從“木郁克土”角度探討圍絕經期綜合征肝郁證大鼠胃腸動力的改變

張鵬橫 阮璐薇 沈建英 梁文娜

(1福建中醫藥大學中醫證研究基地，福建 福州 350122；2福建省2011中醫健康管理協同創新中心；3福建省中醫健康狀態辨識重點實驗室)

圍絕經期綜合征(PPS)，又稱為絕經綜合征，中醫稱“絕經前后諸證”，發病率高達70%以上〔1〕。臨床研究顯示，圍絕經期女性容易受到社會、工作、家庭、生活等各方面壓力的影響，易發生情緒異常〔2，3〕，致使肝失疏泄，氣機郁滯，引發肝郁；肝郁是PPS病理變化的重要環節〔4〕；胃腸功能紊亂與PPS的發生呈正比〔5〕。中醫認為，胃腸功能是脾胃狀態的表現，是后天之本，化生之源，擔負著濡養四肢百骸五臟六腑等重要角色，但兩者間的作用機制尚不明確。柴胡疏肝散是疏肝解郁，治療肝郁證的經典方劑。本研究采用PPS肝郁證的大鼠模型，以方證對應進行干預，通過觀察大鼠體重、飼料消耗與胃腸動力情況，從“木郁克土”角度闡釋PPS肝郁證大鼠胃腸動力的改變。

1 材料與方法

1.1動物 3月齡SPF級SD雌性大鼠24只，體重為270～330 g，由斯萊克動物有限責任公司提供，許可證號：SCXK(滬)2017-0005。飼養于福建中醫藥大學動物實驗動物研究中心SPF級屏障系統，溫度(20±2)℃，濕度40%～60%，12 h周期性光照環境，普通飼料喂養，自由飲食、飲水。隨機分為假手術組、PPS組、PPS肝郁組、柴胡疏肝散組各6只，在建立肝郁模型的同時予以藥物干預。假手術組，常規喂養，等量生理鹽水灌胃；PPS組和PPS肝郁組，常規喂養，等量生理鹽水灌胃；干預組，常規喂養，采用柴胡疏肝散水提物灌胃，3.31 g/(kg·d)。給藥劑量按照人與動物藥物等效劑量換算法，即給藥劑量為人的6.3倍計算用藥量，各組灌胃體積為10 ml/(kg·d)。

1.2藥物 柴胡疏肝散：根據《景岳全書》柴胡疏肝散原方組成：柴胡6.0 g、陳皮6.0 g、白芍4.5 g、川芎4.5 g、枳殼4.5 g、香附4.5 g、炙甘草1.5 g。藥物蒸餾水浸泡后，武火煎至沸騰，文火煎煮1 h，取汁4層紗布過濾，再加蒸餾水文火煎煮1 h，取汁過濾，2次藥汁合并，濃縮至含生藥0.5 g/ml，4℃冰箱保存備用。

1.3儀器 束縛器：長20 cm×直徑6 cm透明筒。電子稱：MAXN品牌i2000型號。

1.4模型的建立 ①去勢：采用去勢法建立圍絕經期綜合征模型。麻醉后，大鼠取仰臥位固定。于臍與恥骨前緣中點沿腹底壁正中線向上側后方切開皮膚0.5～1.0 cm，切開腹白線及腹膜，打開腹腔。在切口下方找到子宮體及一側子宮角，沿子宮角向前導出卵巢，結扎卵巢系膜血管后摘除卵巢。同法摘除另一側卵巢。將子宮還納后分別縫合腹膜、皮膚，并用碘伏棉球消毒。假手術：操作同去勢，但不切除卵巢，只去掉卵巢旁等體積脂肪。手術后自然恢復1 w，在慢性不可預知性溫和應激前連續7 d大鼠陰道脫落細胞進行觀察，無成熟脫落細胞，證明去勢成功。②慢性不可預知性溫和應激改良：除假手術組，其余組別大鼠均接受21 d慢性應激建立肝郁證模型，應激源包括：禁食(24 h)、禁水(24 h)、4℃冰水游泳(5 min)、45℃熱環境(5 min)、夾尾(2 min)、束縛(3 h)、傾斜鼠籠45°(24 h)，于21 d內隨機應用，每日予1種應激，每種應激不可連續2次使用，每種應激方法使用應>2次。

1.5檢測指標

1.5.1大鼠體重 于應激前1 d，應激第7、14、21天記錄大鼠體重。體重增長率=(造模后體重-造模前體重)/造模前體重×100%。

1.5.2飼料消耗 于應激前1 d和應激第21天記錄大鼠飼料消耗情況，并計算單位體重飼料消耗量。飼料消耗量計算公式=24 h攝入量(mg)/體重(g)。

1.5.3胃動力檢測 根據文獻配制灌胃用黑色營養性半固體糊〔6〕：取羧甲基纖維素鈉5 g、糖4 g、奶粉8 g、淀粉4 g、碳素墨水2 ml依次加入150 ml蒸餾水中，攪拌均勻。以1 ml/100 g灌胃，20 min后，麻醉，采血。然后充分打開腹腔，結扎胃噴門和幽門，取出胃，用濾紙吸干后稱取胃總重。接著沿胃大彎剪開，除去胃內容物并清洗，用濾紙吸干后，稱取胃凈重。胃殘留率計算：〔(胃總重-胃凈重)/營養性半固體糊量〕×100%。

1.5.4腸動力檢測 在操作完1.5.3部分后，取出小腸，自然平直地置于白紙上，測量小腸總長(L總)，并觀察小腸著色部分長度(L色)。腸推進度計算：(L色/L總)×100%。

1.6統計學處理 采用SPSS21.0統計學軟件進行t檢驗、單因素方差分析、秩和檢驗。

2 結 果

2.1體重變化比較 各組大鼠造模前體重比較均無統計學差異。造模干預21 d后，各組大鼠的體重均有不同程度的增加。造模后，PPS組大鼠顯著高于假手術組(P<0.01)；PPS肝郁組顯著低于PPS組(P<0.01)；柴胡疏肝散組較PPS肝郁組有所增加，但差無統計學意義。在體重增長率上，PPS組顯著高于假手術組(P<0.01)；PPS肝郁組顯著低于PPS組(P<0.01)；柴胡疏肝散組顯著高于PPS肝郁組(P<0.01)。見表1。

2.2飼料消耗變化 造模前，各組單位體重消耗的飼料較為相近。造模后，各組間飼料消耗量均有增加。PPS組高于假手術組，PPS肝郁組低于PPS組；柴胡疏肝散組高于PPS肝郁組。見表2。

2.3胃殘留率 PPS肝郁組胃殘留率顯著高于假手術組和PPS組(P<0.01)；柴胡疏肝散組顯著低于PPS肝郁組(P<0.01)。見表3。

2.4腸推進率 PPS肝郁組顯著低于假手術組和PPS組(P<0.01)；柴胡疏肝散組顯著高于PPS肝郁組(P<0.01)。見表3。

表1 大鼠造模前后體重及體重增長率情況

與假手術組比較：1)P<0.01；與PPS組比較；2)P<0.01；與PPS肝郁組比較：3)P<0.01，下表同

表2 大鼠飼料消耗(mg/g,n=6)

表3 大鼠胃腸動力檢測

3 討 論

在體重方面，相比較與假手術組，去除卵巢的PPS組大鼠的體重增長率顯著升高，這與可能與雌激素的降低有關。肝郁會影響體重的增長率，用柴胡疏肝散對證用藥后，體重增長率得到恢復。

在飼料消耗方面，PPS組大鼠的飼料消耗要高出其他組別，PPS肝郁狀態的大鼠飼料消耗，會顯著減少，在對證用藥后，飼料消耗增加。提示肝郁可能會影響飲食消耗量，這與臨床研究相似〔15〕。大鼠體重的增長與飼料消耗量之間存在一定的聯系，飼料消耗量的降低，從而使體重增長率也隨之降低。

在胃腸動力方面，PPS肝郁大鼠的胃排空率和腸推進率均出現下降，通過對證用藥后，得到不同程度的恢復。提示肝郁引起的氣機停滯郁結可能會影響胃腸二腑的通降功能，進而累及脾胃受納運化。

綜上，PPS肝郁大鼠的體重和飼料消耗量發生了改變，體重的增長與飼料的消耗量存在一定的聯系，且與大鼠胃腸動力有關。從“木不疏土”角度提示其機制可能是肝郁狀態影響到了脾胃功能的正常運行，為后續研究及進一步闡釋機制提供依據。