歸仁潤腸顆粒對慢傳輸型便秘小鼠腸道動力的影響

李國峰，李慶杰，金世峰，孫一涵

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春 130021；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

結(jié)腸慢傳輸型便秘（slow transit constipation,STC）是指結(jié)腸傳輸功能減弱，腸內(nèi)容物傳輸緩慢所引起的便秘，主要癥狀為便意減少或消失，導(dǎo)致排便困難，糞質(zhì)干硬，一般伴有腹脹，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[1-2]。本研究主要觀察歸仁潤腸顆粒對慢傳輸便秘小鼠結(jié)腸傳輸?shù)挠绊懀瑸榕R床應(yīng)用歸仁潤腸顆粒治療慢傳輸便秘提供動物實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 健康KM 小鼠40 只，SPF 級，體質(zhì)量18～20 g，雌雄各半，購于遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司，合格號：SCXK（遼）2015-0001。飼養(yǎng)于長春中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心。

1.2 藥物 氯化鈉注射液（100 mL：0.9 g）、印度墨水（100 mL/瓶，北京索萊寶科技有限公司）。歸仁潤腸顆粒（當(dāng)歸、生白術(shù)、桃仁、肉蓯蓉、枳殼、厚樸、蒲黃、五靈脂、全瓜蔞、甘草）：長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實驗研究中心提供。枸櫞酸莫沙必利片：（5 mg/片，亞寶藥業(yè)集團股份有限公司，H20090158）。

1.3 試劑與儀器 電子天平、灌胃針、解剖臺、燒杯、刻度尺等。

1.4 方法

1.4.1 慢傳輸便秘小鼠模型復(fù)制 參照許海塵[3]STC制備方法的文獻(xiàn)報道進(jìn)行，具體如下：將40 只小鼠隨機分成正常組、模型組、歸仁潤腸顆粒組、莫沙必利組，每組各10 只，每組雌雄各半。分別置入籠中，適應(yīng)3 d 后，模型組、歸仁潤腸顆粒組、莫沙必利組小鼠皮下注射鹽酸嗎啡注射液，2.5 mg·kg-1·d-1，連續(xù)注射45 天。正常組注射等量生理鹽水。隔日測量小鼠體質(zhì)量，根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整注射劑量。

1.4.2 給藥方法 造模成功后，各組分別給藥。歸仁潤腸顆粒組：生藥量9.44 g·kg-1，1 次/d。莫沙必利組：給藥劑量為1.15 g·kg-1，1 次/d。正常組、模型組按同體積生理鹽水灌胃，1 次/d。各組均連續(xù)灌胃14 d。期間隔日測量小鼠體質(zhì)量，根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整給藥劑量。在給藥期間，所有小鼠自由攝食與飲水。

1.4.3 測定24 h 糞便干重 灌胃結(jié)束后，收集小鼠24 h 糞便。收集糞便前24 h 每只小鼠單獨置于籠中，各飼養(yǎng)籠中放置濾紙，期間自由飲食飲水，收集各籠中小鼠24 h 糞便，晾干稱重。

1.4.4 腸道推進(jìn)率測定 給藥結(jié)束后，給予2 組禁食不禁水24 h。禁食24 h 后，給予每只小鼠印度墨水0.5 mL灌胃，灌胃結(jié)束同時開始計時30 min，用頸椎脫臼法處死2 組小鼠。摘除從幽門到肛門的所有腸道，輕輕牽拉腸道，使其拉直，使腸道處于無張力狀態(tài)。測量幽門至肛門的腸道總長度及腸道推進(jìn)距離（墨汁距幽門距離即腸道推進(jìn)距離）。計算腸道推進(jìn)距離占腸道全長的百分比。按照公式計算腸道推進(jìn)的百分比，即：腸道推進(jìn)率=（腸道推進(jìn)距離/腸道總長度）×100%。

1.5 觀察指標(biāo) 24 h 糞便干重及腸道推進(jìn)率。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用單因素方差分析和多重比較等。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組造模前后小鼠24 h平均糞便干重比較 見表1。

表1 各組造模前后小鼠24 h 平均糞便干重比較（，n=10） g

表1 各組造模前后小鼠24 h 平均糞便干重比較（，n=10） g

注：與正常組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01

2.2 各組給藥后小鼠腸道推進(jìn)率比較 見表2。

表2 各組給藥后小鼠腸道推進(jìn)率比較（，n=12） %

表2 各組給藥后小鼠腸道推進(jìn)率比較（，n=12） %

注：與正常組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢傳輸型便秘可從“氣虛”“陰虛”兩方面論治[4]，陰傷液虧，燥熱干澀不潤，腑氣滯留不下[5-6]。近年來，流行病學(xué)調(diào)查顯示，全球范圍便秘發(fā)病率為0.7%～79%[7],國內(nèi)為3%～17%[8]。功能性便秘根據(jù)腸道動力改變和肛門直腸功能變化分為4 型[9]：慢傳輸型便秘（STC）、排便障礙型便秘、混合型便秘、正常傳輸型便秘。SHAHID 等[10]報道STC 發(fā)病率占慢性功能型便秘4 種亞型之首。戴菲等[11]報道我國STC 占功能性便秘的45.5%。目前認(rèn)為，便秘的發(fā)病機制與Cajal 間質(zhì)細(xì)胞、腸道動力改變、腸神經(jīng)系統(tǒng)異常、水通道蛋白、神經(jīng)遞質(zhì)異常等密切相關(guān)[12-14]。其中Cajal 間質(zhì)細(xì)胞（ICC）起源于胃腸道間質(zhì)干細(xì)胞，李國峰等[15-16]報道的ICC 所表達(dá)的c-kit 是維持正常數(shù)量及形態(tài)功能的關(guān)鍵，樂音子等[17]報道的通便湯對慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸c-kit 和MLCK 表達(dá)的影響，肖國輝等[18]報道的應(yīng)對STC 疾病的中醫(yī)證型的方法，都明確了慢傳輸型便秘的作用機制。STC 的治療以藥物治療為主，由于STC 往往由多種病因共同作用導(dǎo)致，雖然藥物種類繁多，但多數(shù)藥物只針對部分病因，整體治療效果欠佳。中醫(yī)藥治療便秘有著悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗，從中發(fā)掘出有效的治療方法，并闡明治療的機制，是學(xué)者探索的重點。蔣峰等[19]報道的關(guān)于養(yǎng)陰潤腸方治療慢傳輸型小鼠的機制研究，于永鐸等[20]報道的小柴胡湯加減治療慢傳輸型便秘臨床療效評價相關(guān)內(nèi)容，都體現(xiàn)了中醫(yī)藥對治療慢傳輸型便秘的不同方法，學(xué)者們通過不同研究提出中醫(yī)藥可通過恢復(fù)ICC 細(xì)胞數(shù)量及表型、影響腸神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、結(jié)腸水通道蛋白的表達(dá)治療STC，童衛(wèi)東[21]報道的結(jié)腸慢傳輸型便秘的病因和診斷中提到，沒有發(fā)現(xiàn)與ICC 相關(guān)的細(xì)胞變性、壞死和調(diào)亡，這些研究為ICC 的可恢復(fù)性提供了依據(jù)，同時也說明了中醫(yī)藥可能通過多靶點發(fā)揮作用。

本研究結(jié)果顯示，歸仁潤腸顆粒可以顯著增加便秘模型小鼠糞便干重及腸道推進(jìn)率，效果優(yōu)于莫沙必利，證明歸仁潤腸顆粒能提高小鼠腸道傳輸功能，為歸仁潤腸顆粒治療慢傳輸便秘提供了理論依據(jù)。