miR-15a與miR-16-1在前列腺癌患者血清中的表達(dá)及意義

楊登科，錢海寧，方 震

上海市同仁醫(yī)院泌尿外科,上海 200336

前列腺癌是指發(fā)生在前列腺的上皮惡性腫瘤，以腺癌最為常見。近年來，前列腺癌的發(fā)病率逐漸升高，高發(fā)年齡為70～80歲[1]。前列腺癌早期無明顯癥狀，隨著疾病的發(fā)展，增大的前列腺腺體會(huì)壓迫尿道表現(xiàn)出尿頻、尿急、尿失禁、夜尿增多，尿線細(xì)、尿流緩慢、排尿不盡等癥狀，還可壓迫直腸引起腸梗阻及排便困難；嚴(yán)重者可壓迫神經(jīng)，引起會(huì)陰部疼痛；甚至侵及精囊、膀胱，出現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移，引起血尿、骨痛及病理性骨折等。嚴(yán)重影響患者日常生活與健康[2]。對早期前列腺癌患者采用放射性粒子植入、根治性前列腺切除術(shù)及根治性外放射療法治療效果佳，但對晚期患者的治療效果并不理想。所以前列腺癌的早期診斷對于改善其預(yù)后至關(guān)重要，目前臨床上主要依靠直腸指診、前列腺超聲及盆腔MRI檢查等進(jìn)行前列腺癌的輔助診斷。近年來，前列腺癌的生物標(biāo)志物檢測也成為研究熱點(diǎn)。微小RNA-15a(miR-15a)與微小RNA-16-1(miR-16-1)在腫瘤細(xì)胞中存在高表達(dá)現(xiàn)象[3]，本研究對miR-15a與miR-16-1在前列腺癌患者血清中的表達(dá)及意義進(jìn)行了探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年5月至2018年6月本院收治的前列腺癌(前列腺癌組)、良性前列腺增生(良性前列腺增生組)患者及同期健康體檢者(健康組)各41例為研究對象。前列腺癌組年齡45～76歲，平均(68.56±8.21)歲；良性前列腺增生組年齡44～73歲，平均(68.03±8.63)歲；健康組年齡46～74歲，平均(68.85±8.52)歲。前列腺癌組及良性前列腺增生組患者納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)臨床病理活檢確診[4]；(2)患者此前未進(jìn)行任何治療；(3)病情穩(wěn)定；(4)臨床資料完整；(5)患者或家屬同意加入本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并心肝腎等重要臟器功能障礙者；(2)合并免疫性、傳染性或急性疾病者。3組研究對象年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 (1)采集患者清晨空腹靜脈血5 mL，室溫下靜置30 min，3 000 r/min離心10 min，收集上清液，于-80 ℃中保存。(2)采用Trizol法提取血清總RNA，加入無水乙醇洗滌，再加入10～50 μL DEPC水溶解，采用核酸純度分析儀分析RNA純度，A值為1.8～2.0，根據(jù)DU-730計(jì)算RNA水平。(3)檢測miR-15a和miR-16-1水平。反轉(zhuǎn)錄采用Tap ManReverseTranscription Kit試劑盒(批號：20071223)，所得反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA使用熒光定量試劑盒SYBR Premix Ex TaqTM(批號：20050901) 和Step One Plus實(shí)時(shí)熒光定量PCR測試儀進(jìn)行miR-15a和miR-16-1擴(kuò)增。每例標(biāo)本重復(fù)檢測3次，采用ABI7300記錄Ct值，以U6為內(nèi)參，根據(jù)N= 2-ΔΔCt計(jì)算相對表達(dá)水平。

1.3觀察指標(biāo) 比較3組血清miR-15a和miR-16-1水平；分析前列腺癌組血清miR-15a和miR-16-1表達(dá)水平與患者年齡、Gleason評分、病理分期、血清前列腺特異性抗原(PSA)間的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.13組血清miR-15a和miR-16-1表達(dá)水平比較 3組血清miR-15a和miR-16-1表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中前列腺癌組血清miR-15a與miR-16-1表達(dá)水平低于良性前列腺增生組和健康組(P<0.05)；良性前列腺增生組血清miR-15a與miR-16-1表達(dá)水平低于健康組(P<0.05)。見表1。

表1 3組血清miR-15a和miR-16-1表達(dá)水平比較

注：與健康組比較，*P<0.05;與良性前列腺增生組比較，#P<0.05。

2.2前列腺癌組血清miR-15a和miR-16-1表達(dá)水平與各臨床指標(biāo)的關(guān)系 前列腺癌組血清miR-15a和miR-16-1的表達(dá)水平與患者年齡及血清PSA水平無關(guān)(P>0.05)，與患者Gleason評分及病理分期有關(guān)(P<0.05)。見表2、3。

表2 前列腺癌組血清miR-15a表達(dá)水平與各臨床指標(biāo)的關(guān)系

表3 前列腺癌組血清miR-16-1表達(dá)水平與各臨床指標(biāo)的關(guān)系

續(xù)表3 前列腺癌組血清miR-16-1表達(dá)水平與各臨床指標(biāo)的關(guān)系

3 討 論

前列腺癌是發(fā)生于前列腺體的惡性腫瘤，在中老年男性中發(fā)病率較高，在危及患者健康的同時(shí)，也為其家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[5]。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，臨床對前列腺癌發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，血清微小RNA(miRNA)檢測因具有特異性高、性能好等優(yōu)點(diǎn)，正逐漸被臨床應(yīng)用于前列腺腫瘤檢測[6]。miRNA在免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)、造血細(xì)胞分化發(fā)育及腫瘤發(fā)生等方面有重要作用，其參與了機(jī)體生長、發(fā)育及疾病發(fā)展過程中有關(guān)基因的表達(dá)。既往研究顯示，miRNA的異常表達(dá)參與了多種疾病(如腫瘤)的發(fā)生和發(fā)展，不同疾病類型患者miRNA的表達(dá)譜不同[7]。因此，根據(jù)miRNA表達(dá)譜在腫瘤患者與健康人群的血清或血漿中的水平差異，可以有效識(shí)別機(jī)體異常，為臨床診斷與治療提供一定的參考。

有研究發(fā)現(xiàn)，miR-15a和miR-16-1具有明顯的抑癌基因特點(diǎn)，能夠抑制前列腺癌細(xì)胞的分化增殖、減少遷移和侵襲、促進(jìn)凋亡、阻滯細(xì)胞周期及降低貼壁的非依賴性生長[8]。本研究結(jié)果顯示，3組研究對象血清miR-15a與miR-16-1表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中前列腺癌組患者miR-15a與miR-16-1表達(dá)水平最低，良性前列腺增生組次之，健康組最高，說明miR-15a與miR-16-1表達(dá)水平在前列腺癌患者的血清中明顯下降；且血清miR-15和miR-16-1的表達(dá)水平與前列腺癌患者年齡及血清PSA無關(guān)(P>0.05)，與患者Gleason評分及病理分期有關(guān)(P<0.05)，說明miR-15a和miR-16-1與血清PSA之間存在獨(dú)立關(guān)系，而隨著前列腺癌病理分期和組織學(xué)分級的增加，miR-15a和miR-16-1的表達(dá)水平有下降趨勢，提示miR-15a和miR-16-1表達(dá)水平與疾病的發(fā)展有關(guān)，推測可能與其參與了抑癌基因的發(fā)育相關(guān)。

綜上所述，miR-15a與miR-16-1在前列腺癌患者血清中的表達(dá)水平明顯降低，且與腫瘤的病理分期和組織學(xué)分級有關(guān)，可為前列腺癌病情監(jiān)測、后續(xù)的病理研究及疾病治療等提供參考依據(jù)。