基于高通量測(cè)序分析黃酒對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠模型腸道微生物菌群的影響

劉蓉，欒春光，王德良，覃思，郝飛克*

1(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙，410128)2(中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院有限公司，北京，100015)3(酒類品質(zhì)與安全國(guó)際聯(lián)合研究中心，北京，100015)

衰老是機(jī)體生命過(guò)程中不可避免的現(xiàn)象，是指生物在發(fā)育成熟后，機(jī)體組織器官隨著時(shí)間推移功能逐漸衰退的過(guò)程[1-2]。機(jī)體的衰老與其生理機(jī)能以及各種病理過(guò)程存在密切的關(guān)系，如內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的失衡、自身免疫能力的下降，各組織器官發(fā)生不同程度的功能衰退等現(xiàn)象[3]。給小鼠連續(xù)頸脊皮下注射過(guò)量的D-半乳糖(D-galactose，D-gal)會(huì)造成動(dòng)物體內(nèi)代謝紊亂，產(chǎn)生大量自由基，打破氧化與抗氧化的動(dòng)態(tài)平衡，從而導(dǎo)致氧化應(yīng)激、認(rèn)知障礙等衰老相關(guān)病理現(xiàn)象的發(fā)生[4]。

研究證明，腸道菌群作為胃腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要組成部分，在維持機(jī)體健康等方面發(fā)揮著重要的作用[5]。在機(jī)體衰老的過(guò)程中，腸道屏障、營(yíng)養(yǎng)吸收以及防御免疫功能都會(huì)發(fā)生一系列改變，綜合其他外部因素如生活方式、營(yíng)養(yǎng)攝取以及宿主免疫系統(tǒng)功能的影響，可導(dǎo)致腸道微生物生態(tài)系統(tǒng)發(fā)生實(shí)質(zhì)性的變化[6-7]，研究表明，伴隨著衰老的進(jìn)程，機(jī)體腸道菌群的多樣性會(huì)發(fā)生改變，同時(shí)也會(huì)造成機(jī)體糖分解有關(guān)的菌群、產(chǎn)短鏈脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAS)菌群豐度減小以及與蛋白質(zhì)分解有關(guān)的菌群增多等變化[8-10]。ZHAO等[11]研究發(fā)現(xiàn)，相比一般小鼠，衰老小鼠腸道菌群中的F/B(Firmicutes/Bacteroidetes)比例得到升高，衰老小鼠中各種有益菌的比例也相對(duì)于一般小鼠有所下降；此外，SALAZAR等對(duì)衰老人群的腸道菌群分析證實(shí)，與青少年相比，老年人腸道內(nèi)Actinobacteria減少(特別是Bifidobacterium)，而Proteobacteria增多[12]。

黃酒(Yellow rice wine,YRW)是中國(guó)特有的具有悠久歷史的釀造酒，傳統(tǒng)的黃酒主要是由谷物等原材料通過(guò)微生物半固態(tài)發(fā)酵而來(lái)，黃酒的曲法制酒和獨(dú)特的雙邊發(fā)酵工藝，使黃酒保留了大量的功能營(yíng)養(yǎng)成分如蛋白質(zhì)、氨基酸、多肽、多糖、功能維生素等，另外在發(fā)酵過(guò)程中也會(huì)產(chǎn)生新的具有功能活性的物質(zhì)，如多酚類物質(zhì)、功能性低聚糖、活性肽等，活性物質(zhì)的存在使得黃酒被認(rèn)為具有保健作用，同時(shí)也被譽(yù)為“液體蛋糕”，羅鋁鏗等通過(guò)連續(xù)給予衰老小鼠攝入適量黃酒發(fā)現(xiàn)，黃酒具有延緩皮膚衰老的功效[13]；ZHAO等發(fā)現(xiàn)持續(xù)給予適度劑量的黃酒能夠增加衰老小鼠模型的免疫能力[14]，除此之外，以往的研究表明黃酒還具有抗氧化、抗疲勞、抗衰老、降血壓以及免疫調(diào)控的作用[15-17]。目前關(guān)于黃酒抗衰老與腸道微生物菌群之間的作用關(guān)系尚不明確，因此本研究以D-gal誘導(dǎo)衰老模型小鼠為對(duì)象，采用IonS5TMXL高通量測(cè)序平臺(tái)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠糞便樣本中細(xì)菌16S rDNA V4區(qū)進(jìn)行定性分析，比對(duì)衰老模型小鼠腸道微生物菌群的變化來(lái)探究黃酒延緩小鼠衰老與腸道微生物菌群之間的聯(lián)系。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黃酒樣品：獲取自酒類品質(zhì)與安全國(guó)際聯(lián)合研究中心(北京)，酒精度約8%～15% vol，經(jīng)過(guò)濾-4℃貯存待用。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用SPF級(jí)昆明小鼠，雄性，12周齡，體重為(30±2)g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：No. SCXK (京) 2016-002。飼養(yǎng)環(huán)境：12 h/12 h暗/光循環(huán)，(25±1)℃，相對(duì)濕度為60%，自由飲食。

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)試劑盒、過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)試劑盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)試劑盒、BCA蛋白濃度檢測(cè)試劑盒，南京建成生物工程研究所；基因組DNA提取試劑盒，Omega Bio-Tek公司；D-半乳糖(分析純)，國(guó)藥集團(tuán)(上海)化學(xué)試劑有限公司；西班牙瓊脂糖，北京索萊寶科技有限公司；Gold View(核酸染色劑)，北京博奧拓達(dá)科技有限公司；其他實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑均采用國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

LDZX-50KBS高壓滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠；BG-sub MIDI多用途水平電泳儀、BG-Power600h電泳儀電源，上海珂淮儀器有限公司；NanoDrop 微量分光光度計(jì)，美國(guó)賽默飛世爾公司； BC-C57PCR儀、Tanon 1600凝膠成像系統(tǒng)，上海天能科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組及給藥

將30只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機(jī)分成3組，每組10只，分別為：空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、黃酒組(YRW)。除了空白對(duì)照組其他各組采用頸脊皮下注射D-gal 300 mg/kg BW；空白對(duì)照組實(shí)驗(yàn)小鼠頸脊皮下注射等體積的生理鹽水；黃酒組每天以8 mL/kg BW劑量灌胃飼養(yǎng)；空白對(duì)照組以及模型對(duì)照組則采用等體積的生理鹽水灌胃，共持續(xù)42 d。實(shí)驗(yàn)期間觀察小鼠狀態(tài)，且每周據(jù)小鼠實(shí)際體重調(diào)整注射劑量。

1.3.2 動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)(Morris water maze, MWM)常用來(lái)評(píng)價(jià)動(dòng)物的空間定位與記憶認(rèn)知的能力。MWM系統(tǒng)包括：一個(gè)圓形的水池(直徑140 cm，高60 cm)，水池內(nèi)包括水深約35 cm的潔凈自來(lái)水，水溫控制在25℃左右；視頻探頭以及電腦顯示屏。通常以水池為中點(diǎn)，均分為4個(gè)象限，在一個(gè)固定的象限內(nèi)放置一個(gè)距水面1.5 cm的隱藏平臺(tái)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)SHIN等[18]的描述進(jìn)行了改進(jìn)，實(shí)驗(yàn)包括定位導(dǎo)航實(shí)驗(yàn)與探索空間測(cè)試。在定位導(dǎo)航實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，第1天，小鼠先在無(wú)隱藏平臺(tái)的水池中自由游泳60 s，從第2天開(kāi)始設(shè)置平臺(tái)，從一個(gè)固定象限開(kāi)始，每只實(shí)驗(yàn)小鼠每次被訓(xùn)練60 s，每天接受4次訓(xùn)練，每次訓(xùn)練間隔30 min，持續(xù)5 d。在訓(xùn)練過(guò)程中，若小鼠在60 s內(nèi)找到隱藏平臺(tái)，允許其在平臺(tái)上停留20 s。如果在60 s內(nèi)未找到平臺(tái)，則人為引導(dǎo)小鼠到隱藏平臺(tái)停留20 s，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中利用Any-maze軟件記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在尋找平臺(tái)過(guò)程中所需的時(shí)間(潛伏時(shí)間)。在第7天進(jìn)行探索空間實(shí)驗(yàn)，即將平臺(tái)撤去后，記錄每只實(shí)驗(yàn)小鼠在空間中60 s內(nèi)穿越原平臺(tái)位置的數(shù)目、停留在目的區(qū)域(B區(qū)域)的時(shí)間以及運(yùn)動(dòng)軌跡。

1.3.3 樣品收集

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，在無(wú)菌環(huán)境下，將每組小鼠的糞便統(tǒng)一采集入無(wú)菌管中，每組隨機(jī)分出3個(gè)平行，置于-80℃保存。采用戊巴比妥鈉對(duì)小鼠進(jìn)行麻醉后，將其頸椎脫臼處死，在冰上，迅速解剖小鼠取出肝臟，利用冰生理鹽水在冰浴下制成10%的組織勻漿液，離心10 min(4℃，5 000 r/min)，取上清液，置于-80℃保存待測(cè)。

1.3.4 生化指標(biāo)測(cè)定

分別采用相對(duì)應(yīng)的試劑盒對(duì)組織勻漿中SOD、GSH-Px、CAT活性以及MDA含量進(jìn)行檢測(cè)，再根據(jù)BCA試劑盒所測(cè)定的勻漿蛋白濃度分別計(jì)算出相應(yīng)測(cè)定值。

1.3.5 糞便DNA提取與測(cè)序

嚴(yán)格按照試劑盒中的方法對(duì)每組糞便中DNA進(jìn)行提取，并利用nanodrop 微量分光光度計(jì)測(cè)定DNA含量后，將合格的DNA樣品送至北京諾禾致源科技股份有限公司進(jìn)行高通量測(cè)序。

1.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

利用Uparse軟件 v7.0.1001對(duì)所有樣品的全部 Clean Reads 進(jìn)行聚類，以97%的一致性(identity)將序列聚類成為OTUs(operational taxonomic units)。使用Qiime 1.9.1軟件計(jì)算Observed-otus，Chao1，Shannon，Simpson，Ace，Goods-coverage。利用SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，分析數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Means±SEM)體現(xiàn)，3組以及以上數(shù)據(jù)的組間顯著性差異采用單因素方差分析，并進(jìn)行顯著性分析，數(shù)據(jù)采用±s表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃酒對(duì)D-gal致衰老小鼠模型一般特征影響

當(dāng)連續(xù)通過(guò)頸脊皮下注射給予D-gal后，如表1所示，與空白對(duì)照組相比，衰老模型組小鼠體重增量呈明顯下降趨勢(shì)(P<0.05)，與模型組相比，給予黃酒的衰老小鼠體重增量得到提高(P>0.05)。給小鼠頸脊皮下注射D-gal致使小鼠在第4周開(kāi)始出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象，到第6周，衰老模型小鼠呈現(xiàn)出明顯精神不佳，行為緩慢以及眼神渙散等現(xiàn)象，和ZHAO等實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致[19-20]。說(shuō)明了D-gal所造成的衰老對(duì)小鼠的體重正常增長(zhǎng)存在一定的影響，適量攝入黃酒有利于改善由D-gal致衰老過(guò)程中的小鼠體重增長(zhǎng)緩慢現(xiàn)象。

表1 黃酒對(duì)D-gal致衰老小鼠體重增量的影響

注：同列肩標(biāo)符號(hào)“*”表示與對(duì)照相比差異顯著(*P<0.05),“**”表示差異極顯著(P<0.01)；“#”表示與模型相比差異顯著(#P<0.05)。下同。

2.2 黃酒對(duì)D-gal致衰老小鼠模型抗氧化指標(biāo)的影響

研究表明，活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)在參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)與體內(nèi)氧化平衡的過(guò)程中起著重要的雙重作用，ROS累積生成與清除失衡會(huì)造成細(xì)胞組織器官發(fā)生氧化損傷進(jìn)而導(dǎo)致與氧化相關(guān)疾病的發(fā)生。在抗氧化的調(diào)節(jié)中，體內(nèi)的抗氧化防御系統(tǒng)起到了重要的作用，其中酶促抗氧化系統(tǒng)包括SOD、GSH-Px以及CAT等組成。如表2所示，相比空白對(duì)照組，衰老模型組小鼠的腦組織中的抗氧化酶活力顯著下降(P<0.05，0.01)，同時(shí)脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA的含量顯著升高(P<0.05)；與衰老模型組相比，攝入黃酒組衰老小鼠組腦組織SOD、GSH-Px以及CAT活力得到顯著改善(P<0.05)，肝組織中的SOD、GSH-Px以及CAT活力得到改善，同時(shí)MDA水平顯著降低(P<0.05)。結(jié)果提示D-gal持續(xù)攝入會(huì)導(dǎo)致小鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激，促進(jìn)脂質(zhì)過(guò)氧化，提示適量黃酒攝入可以提高衰老小鼠腦組織與肝臟組織的抗氧化能力，減少自由基累積，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化，使機(jī)體內(nèi)MDA含量下降。

表2 黃酒對(duì)D-gal致衰老小鼠抗氧化指標(biāo)的影響

2.3 黃酒對(duì)D-gal致衰老小鼠行為認(rèn)知的影響

認(rèn)知能力衰退是衰老過(guò)程中常見(jiàn)的病理現(xiàn)象，本研究通過(guò)Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的空間定位與學(xué)習(xí)、記憶能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在定位導(dǎo)航實(shí)驗(yàn)中，D-gal致衰老模型組小鼠的潛伏時(shí)間相比空白對(duì)照組顯著(P<0.05)升高(圖1)，空間探索實(shí)驗(yàn)中，相較空白對(duì)照組衰老模型組穿越平臺(tái)次數(shù)與B區(qū)域停留時(shí)間明顯(P<0.05)降低(圖2、圖3)，對(duì)比模型組，黃酒組小鼠在定位導(dǎo)航實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)中的潛伏時(shí)間、穿越平臺(tái)次數(shù)以及B區(qū)域停留時(shí)間均得到明顯改善(P<0.05)，同時(shí)從最后一天各組小鼠游泳軌跡發(fā)現(xiàn)(圖4)，經(jīng)過(guò)訓(xùn)練后，黃酒組小鼠到達(dá)平臺(tái)的軌跡較衰老模型組更為直接。以上結(jié)果說(shuō)明D-gal對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的認(rèn)知能力具有一定程度的影響，提示衰老模型造模成功，而適量的黃酒干預(yù)能夠有效緩解由D-gal所致的衰老小鼠認(rèn)知功能衰減。

圖1 小鼠在60 s內(nèi)定位導(dǎo)航訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)中的潛伏時(shí)間

圖2 小鼠在60 s內(nèi)探索空間實(shí)驗(yàn)中的穿越平臺(tái)的次數(shù)

圖3 小鼠在60 s內(nèi)探索空間實(shí)驗(yàn)中的停留在目標(biāo)區(qū)域的時(shí)間

a-對(duì)照；b-模型；c-YRW

2.4 黃酒對(duì)D-gal致衰老小鼠模型腸道微生物物種豐度及多樣性影響

如表3所示，發(fā)現(xiàn)在所有樣品中，OUT數(shù)目最多的是衰老模型組(686)，其次是空白對(duì)照組(646)，黃酒最少(630)，表明本研究實(shí)驗(yàn)小鼠糞便中的菌群豐富度均可觀。如圖5所示，基于OUT水平發(fā)現(xiàn)在無(wú)度量多維標(biāo)定法分析圖上，衰老模型組和空白對(duì)照組樣本顯著分離，表示D-gal對(duì)小鼠腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)組成有較明顯的影響，黃酒組與空白對(duì)照組相距相對(duì)而言較近，表明黃酒干預(yù)后衰老小鼠模型的腸道菌群結(jié)構(gòu)有改善。

在Alpha多樣性分析中，Chao1和Ace指數(shù)是反映菌群豐富度的重要指標(biāo)，Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)反映菌群多樣性，如表3所示，與空白組相比，模型組的Chao1(703)、Ace(699)和Shannon(7.37)指數(shù)最高，Simpson(0.967 3)指數(shù)最低(P<0.05)，這說(shuō)明D-gal致衰老小鼠的腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了顯著的變化。當(dāng)衰老小鼠攝入黃酒后，腸道菌群OUT數(shù)得以調(diào)整，Chao1、Ace和Shannon指數(shù)得到顯著下降，Simpson指數(shù)也得到相應(yīng)的回升，提示黃酒干預(yù)有助于衰老小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)一定程度的改善。Good-coverage指數(shù)代表樣品的測(cè)序深度，本研究中測(cè)序覆蓋深度均大于0.99，故樣品序列未被檢測(cè)到的幾率較低，說(shuō)明數(shù)據(jù)具有可靠性。同時(shí)，由圖6可知，隨著測(cè)序樣本量的增加，各組的物種數(shù)量也隨著增大，曲線逐漸趨向平坦，表明測(cè)序所用數(shù)據(jù)量具有合理性。

表3 各組樣品腸道菌群多樣性指數(shù)

圖5 小鼠腸道菌群多樣性NMDS分析

圖6 樣本測(cè)序數(shù)量

2.5 黃酒對(duì)D-gal致衰老小鼠腸道菌群水平相對(duì)豐度的影響

對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠各組糞便樣品細(xì)菌16S rRNA基因V4區(qū)序列進(jìn)行測(cè)序，利用Mothur和SILVA132的SSUrRNA數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)得到的有效OUT進(jìn)行計(jì)算和分析，分別對(duì)樣品腸道菌群門(phylum)與屬(genus)水平組成進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。如圖7所示，空白對(duì)照組、衰老模型組以及黃酒組的腸道菌群在門水平上都以Firmicutes和Bacteroidetes為主，各組相對(duì)豐度分別為23.59%和57.26%、35.81%和42.55%、21.78%和59.26%。

如圖8所示，對(duì)3組糞便樣品進(jìn)行菌群屬水平分析。空白對(duì)照小鼠組糞便中包含有Bacteroides、unidentified_Lachnospiraceae、Bifidobacterium等多個(gè)菌屬。衰老模型小鼠組主要包含的菌屬有Bacteroides、unidentified_Lachnospiraceae、Blautia、Butyricioccus等，黃酒樣品組的糞便中主要有Bacteroides、unidentified_Lachnospiraceae、Butyricioccus、Lactobacillus等菌屬。

圖7 各樣本腸道菌群門水平相對(duì)豐度

圖8 各樣本腸道菌群屬水平相對(duì)豐度

2.6 黃酒對(duì)D-gal致衰老小鼠腸道差異菌群的影響

如圖9所示，與空白對(duì)照組相比，衰老模型組中F/B顯著上升(P<0.05)，該結(jié)果與訾雨歌[10]、ZHAO[11]和ZHANG等[20]研究結(jié)果一致。通過(guò)黃酒干預(yù)后，衰老小鼠腸道菌群F/B值得到改善，逐漸接近空白對(duì)照組。如圖10所示，通過(guò)進(jìn)一步分析3組實(shí)驗(yàn)小鼠腸道菌群的差異性發(fā)現(xiàn)存在5種顯著差異的菌屬，與空白對(duì)照組相比，經(jīng)過(guò)D-gal誘導(dǎo)后衰老模型組小鼠Bacteroides相對(duì)豐度顯著下降，而unidentified_Lachnospiraceae、Blautia、Butyricioccus的相對(duì)豐度得到顯著上升(P<0.05、0.01)。與衰老模型組小鼠的糞便菌群相比，經(jīng)過(guò)黃酒干預(yù)，衰老模型小鼠腸道菌群內(nèi)Bacteroides、unidentified_Lachnospiraceae、Butyricioccus、Lactobacillus、Bifidobacterium相對(duì)豐度顯著升高(P<0.05)，同時(shí)Blautia顯著降低(P<0.05)。

3 討論

衰老是生命過(guò)程中無(wú)法避免的現(xiàn)象，在衰老過(guò)程中通常伴隨著不同程度的神經(jīng)退行癥狀，會(huì)導(dǎo)致認(rèn)知、學(xué)習(xí)記憶功能的損傷，衰老也與ROS的過(guò)量累積密切相關(guān)[21-22]。ROS作為胞內(nèi)信號(hào)因子參與蛋白磷酸化到轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的各個(gè)途徑和網(wǎng)絡(luò)，但是過(guò)量的ROS會(huì)導(dǎo)致機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白質(zhì)氧化以及DNA突變等現(xiàn)象，從而造成氧化損傷，導(dǎo)致各種相關(guān)病理情況的出現(xiàn)[3, 23]。本研究發(fā)現(xiàn)在黃酒干預(yù)下，D-gal致衰老模型體重增長(zhǎng)緩慢的情況有所緩解，且肝組織、腦組織中的SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化酶活力得到顯著改善，同時(shí)脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA的水平含量顯著降低。黃酒是由糧食谷物通過(guò)微生物發(fā)酵而來(lái)，其含有豐富的抗氧化功能成分，適量的黃酒能夠有效清除衰老過(guò)程中累積的自由基以及過(guò)氧化物等，達(dá)到抗氧化的目的，從而為延緩衰老的進(jìn)程帶來(lái)積極影響。

圖9 黃酒對(duì)衰老小鼠腸道F/B值的影響

a-Bacteroides;b-unidentified_Lachnospiraceae;c-Blautia;d-Butyricicoccus;e-Lactobacillus;f-Bifidobacterium

本研究發(fā)現(xiàn)相比衰老模型組，在黃酒干預(yù)的D-gal致衰老模型小鼠腸道菌群中unidentified -Lachnospiracea和Butyricicoccus的相對(duì)豐度得到增加。unidentified -Lachnospiracea和Butyricicoccus都被證明是與短鏈脂肪酸(SCFAs)產(chǎn)生相關(guān)的菌屬[33-34]，SCFAs特別是丁酸能夠刺激黏膜免疫反應(yīng)[35]，一定程度上能夠緩解衰老所過(guò)程中腸道炎癥[34,36]，同時(shí)SCFAs能夠通過(guò)調(diào)節(jié)腸道pH值，抑制有害菌生長(zhǎng)，穩(wěn)定腸道內(nèi)環(huán)境，進(jìn)一步改善衰老過(guò)程中腸道微生物菌群的失衡狀態(tài)，從而起到延緩衰老的作用。黃酒中成分復(fù)雜多樣，如多肽類、多糖類以及酚類物質(zhì)等均很豐富，除了直接被人體吸收的部分以外，那些不能被直接吸收的成分及腸肝循環(huán)回收的化合物會(huì)到達(dá)大腸, 通過(guò)腸道微生物群進(jìn)行廣泛的代謝，與腸道微生物菌群相互作用，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生影響。具體是黃酒中哪些成分有效調(diào)控腸道菌群，還需要進(jìn)一步地深入研究分析。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，適量黃酒攝入能夠增加衰老實(shí)驗(yàn)小鼠組織抗氧化酶活性，同時(shí)，通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)D-gal致衰老小鼠糞便中腸道菌群進(jìn)行宏基因組分析以及結(jié)合行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，攝入適量黃酒能夠改善衰老小鼠的腸道微生物菌群組成結(jié)構(gòu)，以及改善衰老小鼠的學(xué)習(xí)認(rèn)知障礙；同時(shí)增加了腸道微生物菌群中產(chǎn)丁酸類有益菌的相對(duì)豐度，一定程度上有利于SCFAs的產(chǎn)生，維持腸道內(nèi)環(huán)境的平衡與穩(wěn)定，助于延緩衰老。