)總抗氧化能力并無顯著影響，從總體上反映機(jī)體防御體系抗氧化（抗氧化酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)）能力并無差異。白兆鵬（2004）研究表明，硫辛酸組的蛋雞血清中T-AOC 高于對(duì)照組。MDA 含量可以反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度，也可間接反映細(xì)胞受損的程度，其在血清中含量高，說明脂質(zhì)受到較強(qiáng)的攻擊。本研究表明，硫辛酸組和對(duì)照組蛋雞血清MDA 含量差異不顯著。 從這些指標(biāo)來看， 在雪山雞日糧中添加硫辛酸可不同程度提高機(jī)體的抗氧化水平， 從而降低脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能的完整性，從而提高機(jī)體各組織器官的機(jī)能。

3.2 日糧中添加硫辛酸對(duì)蛋雞免疫功能的影響免疫球蛋白由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生， 是判斷機(jī)體體液免疫功能強(qiáng)弱的常用指標(biāo)，IgM 由漿細(xì)胞分泌，產(chǎn)生于初次免疫反應(yīng)（Rezaei，2015）。 IgA 存在于外分泌液， 主要用于中和病毒以及凝集抗原（Ohashi，2014）。 IgG 是機(jī)體抗感染的主要物質(zhì)，直接參與體液免疫反應(yīng)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加硫辛酸可顯著提高血清中的IgA 和IgM。 表明硫辛酸可增加機(jī)體的免疫力。 IL-2 及IL-4 分別由激活的T 淋巴細(xì)胞和Th2 細(xì)胞分泌，在機(jī)體體液免疫中均起著關(guān)鍵作用， 參與抗體反應(yīng)等多項(xiàng)機(jī)體反應(yīng)（王海燕等，1993）。 TNF-α 是炎癥反應(yīng)過程中重要前炎性因子，與巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等免疫細(xì)胞中的受體結(jié)合從而產(chǎn)生一系列的炎癥因子，本研究結(jié)果表明，添加500 mg/kg 硫辛酸，可顯著降低IL-2、IL-4 含量。 這與張紅瑞（2019）的研究結(jié)果相同。IFN-γ 又稱為免疫調(diào)節(jié)作用干擾素，參與免疫調(diào)節(jié)，又有抗炎的作用（劉肖萍，2011）。 本研究結(jié)果表明，硫辛酸可以提高IFN-γ 含量。 硫辛酸可以通過提高免疫球蛋白（IgA、IgM 及IgG）及IFN-γ 含量，抑制炎癥反應(yīng)（如降低炎癥因子IL-2、IL-4 及TNF-α），從而提高機(jī)體的免疫力。

3.3 日糧中添加硫辛酸對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)的影響 血清中的各類化學(xué)成分來源于細(xì)胞的新陳代謝， 化學(xué)成分的變化能夠反映特定器官或組織的機(jī)能狀態(tài)。 蛋雞血清中尿酸的含量是氨基酸和蛋白質(zhì)平衡的重要標(biāo)志， 其含量越低表明機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用狀況越好（張君超，2012）。 肌酐和γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶在醫(yī)學(xué)中常用于反映機(jī)體的肝腎功能。本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加硫辛酸可顯著降低蛋雞血清中γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶含量，降低尿酸及肌酐的含量， 這表明添加硫辛酸可提高機(jī)體的健康水平。

4 結(jié)論

在雪山雞日糧中添加硫辛酸可顯著提高其血清中GSH-Px、SOD、IgA 和IgM 含量， 顯著降低IL-2、IL-4 及GGT 含量， 從而提高動(dòng)物機(jī)體的健康水平。