KCNE1、KCNE2基因多態性與家族性房顫的相關性

劉俊 應璇 董揚 王文標

(金華市人民醫院心血管內科,浙江 金華 321000)

房顫是最常見的心律失常類型之一，其發病率為1%～2%〔1〕。房顫最嚴重的并發癥之一是體循環血栓栓塞，特別是腦卒中。房顫可引起運動耐力降低、室性心律失常、心動過速心肌病和心衰等并發癥〔2〕。目前房顫的藥物轉復并維持竇律療效差，射頻消融術對于持續性房顫患者單次成功率也僅有37.5%～55.0%〔3〕。目前國內外持續性房顫藥物治療及非藥物治療療效差，而房顫的基因治療可能尚需較長時日方能成為現實，建議還是強調房顫的一級預防，早期發現，個體化治療及預后判定等〔3～5〕。隨著分子生物學技術的發展和人類基因組研究的深入，引起房顫的分子機制仍未明確，雖家族性房顫相關的遺傳學研究已取得一定進展，但并未確定哪種基因突變是最常見的致病基因〔6，7〕。 本研究探討KCNE1、KCNE2基因多態性與家族性房顫的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入的62例房顫患者選擇于金華市人民醫院2017年1～12月。納入標準：①根據24 h動態心電圖或體表心電圖診斷；②年齡65～85歲；③獲得知情同意。排除標準：①合并瓣膜型心臟病、肺心病、先天性心臟病、心包炎及甲狀腺功能亢進等；②精神疾病者。62例房顫患者中，男38例，女24例；年齡65～78〔平均(71.54±3.97)〕歲；其中家族性房顫39例，非家族性房顫23例。另選擇同期健康體檢者30例作為對照組，男18例，女12例；年齡67～79〔平均(72.18±5.46)〕歲。各組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2方法 采集各組受試者外周靜脈血3 ml，進行DNA測序，以天根生化磁珠提取DNA試劑盒自動化提取外周白細胞基因組DNA，且以PCR重測序法測定KCNE1基因rs1805127位點A/G和KCNE2基因rs1805120位點C/T基因多態性。引物序列由上海生工生物工程技術有限服務有限公司提供，引物序列為：KCNE1基因rs1805127位點上游引物5′-AGGAGACAGTTCAGCAGG-3′，下游引物5′-TTCAACGACATAGCACGAC-3′；KCNE2基因rs1805120位點上游引物5′-CAGAGATGTCATCGCTCCTG-3′，下游引物5′-TCCACCCCACTACCTCCCACC-3′。PCR擴增條件：采用95℃條件下預變性5 min；反應循環：采用95℃條件下變性30 s、58℃條件下退火30 s、72℃條件下延伸30 min，循環35次；最后采用72℃條件下末端延伸5 min后，冷卻PCR產物至4℃。PCR產物瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像分析儀中拍照檢測；回收PCR產物，測序上機。

1.3觀察指標 ①觀察各組KCNE1基因rs1805127位點A、G等位基因分布情況；②觀察各組KCNE1基因rs1805127位點AA、AG、GG基因型頻率分布情況；③觀察各組KCNE2基因rs1805120位點C、T等位基因分布情況；④觀察各組KCNE2基因rs1805120位點CC、CT、TT基因型頻率分布情況。

1.4統計學方法 運用統計學軟件SPSS19.0進行t、χ2檢驗。

2 結 果

2.1各組KCNE1基因rs1805127位點A/G等位基因分布比較 家族性房顫組和非家族性房顫組KCNE1基因rs1805127位點A等位基因分布率明顯低于對照組，而G等位基因分布率明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；而家族性房顫組和非家族性房顫組KCNE1基因rs1805127位點A和G等位基因分布率比較無明顯差異(P>0.05)，見表1。

2.2各組KCNE1基因rs1805127位點AA、AG、GG基因型頻率分布比較 家族性房顫組和非家族性房顫組KCNE1基因rs1805127位點GG基因型分布率明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；而家族性房顫組和非家族性房顫組KCNE1基因rs1805127位點GG基因型分布率比較無明顯差異(P>0.05)，各組AA、AG基因型分布率無明顯差異(P>0.05)，見表2。

2.3各組KCNE2基因rs1805120位點C/T等位基因分布比較 各組KCNE2基因rs1805120位點C和T等位基因分布率比較無明顯差異(P>0.05)，見表3。

2.4各組KCNE2基因rs1805120位點C/T基因型頻率分布比較 各組KCNE2基因rs1805120位點CC、CT和TT基因型頻率比較無明顯差異(P>0.05)，見表4。

表1 各組KCNE1基因rs1805127位點A/G等位基因分布率比較〔n(%)〕

與對照組比較：1)P<0.05，下表同

表2 各組KCNE1基因rs1805127位點AA、AG、GG基因型頻率分布比較〔n(%)〕

表3 各組KCNE2基因rs1805120位點C/T等位基因分布比較〔n(%)〕

表4 各組KCNE2基因rs1805120位點C/T基因型頻率分布比較〔n(%)〕

3 討 論

家族性房顫患者發病年齡相對較輕，無明確基礎心臟疾病，占房顫患者的2%～16%〔8～10〕。家族性房顫相關基因通常主要是編碼某個離子通道，并且基因表達異常會造成組成某一種離子通道的蛋白缺失及結構異常，從而導致離子通道功能受到影響〔11～13〕。因此，針對家族性房顫基因定位不僅是明確了突變的位點，同時還需明確房顫時離子通道異常的原因所在〔14～16〕。

心肌細胞上分布眾多離子通道，而其中這些離子通道上相關基因多態改變，從而導致出現離子通道重構，進一步導致心房肌細胞動作電位受影響，而增加房顫的易患性〔17〕。其中認為在眾多離子通道中，鉀離子通道相關基因多肽改變與房顫發生關系緊密。KCNE1基因不僅能夠編碼β亞單位，同時還能夠與α亞單位基因共同構成緩慢激活延遲整流鉀通道〔18～20〕。本研究表明，房顫發生與rs1805127多態性具有相關性，并且認為等位基因G可能為家族性房顫易感基因。KCNE2基因為一種瞬時外向鉀離子通道編碼基因。研究報道顯示，短QT綜合征患者家族中心室及心房的有效不應期明顯縮短，且經程控電刺激誘導出室顫和房顫，且經基因分析顯示KCNE2基因第1 764位胞嘧啶核苷酸被鳥嘌呤核苷酸替代，并且相應的其所編碼的第588位天冬氨酸變為賴氨酸，故而認為KCNE2基因N588K突變與房顫發生具有一定的相關性〔21〕。本研究表明，KCNE2基因位點rs1805120多態性與家族性房顫無明顯相關性。