HSP90 和PLK1 在腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)及其臨床意義

趙偉

（新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院 新疆 烏魯木齊 830000）

腦膠質(zhì)瘤是臨床中最為常見的一種顱內(nèi)腫瘤，多呈浸潤性生長，不僅治療難度大，而且患者預(yù)后較差，嚴(yán)重影響人們身心健康[1]。近年來，隨著分子檢測手段的不斷發(fā)展進(jìn)步，惡性腫瘤相關(guān)基因表達(dá)情況已經(jīng)成為臨床研究的一個熱點。研究顯示[2]，熱休克蛋白90（HSP90）在多種惡性腫瘤中均呈高表達(dá)，參與了惡性腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程。Polo 樣激酶1（PLK1）為細(xì)胞周期調(diào)控基因，在結(jié)腸癌等惡性腫瘤發(fā)生及發(fā)展中起到了重要作用[3]。本文分析了HSP90 和PLK1 在腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)及其臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取醫(yī)院2019 年1 月—2020 年4 月接受手術(shù)治療的腦膠質(zhì)瘤患者47 例，手術(shù)切除患者腦膠質(zhì)瘤組織作為腦膠質(zhì)瘤組，另選取同時期47 例腦外傷手術(shù)患者健康腦組織作為對照組。詳細(xì)收集患者的基線資料，主要包括年齡、性別、病理學(xué)類型、浸潤深度等一般資料。47 例患者中，男性28 例，女性19 例；年齡43～69 歲，平均年齡（56.09±7.46）歲。

1.2 方法

1.2.1 HSP90 和PLK1 蛋白檢測 取甲醛溶液固定腦膠質(zhì)瘤組織和健康腦組織，開展石蠟包埋和連續(xù)切片（厚度4m），再實施常規(guī)二甲苯脫蠟和梯度酒精脫水處理，用3%過氧化氫封閉處理內(nèi)源性過氧化物酶，并對標(biāo)本實施常規(guī)脫蠟，再開展微波抗原修復(fù)，于10%山羊血清封閉組織內(nèi)加入非特異性抗原開展操作，并加入適量兔抗人HSP90 和PLK1 抗體，抗體均購自南京福麥斯生物科技有限公司，在4℃的冰箱內(nèi)孵育24h，用PBS 緩沖溶液替代一抗作陰性對照；同時，于次日滴加適量的羊抗兔二抗（HSP90和PLK1 蛋白二抗均經(jīng)生物素標(biāo)記），實施SP（免疫組化）染色及DAB 顯色，用蘇木素實施復(fù)染，選擇中性樹脂封片，于顯微鏡下觀察，將已知的腦膠質(zhì)瘤陽性切片視作陽性對照。

1.2.2 結(jié)果判讀 通過半定量積分法實施結(jié)果判定：①按每張切片內(nèi)細(xì)胞染色強(qiáng)度進(jìn)行評分，無顯色記0 分，淺黃色染色記1 分，棕黃色染色記2 分，棕褐色染色記3 分。②按組織切片內(nèi)陽性染色細(xì)胞數(shù)和總腫瘤細(xì)胞數(shù)的比值實施評分，若0 分：比值≤5%，1 分：＞5%并≤25%，2 分：＞25%并≤50%，3 分：＞50%并≤75%，4 分：比值＞75%。將上述兩項評分相乘獲取總評分，總評分為0 分代表陰性（-），1-12 分代表陽性。

1.2.3 浸潤程度判斷 取腦膠質(zhì)瘤瘤周水腫區(qū)標(biāo)本進(jìn)行病理檢查，常規(guī)處理后進(jìn)行HE 染色，于高倍鏡頭下隨機(jī)選取5 個視野進(jìn)行腫瘤細(xì)胞計數(shù)，計算腫瘤細(xì)胞占正常細(xì)胞額百分比，其中無腫瘤細(xì)胞為無浸潤，腫瘤細(xì)胞＜20%為輕度浸潤，20%～40%為中度浸潤，＞40%為重度浸潤[4]。

1.2.4 瘤周水腫程度 根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科會2009 年專家共識征求意見稿的中標(biāo)準(zhǔn)，采用水腫指數(shù)對瘤周水腫進(jìn)行分級，分為無水腫、輕度水腫、中度水腫以及重度水腫[5]，見圖1。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 兩組HSP90 和PLK1 陽性表達(dá)水平比較

腦膠質(zhì)瘤組HSP90 和PLK1 陽性率顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2～3、表1。

圖2 Ⅰ級～Ⅳ級的腦膠質(zhì)瘤HE 染色（標(biāo)尺為50μm）

圖3 A：HSP90 在正常腦組織中的表達(dá)；B：HSP90 在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)；C：PLK1 在正常腦組織中的表達(dá)；D：PLK1 在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)（SP×400）

圖1：A 無水腫；B 輕度水腫；C 中度水腫；D 重度水腫

表1 兩組HSP90 和PLK1 陽性表達(dá)水平比較[n（%）]

2.2 腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征與HSP90 和PLK1 表達(dá)的關(guān)系

HSP90、PLK1 在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與年齡、性別、病理學(xué)類型無關(guān)（P＞0.05），與瘤周水腫、病理分級、組織分化程度以及浸潤深度相關(guān)（P＜0.05），見表2。

表2 腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征與HSP90 和PLK1 表達(dá)的關(guān)系[n（%）]

3.討論

目前，對于腦膠質(zhì)瘤患者雖然給予手術(shù)以及化療等綜合治療，但是患者預(yù)后依然不滿意，因而深入分析腦膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制，對該病早期診斷以及改善患者預(yù)后具有重要意義。PLK1 是一種在真核細(xì)胞中廣泛存在的高度保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶，參與了多種細(xì)胞周期性事件，在促進(jìn)細(xì)胞增殖方面如胞質(zhì)分離以及紡錘體形成等起到重要作用；PLK1 對細(xì)胞分裂進(jìn)行精確調(diào)節(jié)的同時，對維持基因組穩(wěn)定、紡錘體組裝和DNA 損傷反應(yīng)至關(guān)重要[6]。研究指出[7]，PLK1 過度表達(dá)出現(xiàn)在多種癌細(xì)胞中,并且與癌癥預(yù)后不良相關(guān)；此外，PLK1 過表達(dá)與癌癥侵襲和轉(zhuǎn)移也存在關(guān)系。

熱休克蛋白又名應(yīng)激蛋白，是機(jī)體受到外界不利因素刺激后，迅速合成表達(dá)的一類蛋白。HSP 家族成員有6 類，根據(jù)分子量的不同分為HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40 以及小分子熱休克蛋白。作為一類糖蛋白，HSP 在遺傳上高度保守,不同種屬的同種HSP 的核苷酸序列和氨基酸序列具有高度的同源性。在細(xì)胞中，HSP 最主要的作用之一是作為分子伴侶參與新合成蛋白的正確折疊、幫助受到壓力作用后被破壞的蛋白質(zhì)的重新復(fù)性、維持蛋白質(zhì)的構(gòu)象和穩(wěn)定等[8]。隨著對腫瘤發(fā)生發(fā)展分子機(jī)制研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)HSP90 由于對腫瘤癌變過程中多條信號通路中的蛋白質(zhì)起重要調(diào)節(jié)作用。

研究顯示，在多種惡性腫瘤中PLK1、HSP90 均表現(xiàn)為異常表達(dá)狀態(tài)，而抑制HSP90、PLK1 活性可以降低腫瘤細(xì)胞的增殖以及遷移活性[9,10]。本文結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤組HSP90 和PLK1 陽性率顯著高于對照組，表明HSP90 和PLK1 在腦膠質(zhì)瘤中均呈高表達(dá)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，HSP90、PLK1 在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)與瘤周水腫、病理分級、組織分化程度以及浸潤深度相關(guān)，瘤周水腫、病理分級、組織分化程度越高，浸潤深度越深，HSP90、PLK1 陽性率越高。研究結(jié)果提示，HSP90 和PLK1 與腦膠質(zhì)瘤患者病情進(jìn)展密切相關(guān)，可作為評估腦膠質(zhì)瘤患者病情進(jìn)展的重要指標(biāo)。

綜上所述，HSP90 和PLK1 在腦膠質(zhì)瘤中均呈高表達(dá)，且與病情進(jìn)展密切相關(guān)。在隨后的研究中還需要擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步深入研究，以明確HSP90、PLK1 蛋白的作用機(jī)制及其對腦膠質(zhì)瘤患者遠(yuǎn)期預(yù)后的影響。