柯薩奇B組病毒感染對1型糖尿病患兒胰島功能的影響

譚 瓊，張 鴻，楊 菊，陳華明，趙明東，劉 娟，丁小燕

流行病學調查顯示，近10年來，年齡<15歲的兒童糖尿病發病率每年以3.4%的速度增長，且主要為1型糖尿病，是胰腺胰島細胞不可逆性損傷造成胰島素分泌不足而引起的代謝性疾病，需要長期注射胰島素，極易出現諸多并發癥，嚴重影響患兒的身心健康，給家庭和社會帶來巨大的經濟負擔[1-2]。糖尿病病因及發病機制復雜，涉及遺傳及環境因素，其中病毒感染作為較重要的環境因素之一，可啟動胰島β細胞自身免疫反應，使炎性因子長期浸潤導致胰島細胞損傷，進而發生不可逆性胰島功能障礙[3]。柯薩奇B組病毒(coxsackie virus B， CVB)是一種小RNA病毒，可引起腦膜炎、心肌炎、心包炎及呼吸系統感染等多種疾病，亦可引發胰腺損傷導致糖尿病，但CVB對糖尿病患兒胰島功能影響的研究較少見[4-5]。本研究收集南充市中心醫院糖尿病患兒的臨床資料，分析CVB感染對糖尿病患兒胰島功能的影響，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月—2018年5月南充市中心醫院收治的符合納入及排除標準的初診1型糖尿病患兒85例作為觀察組，其中男45例，女40例；年齡3～13(8.02±2.15)歲；均符合1型糖尿病診斷標準[6]：①起病急，“三多一少”癥狀較為明顯；②空腹血糖(fasting plasma glucose， FPG)≥7 mmol/L，餐后2 h血糖或任意時間血糖≥11.1 mmol/L；③依賴胰島素治療。另選取同期于該院體檢健康的30例兒童作為對照組，均無家族糖尿病史，且經糖化血紅蛋白及FPG等檢查排除糖尿病，其中男16例，女14例；年齡2～14(8.36±2.56)歲。兩組性別及年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準同意執行。

1.2納入及排除標準 納入標準：①年齡≤14歲；②臨床資料完整；③患兒監護人對本研究知情同意并簽署知情同意書。排除標準：①合并原發性心、腦、肝、腎等重要臟器器質性病變及自身免疫性疾病者；②依從性差者；③未完成本研究而中途退出者。

1.3觀察指標 比較兩組CVB-IgM、胰島功能相關指標(FPG、C肽、胰島素)及T淋巴細胞亞群(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)水平，分析CVB-IgM陰性及CVB-IgM陽性糖尿病患兒胰島功能相關指標和T淋巴細胞亞群水平差異。

1.3.1標本采集與處理：所有受試者均采集空腹外周靜脈血，并分為2份，1份用于T淋巴細胞亞群的檢測，1份則于室溫放置20 min后以3000 r/min的速度離心10 min并分離血清，置于-80℃冰箱備用。

1.3.2CVB-IgM檢測：采用酶聯免疫吸附試驗法檢測CVB-IgM，試劑盒由上海研謹生物科技有限公司提供，實驗操作嚴格按照試劑盒說明書進行。加底物后顯示黃色表示有相應抗體存在，記為陽性；而無顯色表示無相應抗體存在，記為陰性。

1.3.3胰島功能相關指標測定：①FPG：采用氧化酶法(日本奧林巴斯株式會社全自動生化儀AU400)進行測定；②C肽：采用化學發光法(美國亞培公司AXSYM化學發光免疫分析儀)進行檢測；③胰島素：采用放射免疫法(安徽合肥科大創新公司GC400γ放射免疫計數器)進行測定，操作步驟嚴格按照說明書進行。

1.3.4T淋巴細胞亞群檢測：采用美國Beckman公司FC500流式細胞儀及其配套試劑對T淋巴細胞亞群進行檢測。

2 結果

2.1兩組CVB-IgM及胰島功能相關指標比較 與對照組比較，觀察組CVB-IgM陽性率、FPG水平顯著升高，胰島素、C肽水平顯著降低，差異具有統計學意義(P<0.01)，見表1。

表1 1型糖尿病患兒與健康兒童CVB-IgM及胰島功能相關指標比較

注：觀察組為1型糖尿病患兒，對照組為健康兒童；CVB為柯薩奇B組病毒,FPG為空腹血糖

2.2兩組T淋巴細胞亞群比較 與對照組比較，觀察組CD4+ T淋巴細胞比例及CD4+/CD8+值明顯降低，CD8+ T淋巴細胞比例明顯升高，差異均具有統計學意義(P<0.01)，見表2。

2.3CVB-IgM陽性及CVB-IgM陰性1型糖尿病患兒胰島功能相關指標及T淋巴細胞亞群比較 與CVB-IgM陰性1型糖尿病患兒比較，CVB-IgM陽性1型糖尿病患兒FPG水平、CD8+ T淋巴細胞比例升高，胰島素、C肽水平及CD4+ T淋巴細胞比例、CD4+/CD8+值降低，差異具有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，見表3。

表2 1型糖尿病患兒與健康兒童T淋巴細胞亞群比較

注：觀察組為1型糖尿病患兒，對照組為健康兒童

3 討論

兒童糖尿病主要為1型糖尿病，病理變化為胰島β細胞的破壞及功能性障礙，引發體內胰島素分泌不足，導致血糖升高及相關糖尿病并發癥[7-8]。CVB感染為1型糖尿病患兒發病的重要環境因素，探討CVB感染與糖尿病發生及胰島功能的關系對于兒童糖尿病的診斷及治療具有重要臨床意義[9]。

CVB屬于腸道病毒，可經糞-口途徑、呼吸道及胎盤等方式進行傳播。兒童為CVB的易感染人群，新生兒及嬰幼兒感染CVB可出現較為嚴重的癥狀，存在一定的病死率[10-11]。有研究認為CVB可引起心肌炎、腦炎、呼吸系統感染、手足口病及糖尿病等疾病[12]。CVB引發糖尿病的具體機制大致分為兩方面：①CVB直接感染胰島β細胞，造成細胞損傷并降低其功能；②機體感染CVB時，胰島周圍腺體可呈現較強的免疫應激反應，導致局部胰島細胞損傷，進而降低胰島功能，引發糖尿病[13-14]。

表3 CVB-IgM陽性及CVB-IgM陰性1型糖尿病患兒胰島功能相關指標及T淋巴細胞亞群比較

注：CVB為柯薩奇B組病毒，FPG為空腹血糖

CVB-IgM是病毒進入機體最早發揮效應的抗體，可反映CVB感染情況[15]。本研究結果顯示，觀察組CVB-IgM陽性率為43.53%顯著高于對照組CVB-IgM陽性率3.33%，提示兒童1型糖尿病與CVB感染有一定程度的相關性。劉春梅等[16]對糖尿病130例的CVB感染情況進行分析，結果顯示，1型糖尿病患者、2型糖尿病患者及健康受試者血清CVB-IgM陽性率分別為26.2%、3.1%及0。本研究結果略高于上述研究結果，考慮可能與受試者年齡、發病至檢測時間間隔等原因有關。為進一步探究CVB感染對1型糖尿病兒童胰島功能的影響，本文對CVB-IgM陽性及CVB-IgM陰性1型糖尿病患兒的胰島功能進行比較，并選擇FPG、胰島素、C肽水平作為胰島功能的評價指標，其中FPG和胰島素為公認的評價胰島功能的有效指標，而C肽是胰島β細胞的分泌產物，其數量反映胰島素的分泌量，是明確胰島活力及功能的有力指標[17]。本研究結果顯示，CVB-IgM陰性1型糖尿病患兒FPG、胰島素、C肽均顯著優于CVB-IgM陽性1型糖尿病患兒，提示CVB感染與胰島功能相關，且CVB感染在一定程度上加重了糖尿病胰島功能的衰弱。盛明薇等[18]探討CVB感染對體外培養胰島細胞的影響，發現體外培養胰島細胞感染CVB后呈現細胞皺縮等變化，至48 h時多數細胞破碎，證實CVB感染可致胰島細胞變性。上述研究結果顯示，CVB感染或可直接或間接作用于胰島細胞，引發胰島功能下降。

CVB感染引起糖尿病是病毒感染及免疫應激作用的結果，其中T淋巴細胞亞群在免疫應激中發揮重要作用。CD4+ T淋巴細胞為胰島細胞早期浸潤細胞，包括輔助性T淋巴細胞(Th)1及Th 2兩個亞型。正常生理狀態下，Th 1及Th 2處于動態平衡狀態，病毒感染引發機體內源性Th 1的大量活化，產生白細胞介素2及腫瘤壞死因子等對胰島β細胞產生毒性作用的細胞因子，損傷并破壞胰島細胞[19]。本研究觀察組較對照組CD4+ T淋巴細胞比例、CD4+/CD8+值降低及CD8+ T淋巴細胞比例升高，而CVB-IgM陽性1型糖尿病患兒Th 1及Th 2細胞失衡狀態更嚴重，提示CVB感染可致機體免疫功能失衡，引起T淋巴細胞亞群變化，加快疾病發展。李青等[20]研究證實，CVB RNA陽性患者T淋巴細胞亞群比例與CVB RNA陰性患者存在顯著差異。徐魁與李偉民[21]探討CVB感染的糖尿病患者血清腫瘤壞死因子及白細胞介素6水平變化，結果顯示，CVB感染的糖尿病患者腫瘤壞死因子及白細胞介素6水平顯著高于無CVB感染的糖尿病患者，表明CVB感染可能與T淋巴細胞及其分泌的相關炎性因子有關。

綜上所述，CVB感染可導致1型糖尿病患兒機體免疫功能失衡，胰島功能降低，臨床應注意防治。