加強實驗準備提高細胞生物學實驗教學質量

韓 偉，鄒佩貞，石海英，田志環

（韶關學院 英東生物與農業學院，廣東 韶關 512005）

“細胞生物學”是生物學類專業的核心課程和基礎課程，比較注重學生的實踐能力.細胞生物學實驗是“細胞生物學”課程體系建設的重要部分，實驗內容較多，涵蓋很多專業課的實驗，如分子生物學實驗、遺傳學實驗、植物組織培養技術實驗等.對細胞生物學實驗教學來說，實驗準備工作是確保上好實驗課的前提，實驗準備充分，才能提高細胞生物學實驗教學的質量，如有些藥品需要現配現用、有些藥品需要提前配制、活體材料需要提前處理等，都需要細致的準備.如何做好實驗準備來提高實驗質量，成為細胞生物學實驗教學研究的重要課題.筆者根據多年準備實驗的經驗，結合開設的實驗項目，探討如何做好細胞生物學實驗準備，為提高實驗教學質量提供參考和借鑒.

1 實驗藥品的準備

細胞生物學實驗采用細胞或組織作為實驗材料，對藥品的要求比較高.藥品質量不好，或者是沒有按照要求配制，處理材料沒有效果，將導致實驗沒有結果或者是效果較差.

1.1 有些藥品需要現配現用

如1/3 000 中性紅和1/5 000 詹納斯綠B 需要現配先用，這樣才能有更好的染色效果［1］.Carnoy 固定液要現配現用，因為其中的冰乙酸容易揮發，配制時間久固定液固定效果不好.亞硫酸水要現配現用，因為產生的SO2容易揮發掉，在去除多余的干擾色素時效果會不好. Unna 試劑需要現配現用，這樣才能發揮良好的染色效果.PEG（聚乙二醇）需要現配現用，而且最好高壓滅菌，因為很容易凝固.GKN 和Hank溶液也不需配制太久，最好一周之內用完，因為有葡萄糖成份，短期內也容易滋生菌類，導致緩沖作用差.Giemsa 染色液需要現配現用，對于染色體的染色效果才較好.

1.2 有些藥品需要提前配制

如席夫試劑，一般實驗前兩周開始配制，因為配制之后要放置幾天，顏色才能退至淡黃色.根據多次配制席夫試劑的經驗周一配制，周五顏色可以退至淡黃色，一般放置5 d.根據比例加一定量的活性炭吸附色素，100 mL 加0.5 g 活性炭，過濾后立即放入4 ℃冰箱中保存［2］，否者容易變色或沉淀，一次不需要配制太多.改良苯酚品紅染液配制完后，需要放置2 w 之后，染色效果才較好，常用于植物根尖壓片染色和果蠅唾腺染色體染色.

2 實驗材料的準備

2.1 耗材的準備

細胞生物學實驗通常需要用的槍頭、離心管、擦鏡紙、牙簽、載玻片、蓋玻片和染色版，培養皿等一些瑣碎的耗材也要準備充分.如離心管有幾種規格，根據實驗要求一般選擇10 mL 離心管，10 mL 離心管有粗心之分，如果盲目的準備，可能會導致離心管放不到離心機轉子里不能離心，導致實驗無法進行，材料損失.有些載玻片和蓋玻片質量不過關，導致觀察效果不好，實驗結果不理想.

2.2 活體材料的準備

2.2.1 有些活體材料需要現準備

如雞血紅細胞，最好現用現準備.教材上說在抗凝全血的試管中，加入4 倍體積的0.85 %NaCl 溶液，制成紅細胞儲備液，置于4 ℃冰箱內可供一周內使用［3］，但是第二天經常會發現雞紅細胞有少量的破裂現象，所以為了保證實驗質量需要現準備.

2.2.2 有些活體材料需要提前處理

如小白鼠需要提前1 ～2 d，往腹腔內注射淀粉肉湯.動物骨髓細胞染色體的制備實驗，如用青蛙作為材料，需要根據其體重，提前幾個小時注射秋水仙素，否則看不到染色體圖像，導致實驗失?。?］.土豆凝集素也要提前2 h 處理土豆制備.

3 實驗設備及過程準備

3.1 實驗設備的調試

細胞生物學實驗常用的儀器設備不多，主要有離心機、水浴鍋、顯微鏡、超凈工作臺等.但要做好設備的調試，因為有些設備需要提前開啟，如水浴鍋和超凈工作臺等.離心機要調整好轉速、時間以及轉子，還要根據學生人數準備幾臺離心機，避免學生等待的時間.水浴鍋溫度設置要與實際溫度一致，如果不一致用溫度計測定，以免造成溫度不準，實驗材料處理不當，影響實驗結果.顯微鏡要能夠保證人手一臺，保證觀察效果清晰，如有顯微互動實驗室，最好能使用數碼互動顯微鏡，可以拍攝照片，保存照片，以利于今后觀看，達到良好的觀察效果.

3.2 提前采購材料和藥品，做好預實驗

對細胞生物學的實驗項目需要預習，然后列好每個實驗需要的設備，藥品和耗材清單，按照清單逐一進行查找.因為有些藥品和材料需要提前準備、提前處理，所以要提前采購好實驗材料和藥品.準備好實驗的所用東西后，需要對每一個實驗進行預實驗，預實驗可以查找實驗中存在的問題，配制藥品的好壞以及藥品的質量是否達到要求，每個教材上都有實驗步驟，但是這個實驗步驟所說的有些條件不是絕對的，特別是實驗時的溫度和時間都會影響對材料的處理，所以預實驗時要根據當時的條件有所調整.如青蛙骨髓細胞染色體的制備，如果在冬季溫度低的情況下上實驗課，就不能按照書上說的提前3 ～4 h，需要提前多幾個小時往青蛙的腹腔內注射秋水仙素，因為冬天青蛙處于冬眠狀態，活動能力下降，對藥物的吸收較慢，所以注射處理時間短，得不到中期分裂相或較少分裂相，學生實驗效果就較差［5］.

3.3 配制藥品要嚴肅認真

細胞生物學實驗需要的材料比較多，對于藥品的要求較高，配制藥品一定要嚴格操作，不能馬虎懈怠，隨便應付.有些藥品需要裝入棕色瓶內，如席夫試劑、中性紅、詹納斯綠B、改良苯酚品紅染色液、Unna 試劑、Giemsa 染液等有顏色的染色劑.有些需要看準藥品分子量再配制，如PEG（聚乙二醇）分子量有4 000，6 000，8 000 的通常用分子量4 000 的作為細胞融合劑.有些藥品需要注意區分同分異構體，如派洛寧也叫吡咯紅，其有兩種分為吡咯紅G 和吡咯紅B，用于RNA 染色的是吡咯紅G 而不是吡咯紅B.有些藥品盡量用進口藥品，如秋水仙素，發現質量好的秋水仙素容易溶解，處理材料效果較好，質量不好的，比較難溶解，處理材料效果差.活體材料處理需要謹慎，如往小白鼠體內注射淀粉肉湯，一定要掌握好注射的劑量及注射的位置，稍有不慎，小白鼠就會容易死亡.

3.4 合理安排學生參與實驗準備

過去傳統的實驗教學都是實驗老師把藥品和材料準備好，配制好，學生根據實驗步驟完成實驗就可以了.實驗結束后，學生根本不記得怎么做以及實驗的細節.這樣的實驗教學模式不利于學生實踐能力的培養，一個實驗結束了，學生根本不會配制實驗藥品和處理材料.曾經帶的幾屆學生到畢業的時候做畢業論文實驗，發現他們竟然不會配制藥品.他們的回答是上實驗課時，老師都把藥品配制好，準備好，他們按照做就可以了，他們對配制藥品沒有概念.所以反思實驗教學出現的問題，學生在實驗課上沒有獲得充分的實踐動手能力.讓學生配制實驗藥品和處理材料，在一定程度上可以提高學生的實踐動手能力.實踐中可以以組為單位配制藥品和準備材料，每一個實驗項目分別指派一組人員準備，然后老師在一旁指導配制藥品，這樣可以根據每組同學參與實驗準備的積極性、認真度和準確性對其進行考核，計入平時成績，這樣既鍛煉了學生，又結合平時表現進行了考核.學生的積極性提高了，實驗效果和質量也就會提高.

總之，實驗準備是細胞生物學實驗教學的重要部分，對于細胞生物學實驗來說，實驗前期的準備細節較多，比較繁瑣.要嚴肅認真，確保每一個環節的質量，才能提高細胞生物學實驗的教學質量.