社區(qū)和醫(yī)院環(huán)境對(duì)鼻腔耐甲氧西林金黃色葡萄球菌定植影響研究

徐洲，杜陳，金釗，李旺勝，張楚微，王書(shū)菲，肖娜，唐一通

摘要：目的：了解社區(qū)和醫(yī)院兩種不同環(huán)境對(duì)鼻腔耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）定植的影響。方法：用鼻拭子法采集108例未進(jìn)入臨床實(shí)習(xí)醫(yī)學(xué)生和99例正進(jìn)行臨床實(shí)習(xí)醫(yī)學(xué)生鼻腔樣本，用金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)篩查金黃色葡萄球菌，并通過(guò)PCR方法檢測(cè)SCCmecA基因，進(jìn)行MRSA的鑒定。比較兩個(gè)群體中MRSA攜帶率的差異，分析社區(qū)和醫(yī)院環(huán)境對(duì)MRSA在人鼻腔定植的影響。結(jié)果：108例未進(jìn)入臨床實(shí)習(xí)醫(yī)學(xué)生共檢出金黃色葡萄球菌（SAU）菌株44例，MRSA菌株8例，MRSA檢出率7%，99例進(jìn)入臨床實(shí)習(xí)醫(yī)學(xué)生共檢出SAU菌株59例，MRSA菌株21例，MRSA檢出率21%。實(shí)習(xí)組MRSA攜帶率是未實(shí)習(xí)組的2.86倍，兩種不同環(huán)境下造成的MRSA陽(yáng)性率不同具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.171，P<0.05）。結(jié)論：社區(qū)和醫(yī)院兩種不同環(huán)境對(duì)鼻腔耐甲氧西林金黃色葡萄球菌定植有顯著影響，長(zhǎng)期處于醫(yī)院環(huán)境可使鼻腔MRSA定值率顯著提高。

關(guān)鍵詞：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌;鼻拭子;社區(qū);醫(yī)院

中圖分類(lèi)號(hào)：C915 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ? ? 文章編號(hào)：1674-9324（2020）01-0110-02

金黃色葡萄球菌（SUA）是常見(jiàn)病原菌之一，由于抗菌藥物的大量使用，耐甲氧西林金黃色葡萄球（MRSA）的感染率不斷攀升[1，2]，嚴(yán)重威脅到患者的生命安全，成了臨床治療的一大難題[3]。本研究通過(guò)采集處于醫(yī)院和社區(qū)環(huán)境中健康醫(yī)學(xué)生群體鼻拭子樣本，進(jìn)行金黃色葡萄球菌和MRSA的培養(yǎng)與鑒定，研究不同環(huán)境因素對(duì)MRSA在人群鼻腔定植的影響。

一、資料與方法

1.樣本采集。收集處于醫(yī)院環(huán)境（湖北文理學(xué)院附屬醫(yī)院）的臨床實(shí)習(xí)生的鼻拭子樣本99例，同時(shí)收集未進(jìn)入臨床的在校生學(xué)生鼻拭子樣本108例，以上樣本均為來(lái)自不同個(gè)體的非重復(fù)性樣本，同時(shí)選取ATCC25923和ATCC43300作為SAU和MRSA陽(yáng)性對(duì)照菌株。

2.金黃色葡萄球菌分離培養(yǎng)。按試劑盒要求配制金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基（CHROMagarTM法國(guó)科瑪嘉），對(duì)鼻拭子樣本進(jìn)行SAU的分離培養(yǎng)，37℃，恒溫培養(yǎng)48小時(shí)，紅色或粉紅色菌落為金黃色葡萄球菌，并挑出保存。

3.MRSA菌株鑒定。將篩選金黃色葡萄球菌接種至哥倫比亞血瓊脂平板，37℃，恒溫培養(yǎng)24小時(shí)。利用Ezup柱式細(xì)菌基因組DNA抽取試劑盒（上海生工）提取基因組，通過(guò)Taq PCR擴(kuò)增試劑盒（上海生工）對(duì)提取基因組進(jìn)行SCCmecA基因擴(kuò)增，進(jìn)行MRSA菌株的鑒定[4]。擴(kuò)增引物為：forward：5-TCCAGATTACAACTTCACC-

AGG-3;Reverse：5-CCACTTCATATCTTGTAACG-3。擴(kuò)增體系為：模板3μl，引物2μl，2×Master mix 10μl，ddH2O 5μl 。擴(kuò)增條件為：95℃ 4min;95℃ 45 S，45℃ 45S，72℃ 60S;30循環(huán)，72℃ 5min。將擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)中擴(kuò)增條帶。

4.統(tǒng)計(jì)分析。利用SPSS17.0對(duì)兩個(gè)群體SA和MRSA的檢出率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析社區(qū)和醫(yī)院環(huán)境對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）對(duì)人鼻腔定植的影響。

二、結(jié)果

1.菌株分離培養(yǎng)。在金黃色葡萄球菌固體顯色培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的紅色或粉紅色菌落為SAU，從99例臨床實(shí)習(xí)組樣本中篩檢出SAU59例，108例未進(jìn)入臨床組中篩檢出SAU44例。圖1為兩例在顯色培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)的SAU菌株。

1：臨床實(shí)習(xí)組樣本分離SAU菌株;2：未進(jìn)入臨床組樣本分離SAU菌株。

2.MRSA基因檢測(cè)。對(duì)分離SAU菌株提取基因組，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，如圖2所示。提取分離SAU菌株基因組，進(jìn)行SCCmecA基因擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)以鑒定MRSA菌株。未進(jìn)入臨床實(shí)習(xí)組44例SAU中檢出MRSA菌株8例，臨床實(shí)習(xí)組59例SAU中檢出MRSA菌株21例。圖3所示為MRSA菌株SCCmecA基因擴(kuò)增電泳檢測(cè)結(jié)果，基因組能擴(kuò)增出162 bp的目的片段。

3.統(tǒng)計(jì)分析。從99例臨床實(shí)習(xí)組學(xué)生樣本中共檢出金黃色葡萄球菌（SAU）59例，檢出率為59.6%;108例未進(jìn)入臨床組學(xué)生樣本共檢出金黃色葡萄球菌（SAU）樣本44例，檢出率為40.7%。臨床實(shí)習(xí)組SAU陽(yáng)性率是未進(jìn)入臨床組樣本的1.463倍，兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.346，P<0.05）。從99例臨床實(shí)習(xí)組學(xué)生樣本中共檢出MRSA 21例，檢出率為21.2%;從108例未進(jìn)入臨床組學(xué)生樣本檢共出MRSA 8例，檢出率為7.4%。臨床實(shí)習(xí)組MRSA陽(yáng)性率是未進(jìn)入臨床組樣本的2.86倍，兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.171，P<0.05）。

三、討論

金黃色葡萄球菌是常見(jiàn)的革蘭陽(yáng)性菌之一，致病能力強(qiáng)，長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)社區(qū)和醫(yī)院人群造成嚴(yán)重感染[5]。由于各種抗菌藥物的廣泛使用，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的感染率也在逐漸升高。金黃色葡萄球菌廣泛存在于人體的黏膜、皮膚和鼻腔等處，易于傳播。已經(jīng)有研究表明醫(yī)院環(huán)境更容易使金黃色葡萄球菌定植在人體上。本研究亦表明，相較于社區(qū)環(huán)境，醫(yī)院環(huán)境可以明顯提高SAU和MRSA在人鼻腔的定植率。在醫(yī)院環(huán)境中，病原菌的感染傳播相比于其他社區(qū)等環(huán)境下更為容易，對(duì)于長(zhǎng)期生活于醫(yī)院環(huán)境的人群，如長(zhǎng)期住院的病人等，更應(yīng)加強(qiáng)對(duì)其環(huán)境衛(wèi)生的消毒滅菌，盡量減少患者在醫(yī)院內(nèi)受到感染。臨床醫(yī)務(wù)人員在工作時(shí)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)感染衛(wèi)生和手術(shù)步驟，消毒隔離的監(jiān)控。同時(shí)，社區(qū)衛(wèi)生環(huán)境與醫(yī)院衛(wèi)生環(huán)境之間的建設(shè)還應(yīng)得到加強(qiáng)，盡量控制耐藥菌在醫(yī)院與社區(qū)之間的傳播。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃健云，孫紅.耐甲氧西林表皮葡萄球菌感染情況調(diào)查及藥敏分析[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師（醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)），2012，16（14）：48-49.

[2]趙紅慶，徐萍，周聲安，胡守奎.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌不同來(lái)源株耐藥性及流行特征分析[J].疾病監(jiān)測(cè)，2017，7（31）：603-608.

[3]竇學(xué)梅，宋巍，高文旃，等.MRSA醫(yī)院感染及耐藥性研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（9）：1943-1945.

[4]Oliveira DC，de Lencastre H.Multiplex PCR strategy for rapid identification of structural types and variants of the mec Elements in methicillin-resistant Staphylococcus aureus.Antimicrob Agents Chemother，2002，46（7）：2155-2161.

[5]韋柳華，周定，程紅革，等.綜合醫(yī)院金黃色葡萄球菌的耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（8）：1712-1713.

Effect of Community and Hospital Environment on Colonization of Methicillin-resistant Staphylococcus Aureus in Nasal Cavity

XU Zhou，DU Chen，JIN Zhao，LI Wang-sheng，ZHANG Chuo-wei，WANG Shu-fei，XIAO Na，TANG Yi-tong*

（Hubei University College of Arts and Science Medical College，Xiangyang，Hubei 441053，China）

Abstract：Objective：to investigate the effects of community and hospital environments on （MRSA） colonization of methicillin-resistant Staphylococcus aureus （MRSA） in nasal cavity.Methods：nasal cavity samples were collected from 108 non-clinical medical students and 99 medical students in clinical practice by nasal swab method.Staphylococcus aureus was screened by culture medium of staphylococcus aureus.The SCCmecA gene was detected by PCR and identified by MRSA.The difference of MRSA carrier rate between two populations was compared，and the influence of community and hospital environment on MRSA colonization in human nasal cavity was analyzed.Results：108 cases There were 44 cases of staphylococcus aureus（SAU），8 cases of MRSA，7% of MRSA，and 59 cases of SAU，21 cases of MRSA and 21% of MRSA.The rate of MRSA was 2.86 times higher than that of the untrained group，and the positive rate of MRSA in the two different environments was statistically significant （Sup2 = 8.171，P <0.05）.Conclusion：the two different environments of community and hospital have significant effect on the colonization of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in the nasal cavity.The long-term hospital environment can increase the setting rate of MRSA in the nasal cavity.

Key words：methicillin-resistant Staphylococcus aureus;nasal swab;community;hospital