MALDI-TOF MS用于碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌同源性分析的臨床應(yīng)用

宋江勤

天門市第一人民醫(yī)院，湖北 天門 431700

當(dāng)前院內(nèi)感染防控中，進(jìn)行同源性分析至關(guān)重要，常用同源性分析技術(shù)中脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)為當(dāng)前病原菌分子分型時(shí)的金標(biāo)準(zhǔn)，具有分辨力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)[1]。MALDITOF MS為新型技術(shù)，本文為研究其臨床應(yīng)用價(jià)值，收集我院50株碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌進(jìn)行同源性分析，詳情如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料 以我院2019.1-2019.12自50例患者分離出的50株碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌為研究標(biāo)本，其中24株來自ICU患者，26株來自其他科室患者。

1.2 方法 儀器采用vitek Ms質(zhì)譜儀。脈沖場(chǎng)凝膠電泳方法為：將此50株菌株接種于血平板，于37℃環(huán)境培養(yǎng)18h，選取其中菌落溶在細(xì)胞懸液緩沖液內(nèi)，完成菌體懸浮，制備4個(gè)麥?zhǔn)蠞岫染鷳乙海罄m(xù)加入400ul菌液與蛋白酶K溶液20ul混合均勻，加入濃度為1%的瓊脂糖溶液400ul，迅速注入模具，室溫靜置10min，凝固后混合液內(nèi)（25ul蛋白酶K+5mL細(xì)胞裂解液），54℃水浴搖床進(jìn)行裂解，持續(xù)2h，在以50℃純凈水及TE水浴搖床洗滌，取寬度為2mm膠塊置入200ul緩沖體系離心管，10min后加入200ul酶切體系，水浴酶切后進(jìn)行脈沖場(chǎng)電泳。MALDI-TOF MS：菌株接種后，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，調(diào)控二氧化碳濃度至5%，持續(xù)培養(yǎng)18h，取適量細(xì)菌置入15mL的Eppendorf管內(nèi)，加純水混勻，水量300ul，加無水乙醇900ul混勻，以13000r/min轉(zhuǎn)速離心2min，去上清液再加甲酸混勻，甲酸濃度為70%，液量50ul，再加乙腈，液量50ul，混合均勻再離心2min，取上清液至樣品靶板，自行晾干后滴1ul基質(zhì)溶液。

2 結(jié)果

2.1 脈沖場(chǎng)凝膠電泳 本次研究中50株菌株有A、B、C、D、E，5種脈沖帶型，其中A型共計(jì)23株，均為ICU病室分離所得，其內(nèi)21株無明顯條帶差別，另有2株同此21株存在條帶差別，B型有5株、C型6株、D型8株、E型7株。

2.2 MALDI-TOF MS 本次MALDI-TOF MS同源性分析中，50株菌株被分為Ⅰ類、Ⅱ類，其中Ⅰ類24株，均為ICU病室分離所得，其中21株在三維散點(diǎn)圖中空間位置較為接近，推斷其親緣關(guān)系較近，疑似為同一菌株來源。

3 討論

肺炎克雷伯菌屬于院內(nèi)感染常見致病菌，其感染部位較多，如呼吸道、尿道、腹腔等均為常見感染部位，感染后若未及時(shí)控制，可進(jìn)一步引起敗血癥、腦膜炎等危重并發(fā)癥[2]。

近年來廣譜抗菌藥物的不斷研發(fā)及應(yīng)用，一方面雖提高了臨床感染疾病防治效果同時(shí)也導(dǎo)致各類病原菌耐藥性增加，臨床碳青霉烯類藥物的濫用，致使碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌的數(shù)量明顯增多[3]。

MALDI-TOF MS為當(dāng)前應(yīng)用較多的微生物鑒定技術(shù)，在進(jìn)行菌株鑒定時(shí)，還可利用軟件完成同源性分析，為醫(yī)院感染控制提供可靠實(shí)驗(yàn)室依據(jù)[4]。實(shí)際應(yīng)用中其可進(jìn)行主成分分析及聚類分析，在幾分鐘內(nèi)即可完成同源性分析，具有通量高、方便、成本低等優(yōu)點(diǎn)。與當(dāng)前微生物鑒定金標(biāo)準(zhǔn)的脈沖場(chǎng)凝膠電泳對(duì)比，在碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌同源性分析效果基本一致。本次兩種技術(shù)在50株菌株的同源性分析中，對(duì)ICU病室分離的菌株的同源性分析結(jié)果無明顯差別。

綜上所述，MALDI-TOF MS用于碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌同源分析具較高應(yīng)用價(jià)值，可積極推廣。