NK細胞和Treg細胞亞群在宮頸癌患者外周血中表達及臨床意義

劉洪博 王文智 石慶芳

(衡水市人民醫(yī)院 1病理科，河北 衡水 053000；2檢驗科；3腫瘤內(nèi)科)

宮頸癌臨床發(fā)病率及死亡率高居不下，僅次于乳腺癌，也是導致我國女性死亡的主要惡性腫瘤〔1〕。流行病學研究結(jié)果顯示，我國宮頸癌的每天新發(fā)病例不低于15萬，而近年來其臨床發(fā)病呈明顯的年輕化趨勢，對女性健康造成嚴重威脅〔2〕。有學者指出，患者的免疫功能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，其中細胞免疫在機體抗腫瘤免疫中占據(jù)十分重要的主導地位〔3〕。調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)是人體內(nèi)重要的負調(diào)節(jié)免疫細胞，在免疫疾病及惡性腫瘤中起到十分重要的免疫耐受調(diào)節(jié)細胞，并可有效調(diào)節(jié)機體免疫功能的抗腫瘤免疫反應〔4〕。自然殺傷(NK)細胞是較為常用的評估機體細胞免疫功能的常用指標，有學者指出NK細胞與腫瘤發(fā)生、發(fā)展等具有密切相關關系〔5〕。但NK細胞和Treg細胞亞群與宮頸癌的關系仍鮮有報道。本研究主要分析NK細胞和Treg細胞亞群在宮頸癌患者血中的表達及其與宮頸癌的關系。

1 資料與方法

1.1納入及排除標準 納入標準：(1)經(jīng)病理學檢查確診為宮頸癌；(2)患者均依照TNM分期標準分期；(3)精神正常，可正常配合本研究；(4)對本研究知情并簽署知情同意書。排除標準：(1)入組前行化療或放療治療者；(2)存其他免疫系統(tǒng)疾病者；(3)入組前半年內(nèi)采用免疫抑制劑治療者；(4)主動申請退出本研究者。

1.2一般資料 經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，將衡水市人民醫(yī)院2016年6月至2018年7月收治的120例宮頸癌患者作為觀察組研究對象，并選取同期行健康體檢的女性作為對照組。觀察組患者年齡60～68歲，平均(64.28±2.18)歲，其中鱗癌97例、腺癌23例，TNM分期Ⅰ期27例、Ⅱ期35例、Ⅲ期32例、Ⅳ期26例，對照組120例，年齡61～69歲，平均(65.28±2.36)歲，兩組患者臨床資料差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.3方法 所有受試者在入組后采集空腹靜脈血，使用貝克曼流式細胞檢測儀利用流式細胞術法檢測患者血中NK細胞和Treg細胞，使用CD16+CD56+抗體標記NK細胞，使用CD4+CD25+Foxp3+抗體標記Treg細胞，所用抗體均購買自南京福麥斯生物科技有限公司，并遵照抗體使用說明書推薦倍數(shù)稀釋抗體，依照流式細胞儀操作規(guī)程進行檢測。

1.4統(tǒng)計學方法 使用SPSS20.0軟件行t檢驗、方差分析、Logistic回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組NK細胞及Treg細胞檢測結(jié)果比較 觀察組NK細胞水平明顯低于對照組(P<0.05)，Treg細胞水平明顯高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組NK細胞及Treg細胞檢測結(jié)果比較

2.2不同TNM分期患者血中NK細胞及Treg細胞水平 Ⅰ期患者NK細胞水平最高，Ⅳ期患者NK細胞水平最低，不同臨床分期患者組間NK細胞水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，Ⅰ期患者外周血中Treg水平最低，Ⅳ期患者外周血中Treg水平最高，不同臨床分期患者Treg細胞水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同TNM分期患者外周血中NK細胞及Treg細胞水平比較

2.3NK細胞及Treg細胞水平與宮頸癌分期關系 NK細胞及Treg細胞是影響宮頸癌分期的獨立性影響因素(P<0.05)，見表3。

表3 NK細胞及Treg細胞水平與宮頸癌分期關系

3 討 論

有研究指出，我國近年來宮頸癌臨床發(fā)病率呈明顯的逐年增高趨勢，且也伴隨出現(xiàn)明顯年輕化的特點〔6〕。機體的免疫功能狀態(tài)與體內(nèi)多種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關，當機體免疫功能正常時，其具有完善的免疫識別、免疫監(jiān)視功能，但在患者出現(xiàn)腫瘤后，細胞免疫功能降低，而細胞免疫為抗腫瘤免疫的重要組成部分〔7〕。因而對宮頸癌患者體內(nèi)細胞免疫功能變化情況進行及時監(jiān)測，有助于對患者進行及時診斷、評估和治療，具有十分重要意義。

NK細胞是人體內(nèi)中重要的一類獨立淋巴細胞群，且體內(nèi)NK細胞在發(fā)揮作用是無須先致敏，且無須補體與抗體激活而起到直接殺傷作用〔8〕。有研究指出，在腫瘤患者體內(nèi)NK細胞與細胞毒T細胞作用機制類似，可與腫瘤細胞表面受體結(jié)合并有效釋放并分泌細胞毒性因子而起到殺傷腫瘤細胞的作用〔7〕。此外，NK細胞與腫瘤細胞結(jié)合后可通過釋放穿孔素與顆粒酶介導溶解腫瘤細胞，且NK細胞僅可有效殺傷腫瘤細胞但對人體內(nèi)正常細胞無細胞毒作用〔9〕。有學者指出，NK細胞是機體免疫防御系統(tǒng)中的重要組成部分，也是人體內(nèi)重要的免疫防線，并在抗腫瘤免疫系統(tǒng)中起重要作用〔10〕。CD16+CD56+是NK細胞表面重要的標志物，可通過標記細胞表面CD16+CD56+對NK細胞進行檢測〔11〕。本組研究結(jié)果顯示，健康對照組患者血中NK細胞明顯高于宮頸癌組，后對不同臨床分期患者進行分析發(fā)現(xiàn)隨著臨床分期加重患者血中NK細胞水平顯著降低，且NK細胞可作為影響宮頸癌患者病情發(fā)展的獨立影響因素。結(jié)果表明，宮頸癌患者血中NK細胞水平明顯偏低，且患者細胞免疫功能相對較低，其可能與抗腫瘤過程中需要消耗人體中大量NK細胞，且隨著患者病情加重其所需消耗NK細胞更多，且腫瘤患者血中NK細胞可作為影響患者病情的獨立性影響因素。在人體免疫系統(tǒng)中T淋巴細胞亞群是十分重要組成部分，在細胞免疫發(fā)揮功能過程中起到主導作用〔12〕。CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞又稱為Treg細胞，一般情況下Treg細胞有兩種不同的分化方式，即外周分化和胸腺分化，外周型分化指抗原刺激幼稚型Treg細胞后在TGF-β刺激下誘導產(chǎn)生Foxp3+以形成CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞。在胸腺型分化過程中未成熟T淋巴細胞發(fā)育成熟，后通過CD4+細胞進一步刺激利用Foxp3途徑分化導致CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞產(chǎn)生〔13〕。有研究結(jié)果表明，在CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞調(diào)節(jié)過程中Foxp3是重要的調(diào)控因子〔14〕。Foxp3不僅可起到調(diào)節(jié)Treg細胞抑制和發(fā)育的作用，并可有效調(diào)控CD4+CD25+Treg細胞活化。一般情況下，Treg細胞可通過多種途徑激活并抑制機體免疫，如依賴抑制性、破壞細胞代謝、細胞因子途徑、調(diào)節(jié)抗原呈遞細胞功能、溶解細胞途徑等。有研究指出，Treg細胞還可有效抑制體內(nèi)免疫應答，使腫瘤患者體內(nèi)出現(xiàn)腫瘤細胞免疫耐受〔15〕。有學者指出，腫瘤細胞的免疫逃逸是調(diào)節(jié)宮頸癌的發(fā)病調(diào)節(jié)機制〔16〕。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌患者血中Treg細胞水平明顯高于健康對照組，且隨著宮頸癌患者病情加重Treg水平也隨之逐漸增加，且多元回歸分析結(jié)果顯示，Treg細胞是影響宮頸癌發(fā)生及發(fā)展的獨立性影響因素。有研究結(jié)果顯示，隨著宮頸癌患者腫瘤體積越大、宮頸癌分期越高，Treg細胞數(shù)量越高，與本研究結(jié)果相似〔17〕。分析認為，隨著患者病情加重，其體內(nèi)Treg細胞水平增加導致腫瘤逃避免疫監(jiān)視能力增強，其可能與Treg細胞下調(diào)輔助性T細胞(Th)1、Th2細胞，上調(diào)免疫抑制因子白細胞介素(IL)-10、IL-35及轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β進而起到抑制機體免疫功能，加重患者病情。

綜上所述，在宮頸癌患者血中NK細胞呈顯著低表達狀態(tài)，Treg細胞呈高表達狀態(tài)，且NK細胞及Treg細胞是影響宮頸癌發(fā)生及發(fā)展的獨立影響因素。但本研究并未對患者進行長期隨訪研究仍有待后續(xù)深入研究。