TWIST與E-Cadherin的表達水平與宮頸癌患者病理情況的相關性分析

孫 少 霖

(開封市婦產醫院 開封 475000)

宮頸癌的發病主要與遺傳基因有關，多因素長期的共同影響最終導致宮頸癌的發生[1]。如何早期發現宮頸癌并找尋用基因的手段切斷腫瘤形成的中間環節對于宮頸癌的預防、治療以及預后具有重大意義。據相關文獻報道[2～3]，宮頸的上皮間質轉化(EMT)是宮頸癌形成中的重要環節，該轉化直接或間接協助腫瘤細胞侵犯子宮及鄰近器官或使腫瘤細胞易于發生轉移。而E-Cadherin蛋白作為細胞膜上的重要標記物，在EMT中又發揮著至關重要的作用，同時也有學者指出，TWIST基因的表達水平對判斷宮頸疾病是否惡變具有實際意義。在前人研究的基礎上，本研究進一步探討TWIST與E-Cadherin的表達水平與宮頸癌患者病理情況的相關性分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院于2017年10月～2018年11月收治的40例宮頸癌患者設為研究組(n=40)，并招募40例身體健康的志愿者設為對照組(n=40)。其中研究組平均年齡(51.49±3.11)歲，按組織類型分為鱗癌31例，腺癌9例；按有無轉移分為有轉移23例，無轉移17例；按宮頸癌分化程度分為低分化26例，中分化9例，高分化5例。對照組志愿者平均年齡為(42.38±6.72)歲。兩組患者的年齡以及研究組的組織類型、是否轉移以及分化程度等臨床資料均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法

兩組研究對象取樣標本均經甲醛固定、脫水以及石蠟包埋等常規方法處理，每片標本均為4μm，用檸檬酸鹽電解質修復并用3%的過氧化氫溶液抑制過氧化物酶的活性，采用E-Cadherin兔單克隆抗體和TWIST兔單克隆抗體，運用二步免疫組化染色法進行檢測，用二步法免疫組化試劑盒，嚴格按照試劑盒的操作流程進行，對E-Cadherin和TWIST的單克隆抗體進行處理，之后在恒定室內溫度下30min，用蘇木精進行復染。用正常兔IgG分別作為E-Cadherin以及TWIST的陰性對照，用已經確認的陽性切片作為E-Cadherin蛋白以及TWIST基因的陽性對照。用同樣的試劑檢測所有切片，保證實驗的可靠性。

1.3 觀察指標

由兩位工作經驗10年以上的病理科醫生隨機選取5個視野，每個視野200個細胞，同時選用高倍鏡(400×)對所有切片進行觀察，全部觀察細胞的平均值根據染色的強弱做量化評估。(1)TWIST：觀察其細胞質染色情況分為強陽性、弱陽性以及陰性；(2)E-Cadherin：觀察其細胞膜染色情況分為小于10%染色為陰性(無色)；10%～70%染色為弱陽性(淡黃色)；大于70%染色為強陽性(黃褐色)。

1.4 統計學分析

兩組數據均采用SPSS20.0數據軟件進行統計學分析。計數資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學差異。

2 結果

2.1 兩組研究對象TWIST的表達水平

研究組患者的TWIST表達水平(陽性率)較對照組志愿者的TWIST陽性率明顯升高，以上數據差異均具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組研究對象TWIST的陽性率[n(%)]

2.2 兩組研究對象E-Cadherin的表達水平

研究組患者的E-Cadherin表達水平(陽性率)較對照組志愿者的E-Cadherin陽性率明顯降低，以上數據差異均具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

2.3 相關性分析

根據Spearman方法結果顯示，宮頸癌組織中TWIST和E-Cadherin的表達水平呈明顯負相關(r=-0.536，P<0.05)。

表2 兩組研究對象E-Cadherin的陽性率[n(%)]

3 討論

TWIST是一種目前新發現的轉錄因子，在EMT中發揮著至關重要的調控作用，常在未分化的組織中進行表達，主要作用為使上皮細胞表型的表達水平下調，同時使間質細胞表型的表達水平上調，誘導上皮細胞發生惡性轉變[4]。TWIST基因對宮頸癌細胞發生血運轉移具有重要的調控作用，同時該基因也是宮頸癌預后的重要評估指標。本研究結果顯示，研究組患者的TWIST表達水平(陽性率)較對照組志愿者的TWIST陽性率明顯升高，即在正常子宮頸組織以及宮頸癌組織中均有TWIST基因的表達，且TWIST基因表達水平隨病變惡性程度的提高而提高，以上數據差異均具有統計學意義(P<0.05)。

E-Cadherin蛋白的主要作用為維持各個細胞間的黏附功能，據相關文獻記載[5～6]，E-Cadherin蛋白與β-catenin結合形成的復合物可以有效阻止惡性腫瘤細胞的浸潤以及轉移，而在發生EMT時，E-Cadherin蛋白表達水平下調或不表達導致細胞的黏附性降低，同時該過程也引發了β-catenin經通道進入細胞質的活動，進而促進EMT的轉導通路，產生協同效應。本研究結果顯示，研究組患者的E-Cadherin表達水平(陽性率)較對照組志愿者的E-Cadherin陽性率明顯降低，以上數據差異具有統計學意義(P<0.05)。

本研究結果表明，宮頸癌組織中TWIST和E-Cadherin的表達水平呈明顯負相關，該結果表明TWIST的表達水平和E-Cadherin的表達水平隨著宮頸癌形成以及惡化的進展而變化。在二者的變化過程中，由r值可以推出TWIST和E-Cadherin互相影響，呈明顯的負相關關系。存在于E-Cadherin上的E-box序列可以被TWIST基因識別，從而使E-Cadherin的表達水平下降，導致細胞間的黏附性降低，易于癌細胞浸潤轉移。

綜上所述，TWIST表達水平的升高以及E-Cadherin表達水平的降低是早期判斷宮頸是否惡變的重要指標，對于早期宮頸癌的診斷以及評估宮頸癌的預后具有重大意義。