蘋果腐爛病菌對3種殺菌劑抗藥性與敏感性檢測

劉向陽

(陜西省延安市洛川縣果樹研究所，陜西洛川 727400)

洛川縣是中國蘋果優生區的核心地帶[1]，蘋果是洛川縣的主導產業。近年來，洛川蘋果樹腐爛病(ValsamaliMiyabeet Yamada)的發生危害逐年加重[2]，防治主要以刮治、噴灑石硫合劑等殺菌劑為主，但效果并不明顯[3]。筆者測定了洛川縣10個鄉鎮的蘋果樹腐爛病分離菌株對常用的3種殺菌劑戊唑醇、嘧霉胺、苯醚甲環唑的抗藥性和敏感性，為防治腐爛病提供參考。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

供試菌。由洛川縣10個蘋果主產鄉鎮的蘋果樹發病枝條上分離獲得10個菌株(表1)。

表1 洛川縣10個鄉鎮的蘋果樹腐爛病菌分離菌株

供試殺菌劑3種，430g/L戊唑醇懸浮劑(江蘇龍燈化學有限公司)；400g/L嘧霉胺懸浮劑(永農生物科技有限公司)；40%苯醚甲環唑懸浮劑(利民化工股份有限公司)。

1.2 試驗方法

PDA培養基制備。土豆400g，加蒸餾水2L，沸水煮30分鐘，過濾去渣，加入蒸餾水補至體積2L，加瓊脂40g，葡萄糖40g，煮至瓊脂融化，倒入錐形瓶定容至200ml，以121℃加熱30分鐘滅菌備用。

含藥培養基制備。將上述錐形瓶內PDA培養基置于微波爐內融化后放在無菌操作臺上，將3種殺菌劑以1000μg/mL的藥劑為母液進行8個濃度梯度稀釋(10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078125μg/mL)后，加入到50℃左右的培養基中充分混勻，迅速倒入培養皿中制成含藥的系列培養基平板[4]。

檢測10個分離菌株對3種藥劑的抗藥性。采用最低濃度抑制法 (MIC)[5]，參照嚴紅等[6]方法適當修改。將10個分離菌株分別接種到含有430g/L戊唑醇懸浮劑、400g/L嘧霉胺懸浮劑、40%苯醚甲環唑懸浮劑的PDA平板上，各藥劑濃度均為10μg/mL。能在其上生長的視為抗性菌，不能生長的視為敏感菌。

測定10個分離菌株對3種藥劑的敏感性。采用菌絲生長速率法[7]，將活化3天后的10個菌株用5mm打孔器分別接種到8個濃度梯度的含藥培養基平板。3天后用十字交叉法測量菌落直徑[8]。以不加農藥的PDA平板做對照，處理和對照均重復3次。計算抑制率和毒力回歸方程。數據采用Excel和DPS軟件計算3種殺菌劑對10個分離菌株的EC50、毒力回歸方程，相關系數及其置信區間。

抑制率(%)=(對照菌落直徑均值-處理菌落直徑均值)/(對照菌落直徑均值-接種菌餅直徑)×100

2 結果與分析

2.1 10個分離菌株對3種殺菌劑的抗藥性

如表2，10個分離菌株對400g/L嘧霉胺均產生抗藥性，均有菌落生長。10個分離菌株中，只有10號菌株對430g/L戊唑醇產生抗藥性，有菌落生長，其余菌株未產生抗藥性，無菌落生長。10個菌株對40%苯醚甲環唑均未產生抗藥性，均無菌落生長。

表2 蘋果樹腐爛病10個分離株菌對3種殺菌劑的抗藥性

注：+表示菌有抗藥性，有菌落生長；-表示菌無抗藥性，無菌落生長。

2.2 10個分離菌株對3種藥劑的敏感性

如表3，3種藥劑對10個分離菌株的EC50值：430g/L戊唑醇0.1385～0.5239μg/mL，大小值相差3.78倍(均值0.25μg/ml)；400g/L嘧霉胺0.3790～2.1340μg/mL，大小值相差5.63倍(均值1.13μg/ml)；40%苯醚甲環唑0.1229～0.3313μg/mL，大小相差2.70倍(均值0.20μg/ml)。表明10個分離菌株對40%苯醚甲環唑的敏感性差異最小，穩定性最好；對400g/L嘧霉胺敏感性差異最大，穩定性最差；對430g/L戊唑醇的敏感性和穩定性居中。

在表3的毒力回歸方程中(方程是根據藥劑不同濃度下菌落大小與對照比較，算出抑制率與含藥濃度的關系，y代表抑制率，x代表藥劑濃度)，3種殺菌劑在不同濃度下相關系數在0.8436～0.9992之間，其相關性為強相關性。

3 小結與討論

由洛川10個鄉鎮的蘋果樹腐爛病分離菌株中，10個菌株對40%苯醚甲環唑懸浮劑均未產生抗藥性。只有10號菌株對430g/L戊唑醇懸浮劑產生抗藥性，其余9個菌株未產生抗藥性。10個菌株對400g/L嘧霉胺懸浮劑均產生抗藥性。10個分離菌株對40%苯醚甲環唑的敏感性差異最小，穩定性最優。對400g/L嘧霉胺的敏感性差異最大，穩定性最差。

3種殺菌劑對10個分離菌株的EC50值，400g/L嘧霉胺0.3790～2.1340μg/ml>430g/L戊唑醇0.1385～0.5239μg/ml>40%苯醚甲環唑0.1229～0.3313μg/ml。嘧霉胺的EC50值相對最大，說明其抑菌效果最差，戊唑醇的EC50值較大，抑菌效果較好；苯醚甲環唑的EC50值最小，抑菌效果最好。因此，建議生產上防治蘋果樹腐爛病時優先選用苯醚甲環唑。

本試驗不足之處在于不能完全保證錐形瓶中只有200ml培養基，經過高壓滅菌冷卻后會出現一定偏差導致所配濃度不精準。周海波等人[9]研究了山西省不同地理來源的菌株敏感性無明顯差異，本研究與其結果一致。索朗拉姆等人[10]測定蘋果腐爛病對苯醚甲環唑敏感性得出的EC50值，本研究與其不一致，原因可能是所用藥劑的有效成分含量不同。