外周血免疫細胞表達水平對肺癌患者生存期的影響①

張曉芳 樊 莉 尤江云 白 雨 楊思璐 蘇 文

(山西省腫瘤研究所免疫室，太原 030013)

肺癌是發病率和死亡率增長快，對人群健康和生命威脅很大的惡性腫瘤之一。據統計，我國肺癌發病率每年增長26.9%，肺癌已成為我國首位惡性腫瘤死亡原因[1]，預計到2025年，我國肺癌病人將達到100萬，成為世界第一肺癌大國[2]。癌細胞有十大特征包括自給自足生長信號，潛力無限的復制能力，組織浸潤和轉移以及避免免疫摧毀等[3]。其中免疫平衡是人體免疫的基本功能之一。免疫功能失調狀態，其中包括免疫細胞、細胞因子、刺激分子等因素的失衡。近年來，細胞免疫技術的發展讓人類抗癌進入免疫時代，腫瘤細胞免疫治療將成為傳統治療手段之外最具價值和發展潛力的治療手段。免疫功能低下也是惡性腫瘤復發、轉移的關鍵因素。因此，免疫功能與腫瘤的發生發展、治療及患者的生存率均密切相關。但是目前關于免疫細胞與肺癌患者預后的關系尚不清楚。因此本研究主要通過回顧性分析我院住院且有免疫檢測的10 285例肺癌患者外周血中CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、CD56+細胞和CD19+細胞的表達與預后的關系，同時為肺癌患者的預后提供一個可靠的指標。

1 資料與方法

1.1資料 回顧性分析山西省腫瘤醫院2012年1月～2016年12月期間住院且有免疫檢測的肺癌患者的臨床住院病歷資料。病歷資料主要包括患者性別、年齡和免疫細胞檢測值(百分比)。

1.2方法

1.2.1隨訪 采用電話形式對患者進行隨訪,隨訪截止時間2017年8月31日,回訪總病例數12 430例,有效病例10 285例。生存期是以患者確診肺癌之日算起至死亡或2017年7月,生存時間以月計算,中位生存時間18.8個月。

1.2.2免疫細胞檢測方法 實驗組和對照組均抽2 ml靜脈血，每管加相對應的抗體20 μl，接著每管加抗凝血100 μl,振蕩、混勻、避光標記20 min。隨后每管加溶血素1 ml，振蕩、混勻、避光10 min。1 500 r/min 離心7 min,棄上清，每管加1 ml PBS緩沖液，1 500 r/min離心7 min。棄上清，每管加100 μl PBS,震蕩，上機檢測。

1.3統計學處理 采用Kaplan-Meier法計算生存率，單因素分析Log-rank檢驗，Cox逐步向前回歸法進行多因素回歸分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

表1 肺癌患者中位生存時間及生存率

Tab.1 Median survival time and survival rate of lung cancer patients

IndexSurvival rate(%)31224364864Median survivaltime(month)GenderMale91.662.339.028.222.820.217.4Female93.771.149.237.831.627.023.7Age(years)<6094.368.545.835.529.726.321.1≥6090.561.638.527.121.818.617.1CD3+cell(%)<5088.658.836.925.717.815.116.150-8092.465.342.431.526.122.919.3>8091.863.039.428.722.719.817.4CD4+cell(%)<3090.160.438.226.421.517.616.130-4093.166.043.031.926.723.619.5>4092.465.842.432.425.923.119.6CD8+cell(%)<3092.465.943.732.526.624.52030-4093.164.941.029.924.320.718.3>4089.860.336.927.022.117.516.1CD56+cell(%)<2092.765.241.831.625.622.21920-3092.265.742.630.325.623.119.7>3090.260.739.328.322.519.116.6CD19+cell(%)<1091.562.739.628.723.320.217.510-2093.768.846.135.128.925.721.4>2088.861.039.529.826.223.818.2

2 結果

2.1生存情況 10 285例肺癌患者的平均生存時間為18.8個月。其中3、12、24、36、48和60個月的生存率分別為92.1%、64.5%、41.6%、30.7%、25.0%和21.9%。各種因素分層后的亞組患者生存情況見表1。

2.2單因素分析結果 性別、年齡、CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、CD56+細胞和CD19+細胞均對生存期有影響(均P<0.05)，見表2。

2.3多因素分析結果 將單因素分析顯示與預后有關的諸因素引入Cox模型進行多因素分析顯示，性別、年齡、CD4+細胞、CD8+細胞和CD19+細胞是預后的獨立影響因素,見表3。若是以性別作為分層因素進行回歸分析，年齡、CD8+細胞、CD56+細胞和CD19+細胞均與男性肺癌患者的預后有關，而女性患者預后僅與年齡和CD8+細胞有關，見表4。

圖1 不同CD3+細胞百分比下肺癌患者的累計生存率曲線Fig.1 Cumulative survival curve of lung cancer patients with different percentages of CD3+ cells

圖2 不同CD4+細胞百分比下肺癌患者的累計生存率曲線Fig.2 Cumulative survival curve of lung cancer patients with different percentages of CD4+ cells

2.4生存率 CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、CD56+細胞和CD19+細胞的表達分別處于50%～80%、≥30%、<30%、≤30%、10%～20%之間時患者的生存率最高，見圖1～5。

圖3 不同CD8+百分比下肺癌患者的累計生存率曲線Fig.3 Cumulative survival curve of lung cancer patients with different percentages of CD8+ cells

圖4 不同CD56+百分比下肺癌患者的累計生存率曲線Fig.4 Cumulative survival curve of lung cancer patients with different percentages of CD56+ cells

圖5 不同CD19+百分比下肺癌患者的累計生存率曲線Fig.5 Cumulative survival curve of lung cancer patients with different percentages of CD19+ cells

表2 肺癌預后因素的單因素分析

Tab.2 Univariate analysis of prognostic factors of lung cancer

IndexnNumber of deathNumber of truncationχ2PGender81.780.000Male7 7214 5013 220Female2 5641 3021 262Age(years)78.900.000<604 2662 2741 992≥606 0193 5292 490CD3+cell(%)17.940.000 <5055734121650-807 8234 3323 491>801 9051 130775CD4+cell(%)33.690.000<302 6381 5881 05030-404 0202 2101 810>403 6272 0051 622CD8+cell(%)31.190.000<305 2122 8222 39030-403 0351 7431 292>402 0381 238800CD56+cell(%)12.050.002<205 5223 1142 40820-302 8651 5841 281>301 8981 105793CD19+cell(%)44.210.000<106 8714 0352 83610-203 1381 6141 524>20276154122

表3 肺癌預后因素的多因素分析

Tab.3 Multivariate analysis of prognostic factors of lung cancer

IndexCoefficientSEWaldRR95%CIPGenderMale1.000 Female-0.2400.03256.120.7870.739-0.8380.000 Age(years)<601.000≥600.1960.02751.451.2171.153-1.2840.000 CD4+cell(%)<301.000 30-40-0.1040.0349.470.9010.844-0.9630.002 >40-0.0590.0362.610.9430.878-1.0130.106 CD8+cell(%)<301.00030-400.0580.0313.441.0600.997-1.1270.064 >400.1180.0379.991.1261.046-1.2110.002 CD19+cell(%)<101.00010-20-0.1170.03114.600.8900.838-0.9450.000 >200.0930.0831.241.0980.932-1.2930.265

表4 肺癌患者按性別分層后的多因素分析

Tab.4 Multivariate analysis of patients with lung cancer after stratification by sex

IndexCoefficientSEWaldRR95%CIPMaleAge(years)<601.000≥600.1650.03227.131.1791.108-1.2540.000CD8+cell(%)<301.00030-400.0680.0373.401.0710.996-1.1510.065>400.1780.04416.381.1951.096-1.3020.000CD56+cell(%)<201.00020-30-0.0050.0370.020.9950.926-1.0690.887>300.1180.0447.121.1251.032-1.2270.008CD19+cell(%)<101.00010-20-0.1160.03610.110.8910.829-0.9570.001>200.1090.1051.061.1150.906-1.3710.304FemaleAge(years)<601.000≥600.2850.05626.141.3301.192-1.4840.000CD8+cell(%)<301.00030-400.1290.0634.201.1371.006-1.2860.040>400.1590.0784.191.1731.007-1.3660.041

3 討論

肺癌是全球腫瘤相關死亡的首要原因[4]，其面臨的臨床形勢不容樂觀。我國更是肺癌的高發國。在本資料中我們對2012年1月～2016年12月間山西省腫瘤醫院住院且有免疫檢測的10 285例肺癌患者的臨床病例資料進行了整理，初步分析了年齡、性別以及免疫細胞的表達對肺癌患者預后的影響。

本組患者的平均生存時間為18.8個月。3、12、24、36、48和60個月的生存率分別為92.1%、64.5%、41.6%、30.7%、25.0%和21.9%。本組資料通過單因素分析表明，患者的性別、年齡、CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、CD56+細胞和CD19+細胞均對總生存時間存在影響。目前為止，老年人作為癌癥的高發人群，約60%的惡性腫瘤發生于老年人[5]，與伴隨著年齡增長機體出現的免疫功能減退有密切關系[6,7]，同時老年人伴發的其他疾病較多。本組資料單因素分析顯示，與<60歲的患者比較，≥60歲患者預后明顯不良，與國內外文獻報道相似[8,9]。本組資料還發現女性患者的預后明顯優于男性，可能混有男性吸煙等其他因素[10]。除此之外，一些免疫指標也被報道可能與其預后有關[11]。惡性腫瘤患者多處于免疫功能失調狀態，其中包括免疫細胞、細胞因子、刺激分子等因素的失衡。免疫平衡是人體免疫的基本功能之一。淋巴細胞是一類具有免疫識別功能的細胞系，主要包括T細胞、B細胞、NK細胞、單核吞噬細胞等。而白細胞分化抗原(CD)在免疫細胞研究中發揮著重要的作用。CD3表達在人全部T細胞上，T淋巴細胞又可進一步測定輔助/誘導T淋巴細胞(CD4+T細胞)、抑制/細胞毒T淋巴細胞(CD8+T細胞)。表達CD56分子的NK細胞是人類天然免疫系統的一個重要的組成部分。CD19是所有B細胞共有的表面標志。多因素分析結果表明，性別、年齡、CD4+細胞、CD8+細胞和CD19+細胞是影響總生存時間的獨立預后因素。隨后我們進一步以性別進行分層統計發現，影響男女預后生存期的因素不完全相同，年齡、CD8+細胞、CD56+細胞和CD19+細胞均與男性肺癌患者的預后有關，而女性患者預后僅與年齡和CD8+細胞有關。有報道稱性激素會影響免疫功能[12]。低濃度的雌激素會增強人體的免疫功能。而雄激素和較高濃度的雌激素會抑制免疫功能[13]。因此性激素往往能影響患者的易患性、治療和預后。免疫功能不僅與腫瘤的發生發展密切相關，而且良好的免疫功能可能通過抑制腫瘤而提高患者的生存率，目前改善細胞免疫功能提高抗腫瘤效果的研究已成為熱點。本組大樣本資料的統計分析發現CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、CD56+細胞和CD19+細胞的表達分別處于50%～80%、≥30%、<30%、≤30%、10%～20%之間時，患者的預后生存率最高，。因此本研究表明當外周血中的免疫細胞處于一個平衡狀態時，病人的預后會達到一個最佳的狀態。同時近年來腫瘤的免疫治療發展迅猛，免疫平衡可以作為預后評估和判斷治療的有效指標。近年來，細胞免疫技術的發展讓人類抗癌進入免疫時代，其中基因工程改造自體T細胞免疫治療技術(CAR-TCD19)[14]、自身產生抗免疫檢查點腫瘤免疫治療(iPD-L1-VAX)[15]、腫瘤突變新抗原殺傷細胞(naCTL)三項技術是當前國際領先的腫瘤免疫治療技術及解決方案。腫瘤細胞免疫治療將成為傳統治療手段之外最具價值和發展潛力的治療手段。

綜上所述，本組患者的臨床病理及隨訪資料的統計分析結果表明，性別、年齡、CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞、CD56+細胞和CD19+細胞均為肺癌患者的預后影響因素。免疫功能不僅與腫瘤的發生發展密切相關，而且也影響患者的預后。當外周血中的免疫細胞處于一個平衡狀態時，病人的預后最佳。因此可以認為不同類型免疫細胞及其亞群的檢測可作為判斷肺癌預后的指標。近年來，腫瘤細胞免疫治療將成為傳統治療手段之外最具價值和發展潛力的治療手段。