鈉離子通道調節蛋白1與肝癌患者3年預后的相關性研究

唐巧萍 段志強 喬悾

肝癌在各類腫瘤中發病率位居第5位，死亡率居于第3位[1]。由于早期缺乏典型癥狀，大部分患者入院就診時，病情進展成中、晚期，增加治療難度與死亡風險。近年來，有研究發現鈉離子通道調節蛋白1(SCNM1)與腫瘤進展、轉移存在關聯[2]。SCNM1可促使腫瘤細胞中鈣離子濃度改變，從而致其處于暫時性去極化狀態，促進腫瘤進展[3]。本研究旨在分析SCNM1與肝癌患者3年預后的相關性，便于對患者預后進行預測，為臨床治療提供依據，現報道如下。

資料與方法

一、一般資料

回顧性分析我院2014年2月—2016年2月收治的90例肝癌患者的臨床資料，所有患者均經病理穿刺證實為肝癌。其中男47例，女43例，年齡35～77歲，平均(58.93±11.26)歲；腫瘤直徑：≥5 cm 41例，<5 cm 49例；腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期52例，Ⅲ～Ⅳ期38例；Child-Pugh分級：A級32例，B級48例，C級10例；肝硬化：有36例，無54例。

二、納入與排除標準

(一)納入標準 ①經病理檢查證實為肝癌，診斷明確；②取癌組織及癌旁組織檢測SCNM1表達水平；③入院前無肝部手術史與放療、化療史；④病例資料完整。

(二)排除標準 ①合并其他惡性腫瘤；②復發性腫瘤；③未留聯系方式，無法進行隨訪；④病理標本不合格。

三、方法

采用RT-qPCR檢測法測定癌組織、癌旁組織的SCNM1表達水平。(1)提取標本總RNA：①取去離子水800 mL加入燒杯內，然后取DEPC800 μL加入，制備成DEPC水，封閉，避光下反應4 h。將器材、耗材于DEPC水內浸泡，將瓶口封閉，過夜。所有耗材均進行高壓滅菌，將殘余DEPC水去除，烤干。②將組織標本取出，取組織塊50 mg置于玻璃器皿內。取Trizol試劑200 μL加入，待徹底研磨后，移至EP管內。另取Trizol試劑800 μL對研磨器予以沖洗，轉移液體至EP管內，充分混勻，在室溫下反應5 min。③取200 μL氯仿加至EP管內，振蕩15 min，混合充分，在室溫下反應10 min，離心15 min(7500 rpm)。④選取一個新的EP管，將上層水相移至EP管內。⑤取異丙醇500 μL加入，充分混勻，在-20 ℃條件下反應20 min，離心1 min(7500 rpm)。⑥棄血清，將沉淀物留取，取提前配制的乙醇溶液1000 μL加至EP管內，振蕩、洗滌，離心5 min(7500 rpm)。⑦棄血清，將EP管的管口打開，吹干。⑧取無菌DEPC水20 μL將沉淀溶解，獲取樣本RNA。(2)逆轉錄：①常規對標本進行溶解。②取總RNA 1 μg加入EP管內，振蕩，充分混勻，短暫離心。③在70 ℃條件下進行水浴，時間為5 min，轉入冰上。④依次取5×Buffer 4 μL、RNase抑制劑1 μL、dNTP混合物2 μL加入，振蕩，短暫離心。⑤在37 ℃條件下水浴，時間為5 min。⑥取逆轉錄酶1 μL加入，混勻，短暫離心。⑦在42 ℃條件下水浴1 h。⑧完成逆轉錄反應后，在70 ℃條件下水浴10 min，反應終止，存放于-80 ℃冰箱內。(3)PCR反應：SCNM1上游引物為CCGTGCAGGCA-AGAAACATC，下游為TTTCCCGTCCCATACCT-GTACT。反應條件為98 ℃ 60 s，(98 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，42個循環)，72 ℃ 10 min。根據2-△△Ct法對其相對表達量進行計算。

四、觀察指標

比較癌組織、癌旁組織的SCNM1表達水平。記錄患者的臨床資料，包括性別、年齡、腫瘤直徑、肝功能分級、肝硬化，分析SCNM1表達水平與臨床特征的關系。利用電話隨訪3年，記錄患者的生存、死亡情況，分析SCNM1表達于3年預后的關系。

五、統計學方法

結 果

一、癌組織、癌旁組織的SCNM1表達水平比較

癌組織中SCNM1表達量為(11.64±3.26)，顯著高于癌旁組織的(7.49±2.76)(t=9.217，P=0.000)。

二、SCNM1表達水平與臨床特征的關系分析

男性患者癌組織SCNM1表達量為(10.23±3.95)，與女性患者的(10.15±3.89)比較無顯著差異(t=0.097，P=0.923)。年齡≥60歲患者的SCNM1表達量為(11.21±2.12)，與年齡<60歲患者的(11.06±2.20)相比無顯著差異(t=0.329，P=0.743)。腫瘤直徑≥5 cm患者的SCNM1表達量為(10.93±2.12)，顯著高于腫瘤直徑<5 cm患者的(8.23±2.05)(t=6.127，P=0.000)。Child-Pugh A級患者的SCNM1表達量為(7.13±1.24)，顯著低于B、C級患者的(10.45±2.08)、(10.81±2.23)(t=8.245，P=0.000)。有肝硬化患者的SCNM1表達量為(10.96±2.46)，顯著高于無肝硬化患者的(8.04±1.34)(t=7.266，P=0.000)。

三、不同預后患者SCNM1表達分析

通過電話隨訪3年，提示在90例患者中，有43(47.78%)例存活，47(52.22%)例死亡。死亡患者的SCNM1表達量(10.75±2.37)顯著高于存活患者(7.93±1.76)(t=9.063，P=0.000)。

討 論

本研究發現與癌旁組織相比，癌組織中的SCNM1表達量顯著增高，提示其表達水平上調與肝癌進展可能存在關聯。SCNM1是離子通道的重要組成部分，它對維持機體活動而言意義重大，在腫瘤進展中也發揮著作用。研究表明鈉離子通道可通過濃度門控鈉離子、酸質子門控鈉離子、電壓門控鈉離子三類通道被激活，這類通道在多種惡性腫瘤中存在表達，包括肺癌、前列腺癌、結腸癌等[4]。另有研究提示SCNM1可促使SCN8A突變表型的表達發生變化，從而對鈉離子通道進行調控，參與腫瘤進展[5]。筆者推測這可能是SCNM1參與肝癌進展的重要機制。

通過分析SCNM1表達水平與臨床特征的關系，提示其表達量與患者腫瘤直徑、腫瘤分期、肝功能分級、肝硬化情況有關。而腫瘤直徑腫瘤分期、肝功能分級以及肝硬化均已被證實對肝癌患者預后的影響非常大[6]。基于此，本次研究隨訪3年，分析SCNM1表達與患者預后的關系，提示與生存患者相比，死亡患者的癌組織中SCNM1表達水平更高。這表明SCNM1表達量越高，死亡風險越大。既往有研究人員針對結直腸癌患者進行分析，發現SCNM1在其癌組織中表達上調，但具體機制并未明確[7]。有研究指出SCNM1與癌癥患者新生血管生成存在關聯，它能促進血管內皮細胞、淋巴細胞、平滑肌細胞的增殖、分化[8]。筆者推測SCNM1可能通過促進新生血管生成，加重患者病情，導致癌細胞增殖、分化、轉移，從而影響肝癌患者預后。

綜上，SCNM1在肝癌患者的癌組織中呈高表達水平，其表達量與腫瘤直徑、腫瘤分期、肝功能分級、肝硬化情況有關，患者SCNM1表達量越高，則死亡風險越高。此外，本研究也有不足，如僅選取90例患者，樣本量少，未來需擴大樣本量對此予以探討。