HSP90 和PLK1 在腦膠質瘤的表達及其臨床意義

趙偉

（新疆維吾爾自治區人民醫院 新疆 烏魯木齊 830000）

腦膠質瘤是臨床中最為常見的一種顱內腫瘤，多呈浸潤性生長，不僅治療難度大，而且患者預后較差，嚴重影響人們身心健康[1]。近年來，隨著分子檢測手段的不斷發展進步，惡性腫瘤相關基因表達情況已經成為臨床研究的一個熱點。研究顯示[2]，熱休克蛋白90（HSP90）在多種惡性腫瘤中均呈高表達，參與了惡性腫瘤發生及發展過程。Polo 樣激酶1（PLK1）為細胞周期調控基因，在結腸癌等惡性腫瘤發生及發展中起到了重要作用[3]。本文分析了HSP90 和PLK1 在腦膠質瘤的表達及其臨床意義，現將結果報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取醫院2019 年1 月—2020 年4 月接受手術治療的腦膠質瘤患者47 例，手術切除患者腦膠質瘤組織作為腦膠質瘤組，另選取同時期47 例腦外傷手術患者健康腦組織作為對照組。詳細收集患者的基線資料，主要包括年齡、性別、病理學類型、浸潤深度等一般資料。47 例患者中，男性28 例，女性19 例；年齡43～69 歲，平均年齡（56.09±7.46）歲。

1.2 方法

1.2.1 HSP90 和PLK1 蛋白檢測 取甲醛溶液固定腦膠質瘤組織和健康腦組織，開展石蠟包埋和連續切片（厚度4m），再實施常規二甲苯脫蠟和梯度酒精脫水處理，用3%過氧化氫封閉處理內源性過氧化物酶，并對標本實施常規脫蠟，再開展微波抗原修復，于10%山羊血清封閉組織內加入非特異性抗原開展操作，并加入適量兔抗人HSP90 和PLK1 抗體，抗體均購自南京福麥斯生物科技有限公司，在4℃的冰箱內孵育24h，用PBS 緩沖溶液替代一抗作陰性對照；同時，于次日滴加適量的羊抗兔二抗（HSP90和PLK1 蛋白二抗均經生物素標記），實施SP（免疫組化）染色及DAB 顯色，用蘇木素實施復染，選擇中性樹脂封片，于顯微鏡下觀察，將已知的腦膠質瘤陽性切片視作陽性對照。

1.2.2 結果判讀 通過半定量積分法實施結果判定：①按每張切片內細胞染色強度進行評分，無顯色記0 分，淺黃色染色記1 分，棕黃色染色記2 分，棕褐色染色記3 分。②按組織切片內陽性染色細胞數和總腫瘤細胞數的比值實施評分，若0 分：比值≤5%，1 分：＞5%并≤25%，2 分：＞25%并≤50%，3 分：＞50%并≤75%，4 分：比值＞75%。將上述兩項評分相乘獲取總評分，總評分為0 分代表陰性（-），1-12 分代表陽性。

1.2.3 浸潤程度判斷 取腦膠質瘤瘤周水腫區標本進行病理檢查，常規處理后進行HE 染色，于高倍鏡頭下隨機選取5 個視野進行腫瘤細胞計數，計算腫瘤細胞占正常細胞額百分比，其中無腫瘤細胞為無浸潤，腫瘤細胞＜20%為輕度浸潤，20%～40%為中度浸潤，＞40%為重度浸潤[4]。

1.2.4 瘤周水腫程度 根據中華醫學會神經外科會2009 年專家共識征求意見稿的中標準，采用水腫指數對瘤周水腫進行分級，分為無水腫、輕度水腫、中度水腫以及重度水腫[5]，見圖1。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 統計軟件對數據進行處理，計數資料用百分數（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 兩組HSP90 和PLK1 陽性表達水平比較

腦膠質瘤組HSP90 和PLK1 陽性率顯著高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見圖2～3、表1。

圖2 Ⅰ級～Ⅳ級的腦膠質瘤HE 染色（標尺為50μm）

圖3 A：HSP90 在正常腦組織中的表達；B：HSP90 在腦膠質瘤組織中的表達；C：PLK1 在正常腦組織中的表達；D：PLK1 在腦膠質瘤組織中的表達（SP×400）

圖1：A 無水腫；B 輕度水腫；C 中度水腫；D 重度水腫

表1 兩組HSP90 和PLK1 陽性表達水平比較[n（%）]

2.2 腦膠質瘤患者臨床病理特征與HSP90 和PLK1 表達的關系

HSP90、PLK1 在腦膠質瘤組織中的表達與年齡、性別、病理學類型無關（P＞0.05），與瘤周水腫、病理分級、組織分化程度以及浸潤深度相關（P＜0.05），見表2。

表2 腦膠質瘤患者臨床病理特征與HSP90 和PLK1 表達的關系[n（%）]

3.討論

目前，對于腦膠質瘤患者雖然給予手術以及化療等綜合治療，但是患者預后依然不滿意，因而深入分析腦膠質瘤發病機制，對該病早期診斷以及改善患者預后具有重要意義。PLK1 是一種在真核細胞中廣泛存在的高度保守的絲氨酸/蘇氨酸激酶，參與了多種細胞周期性事件，在促進細胞增殖方面如胞質分離以及紡錘體形成等起到重要作用；PLK1 對細胞分裂進行精確調節的同時，對維持基因組穩定、紡錘體組裝和DNA 損傷反應至關重要[6]。研究指出[7]，PLK1 過度表達出現在多種癌細胞中,并且與癌癥預后不良相關；此外，PLK1 過表達與癌癥侵襲和轉移也存在關系。

熱休克蛋白又名應激蛋白，是機體受到外界不利因素刺激后，迅速合成表達的一類蛋白。HSP 家族成員有6 類，根據分子量的不同分為HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40 以及小分子熱休克蛋白。作為一類糖蛋白，HSP 在遺傳上高度保守,不同種屬的同種HSP 的核苷酸序列和氨基酸序列具有高度的同源性。在細胞中，HSP 最主要的作用之一是作為分子伴侶參與新合成蛋白的正確折疊、幫助受到壓力作用后被破壞的蛋白質的重新復性、維持蛋白質的構象和穩定等[8]。隨著對腫瘤發生發展分子機制研究的深入，人們發現HSP90 由于對腫瘤癌變過程中多條信號通路中的蛋白質起重要調節作用。

研究顯示，在多種惡性腫瘤中PLK1、HSP90 均表現為異常表達狀態，而抑制HSP90、PLK1 活性可以降低腫瘤細胞的增殖以及遷移活性[9,10]。本文結果顯示，腦膠質瘤組HSP90 和PLK1 陽性率顯著高于對照組，表明HSP90 和PLK1 在腦膠質瘤中均呈高表達。進一步分析發現，HSP90、PLK1 在腦膠質瘤組織中的表達與瘤周水腫、病理分級、組織分化程度以及浸潤深度相關，瘤周水腫、病理分級、組織分化程度越高，浸潤深度越深，HSP90、PLK1 陽性率越高。研究結果提示，HSP90 和PLK1 與腦膠質瘤患者病情進展密切相關，可作為評估腦膠質瘤患者病情進展的重要指標。

綜上所述，HSP90 和PLK1 在腦膠質瘤中均呈高表達，且與病情進展密切相關。在隨后的研究中還需要擴大樣本量，進一步深入研究，以明確HSP90、PLK1 蛋白的作用機制及其對腦膠質瘤患者遠期預后的影響。