不孕癥患者FFA、AMH水平變化及相關性研究△

肖建群 李高杰 陳 薇 彭定輝 胡漢寧

(1.武漢大學中南醫院消化科 武漢 430071；2.武漢大學中南醫院檢驗科 武漢 430071)

近年來，世界各國不孕癥患病率均持續上升，其中女性不孕原因多與排卵功能障礙、輸卵管組織結構畸形或異常改變、子宮內膜異位、不明原因的不孕、免疫學不孕等因素有關。以往不孕癥更多關注的是血清黃體生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(Prog)、睪酮(Testo)、催乳素(PRL)、黃體酮(P)等激素水平的檢測，但這些激素水平的檢測與月經周期密切相關，故干擾分析的因素多。隨著觀察卵巢功能的標志物抗苗勒管激素(AMH)檢測項目的常規化，研究者對卵巢功能的變化而引起的不孕癥有了更進一步的研究。脂代謝研究中FFA是近年來關注的重點，以往對FFA的研究人們更多關注的重點在心、腦、腎等血管性疾病或代謝紊亂性疾病，然而動物實驗研究中顯示FFA對卵母細胞具有直接的不利影響[1～3]。據此，本課題通過檢測女性不孕癥患者血清中AMH等激素水平，以及FFA等血脂指標水平，研究FFA水平與AMH等女性激素水平的關聯性，探討FFA對人體生殖功能的影響，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年11月～2019年5月在武漢大學中南醫院生殖中心就診的、已被確診為不孕癥女性患者56例作為病例組，年齡20～40歲，平均(30.4±3.81)歲。選擇同期孕前檢查為健康者，并且通過篩選，一月左右確定為正常妊娠者45例作為對照組，年齡22～35歲，平均(28.6±5.11)歲。入選標準：(1)為夫妻在一年里未采取任何避孕措施，性生活正常而沒有成功妊娠者女性；(2)年齡18～40歲。排除標準：近 3 個月內有雌激素、孕激素、口服避孕藥等藥物史；有多囊卵巢綜合征、甲狀腺功能亢進、甲狀腺機能減退或乳腺疾病等內分泌疾病史；惡性腫瘤、自身免疫系統疾病、卵巢手術史、男性不育因素、由于遺傳因素導致的不育疾病等。

1.2 材料與試劑

FFA(批號60099845)試劑由日本積水株式會社提供； LDL-C(批號：814RBN)、HDL-C(批號：818RCN)、hs-CRP(批號：16-0302)試劑均由日本積水化學工業株式會社提供；TC(批號：AUZ3692)、TG(批號：AUZ3483)試劑均由日本奧林巴斯公司提供；AMH(批號：00155984)由德國羅氏公司提供。

1.3 儀器與設備

上述檢測指標分別在美國貝克曼庫爾特-AU5400全自動生化分析儀，德國羅氏Cobas 601化學發光分析儀上檢測。

1.4 方法

1.4.1血標本采集方法

所有研究對象均空腹12h后采集靜脈血3ml，1h內分離血清。

1.4.2各指標檢測方法

酶法測定血清FFA；直接測定法檢測血清LDL-C、HDL-C；氧化酶法測定血清TC；酶法測定血清TG；電化學發光法測定血清AMH。各項操作嚴格按照作業指導書執行，各指標均受控于室內質量控制確定結果的重復性，國家和湖北省衛計委臨檢中心室間質量評價確定結果的準確性。

1.4.3不孕癥患者分組方法

以35歲為節點，分為≤35歲為適齡不孕癥組共30例，>35歲高齡不孕癥組共26例。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 各組受試者FFA、AMH等指標水平的比較分析

高齡不孕癥組AMH水平低于適齡不孕癥組和對照組(P<0.05)，差異具有統計學意義；適齡不孕癥組和對照組之間AMH水平差異無統計學意義(P>0.05)；高齡不孕癥組和適齡不孕癥組FFA水平均高于對照組(P<0.05)，差異有統計學意義；高齡不孕癥組與適齡不孕癥組之間FFA水平差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組受試者FFA、AMH等指標水平的比較分析

注：T1：適齡不孕組與正常組；T2：高齡不孕組與正常組；T3：適齡不孕組與高齡不孕組。

2.2 不孕癥患者FFA與激素和血脂相關指標進行相關性分析

不孕癥患者的FFA水平與TC、TG、HDL-C、LDL-C、AMH均無相關性，P>0.05，見表2。

表2 不孕癥患者AMH水平與各指標水平的相關性分析

3 討論

卵巢的反應性和儲備功能正常與否，以及卵巢隱性損傷的存在直接影響著正常妊娠。AMH是一種二聚體類糖蛋白，是組織生長因子β超家族成員[4～5]，其主要來源于卵巢竇前卵泡顆粒細胞和小竇狀卵泡顆粒細胞，是卵巢反應性和儲備性功能的主要標志物之一[6]。AMH能夠間接反映生長卵泡數量和原始卵泡庫存量的變化，通過影響卵泡對卵泡刺激激素的反應性而影響卵泡的選擇[7]。卵巢中小卵泡數目越多，血清中AMH值越高，反之，若卵巢中小卵泡數目越少，血清中AMH值就越低。本研究結果顯示，不孕癥患者血清AMH水平均低于對照組(P<0.05)。根據年齡分組結果顯示，高齡不孕癥組血清AMH水平低于適齡不孕癥組(P<0.05)，由于血清AMH水平對卵母細胞的成熟及分化過程具有細微的調控作用，由此表明隨年齡增長卵巢功能的調控作用逐漸在衰減，所以低水平的AMH直接或間接地影響生殖過程中調控環節，卵巢功能衰減或受損，最終導致不孕癥的發生。然而適齡人群發生不孕癥組，同樣也出現AMH低水平均低于對照組(P<0.05)，表明女性年齡不能成為評價卵巢儲備功能的絕對指標，也就是說實際年齡并不等于卵巢生物年齡，卵巢儲備功能不足或下降，是發生不孕癥的客觀原因之一。

脂代謝重要的指標之一FFA是中性脂肪的分解產物，正常人群血漿中FFA的水平含量極少，然而過量的FFA則對機體有著很強的細胞毒性作用。FFA對膜類物質具有較強的親和力，從而通過損傷細胞膜、線粒體膜和溶酶體膜等膜類物質，繼而引起細胞內微小器官的損害，所以在許多疾病的病理生理中起重要作用[8～9]。動物研究提示[10～11]，牛卵泡中主要的FFA是棕櫚酸，硬脂酸和油酸，升高的卵泡棕櫚酸和硬脂酸與卵母細胞成熟和受精率有關，并且影響胚胎的質量，表明FFA對卵母細胞具有直接的不利影響，過量的棕櫚酸會誘導人和牛顆粒細胞凋亡。在本次不孕不育患者研究結果中發現，不孕癥患者存在不同程度的血脂代謝異常或紊亂，特別是FFA水平均高于正常對照組，且隨年齡增長，血清FFA水平越高(P<0.05)，由于FFA對機體細胞毒性作用的特性，反映出FFA對人卵母細胞同樣存在有毒性作用的可能性，從而影響了女性的生殖生育能力。在AMH與FFA等血脂指標相關分析的研究中顯示不孕癥患者血清FFA等血脂指標與AMH間均無相關性(P>0.05)，表明血清FFA水平變化與卵巢功能激素的分泌不存在關聯性，但血清中高水平的FFA對人卵母細胞膜的毒性作用間接地影響卵巢的功能，導致AMH分泌減低的可能性是存在的。

綜上所述，不育不孕癥是多因素導致的結果，血清FFA水平持續增高對不孕不育的發生、發展不容忽視，在不育不孕癥的發生中發揮獨立影響作用，其機制有待進一步證實和研究。