兒童重癥支氣管肺炎發(fā)生過(guò)程中NF-kB、RORγt和FOXP3轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)差異研究

許惠敏 馬 娜

(開(kāi)封市兒童醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科 開(kāi)封 475000)

支氣管肺炎(Bronchopneumonia)是臨床上常見(jiàn)的兒科呼吸系統(tǒng)疾病，多是由細(xì)菌、病毒、肺炎支原體等感染所引起的疾病[1]。近年來(lái)，有相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，重癥支氣管肺炎發(fā)病率逐漸呈低齡化的趨勢(shì)，且兒童的發(fā)病率逐年增高，約占社區(qū)獲得性肺炎的發(fā)病率的10%～30%[2]。核因子-kB( NF-kB)是一種與炎癥介質(zhì)產(chǎn)生、細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)交聯(lián)和細(xì)胞凋亡有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,參與了多種炎癥反應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程[3]。炎癥早期招募嗜中性粒細(xì)胞，在氣道黏膜參與防御病原菌感染及介導(dǎo)慢性炎癥等多個(gè)重要生理或病理過(guò)程，RORγt和FOXP3是其特異性轉(zhuǎn)錄因子[4]。本次研究就對(duì)兒童重癥支氣管肺炎患兒血清中的NF-kB、RORγt 、FOXP3轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)差異進(jìn)行探討，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年11月～2017年12月我院收治的支氣管肺炎患兒70例，根據(jù)病情程度分成非重癥支氣管肺炎組(23例)以及重癥支氣管肺炎組(47例)。重癥支氣管肺炎組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡3月～5歲，平均年齡(18.09±5.81)月；(2)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒童分會(huì)呼吸學(xué)組2013年制定的《兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南》中對(duì)重癥支氣管肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患有肝腎系統(tǒng)、心腦系統(tǒng)、血液系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)等嚴(yán)重功能障礙；(2)患有川崎病以及合并其他系統(tǒng)感染性疾病；(3)患有嚴(yán)重精神類疾病不能配合研究者。所有患兒家屬均已簽署知情同意書(shū)，并表示對(duì)研究?jī)?nèi)容理解，本次研究已獲得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。兩組患兒在年齡、性別等一般資料的比較上均未見(jiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

1.2 方法

采用熒光定量PCR法分別對(duì)兩組患兒的RORγt mRNA、FOXP3 mRNA、NF-kB DNA轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)以及比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組 RORγt、FOXP3 mRNA表達(dá)水平以及NF-kB DNA結(jié)合活性比較

重癥支氣管肺炎組RORγt mRNA表達(dá)水平、NF-kB DNA結(jié)合活性顯著高于非重癥支氣管肺炎組患兒，差異均存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而FOXP3 mRNA表達(dá)水平明顯低于非重癥支氣管肺炎組患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組RORγt、FOXP3 mRNA表達(dá)水平以及NF-kB DNA結(jié)合活性比較

3 討論

重癥支氣管肺炎是常見(jiàn)的兒童重癥病房危重型疾病，由于兒童的免疫系統(tǒng)尚未完全發(fā)育完善，抵抗力低，因此兒童發(fā)生重癥支氣管肺炎的概率高，死亡率高，且易于流行[5]。有研究認(rèn)為，導(dǎo)致重癥支氣管肺炎病情兇險(xiǎn)且預(yù)后差的主要因素為患者機(jī)體內(nèi)的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)難以控制，重癥支氣管肺炎發(fā)生以及發(fā)展的最主要環(huán)節(jié)是機(jī)體內(nèi)炎癥反應(yīng)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄水平，而影響轉(zhuǎn)錄水平的關(guān)鍵則是轉(zhuǎn)錄因子的水平[6]。

細(xì)胞核因子NF-kB因具有激活免疫球蛋白 k輕鏈基因表達(dá)的能力而得名。現(xiàn)已證明它是一個(gè)多功能的轉(zhuǎn)錄因子，正常情況下NF-kB 和NF-kB的抑制因子IkB在細(xì)胞漿中形成穩(wěn)定的復(fù)合物，而當(dāng)細(xì)胞受到外界因素，如感染等刺激時(shí)，IkB發(fā)生磷酸化而降解，NF-kB則被活化，NF-kB和IkB分離并迅速移位至細(xì)胞核，與靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白合成[3]。在重癥支氣管肺炎患兒血清中，NF-kB DNA結(jié)合活性顯著高于非重癥支氣管肺炎組患兒，因此我們推測(cè)NF-kB在重癥肺炎發(fā)病機(jī)制中起介導(dǎo)作用。

有研究證實(shí)，F(xiàn)OXP3 與RORγt之間的平衡決定CD4+T細(xì)胞的轉(zhuǎn)化方向，F(xiàn)OXP3表達(dá)上調(diào)可以抑制RORγt表達(dá)，繼而促進(jìn)CD4+T細(xì)胞向Treg分化，抑制CD4+T向 Th17分化。FOXP3與 RORγt的穩(wěn)態(tài)受到破壞可以誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的發(fā)生，引起Th17分泌IL-17等炎癥因子增加[7]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，重癥支氣管肺炎組RORγt表達(dá)水平顯著高于非重癥支氣管肺炎組患兒，差異均存在明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而FOXP3 mRNA表達(dá)水平明顯低于非重癥支氣管肺炎組患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此可以推測(cè)，當(dāng)某種炎癥因子引起重癥支氣管肺炎時(shí)，使患兒血清FOXP3蛋白下調(diào)，而RORγt蛋白和基因上調(diào)，引起CD4+T淋巴細(xì)胞向Th17分化，促進(jìn)重癥支氣管肺炎的發(fā)生。

在本研究中，重癥支氣管肺炎組患兒的RORγt、NF-kB表達(dá)水平均顯著高于非重癥支氣管肺炎組患兒，而FOXP3 mRNA表達(dá)水平低于非重癥支氣管肺炎組患兒，進(jìn)一步說(shuō)明兒童重癥支氣管肺炎發(fā)生發(fā)展與RORγt、FOXP3以及NF-kB DNA轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)密切相關(guān)。上調(diào)FOXP3蛋白和基因的表達(dá)，以及下調(diào)RORγt蛋白和基因表達(dá)可起到防治嬰幼兒重癥支氣管肺炎的作用。