黑木耳中五氯硝基苯和氯氰菊酯農藥殘留檢驗結果滿意的關鍵分析

曾永明 凌經昌 陳松武 周麗珠 羅玉芬 谷瑤

【摘 要】文章對保證農產品農藥殘留能力驗證實驗的關鍵要素進行分析，結果表明：提取步驟的濾心分離時間要嚴格控制在5 min以上，濃縮步驟的水浴溫度要嚴格按照方法要求的溫度，氮吹切記不要吹得太干，要在氮吹儀旁邊實時觀察，吹到潮乎乎為宜，SPE小柱的活化平衡要充分，上樣時液面不能流干，上樣后盡可能流干再洗脫，最后定容2 mL時要準確;檢測結束后，對結果進行驗證很重要，采用盲樣的空白基質加標畫標準曲線的辦法判斷結果的準確性，得出真值，上報能力驗證結果，一個月后有Z值反饋，結果為滿意。

【關鍵詞】能力驗證;前處理;凈化;基質加標

【中圖分類號】S7 【文獻標識碼】A 【文章編號】1674-0688（2020）12-0061-03

實驗室能力驗證是指認可機構為確保實驗室維持較高的校準和檢測水平而對其能力進行考核、監督和確認的一種活動，對于提升實驗室檢測能力有重要的意義，是評價實驗室檢測結果真實水平的有效手段，也是實驗室質量管理體系持續改進和不斷提高的有效措施。

本文就如何保證農產品農藥殘留能力驗證實驗結果滿意的關鍵點進行探討和分析。能力驗證的項目多是蔬菜中農藥殘留的檢測[1]，一般采用固相微萃取技術-氣相色譜法進行檢測[2-12]，為了保證黑木耳作為安全、營養、保健的食用林產品[3]，要想通過農產品黑木耳中五氯硝基苯和氯氰菊酯農藥殘留的能力驗證，保證能力驗證的結果值滿意，樣品前處理有幾點要注意：提取步驟的濾心分離時間要嚴格控制在5 min以上，濃縮步驟的水浴溫度要嚴格按照方法要求的溫度，氮吹切記不要吹得太干，要在氮吹儀旁邊實時觀察，吹到潮乎乎為宜，SPE小柱的活化平衡要充分，上樣時液面不能流干，上樣后盡可能流干再洗脫，最后定容2 mL要準確。檢測結束后，對結果進行驗證，采用盲樣的空白基質加標畫標準曲線的辦法，分析判斷結果的準確性，得出真值，上報能力驗證結果。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器與設備

MS 3 basis旋渦混合器（IKA儀器有限公司），TD5A-WS離心機（湘儀離心機儀器有限公司），VM24固相萃取裝置（博納艾杰爾科技有限公司），WNV-10G氮吹儀（博納艾杰爾科技有限公司），GC-2010Plus氣相色譜儀（日本島津公司），配備電子捕獲ECD檢測器，色譜柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm毛細色譜柱）。

1.1.2 試劑與材料

正己烷（色譜純）、丙酮（色譜純）、氯化鈉（分析純）（140 ℃烘烤4 h）、無水硫酸鈉（分析純，650 ℃灼燒4 h）。凈化小柱用安譜公司的CNWBOND Florisil 1 g、6 mL的弗羅里析柱。2種加標農藥標準品：五氯硝基苯（Pentachloronitrobenzene）、氯氰菊酯（Cypermethrin）購于農業部環境保護科學監測研究所，濃度均為100μg/mL。

1.2 實驗方法

采用丙酮和正己烷提取試樣中的五氯硝基苯和氯氰菊酯農藥，提取溶液經濾心、濃縮、凈化、再濃縮，最后用正己烷定容，用氣相色譜儀的電子捕獲檢測器（ECD）進行檢測。用外標法進行定性和定量[1]。

1.3 混合標準工作溶液的配置

根據甲基對硫磷和水胺硫磷的標準物質證書的定值含量進行配置，先確定甲基對硫磷和水胺硫磷標準溶液線性范圍，它會影響定量結果的準確性和線性系數。本實驗選擇4個濃度點，考核樣品的濃度最好在曲線的中點，以便定量準確。具體線性范圍根據檢測考核樣品粗篩濃度確定。

分別吸取上述農藥標準溶液100μL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋定容，配制成濃度為1μg/mL的混合工作標準溶液，保存在4 ℃的冰箱中。檢測時，通過稀釋配置共4個濃度點的混合標準工作溶液，隨考核樣品進行氣相色譜檢測。

1.4 色譜條件

毛細色譜柱：SH-Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;設定起始溫度：180 ℃保持8 min，以15 ℃/min的速度升到220 ℃，保持1 min，再以30 ℃/min的速度升至250 ℃，保持10 min;進樣體積：1μL;進樣口溫度：250 ℃，分流進樣，分流比為1∶50;檢測器溫度：280 ℃;氮氣流速：30 mL/min;柱流速：2 mL/min。

1.5 樣品的提取

本次能力驗證的樣品為已粉碎的干黑木耳樣品，由能力驗證組織機構加入五氯硝基苯和氯氰菊酯農藥，本實驗室收到1個黑木耳考核樣品及1個黑木耳空白樣品，樣品重量各約10 g。

分別稱取黑木耳考核樣品和黑木耳空白樣品各1.0 g于50 mL離心管中，加入9 mL蒸餾水復原至黑木耳鮮樣狀態，然后加入5.00 mL丙酮，渦旋1 min，加入15 mL正己烷和1～2 g氯化鈉，蓋上蓋子，MS 3 basis旋渦混合器上渦旋3 min，將離心管放入離心機，在4 000 r/min離心5 min，吸取上層清液到另一個50 mL離心管中;再加入10 mL正己烷，用MS3basis旋渦混合器重復渦旋提取3 min，同樣在4 000 r/min離心5 min，合并兩次提取液，在40 ℃水浴氮吹濃縮至2 mL，待凈化。

1.6 提取液的凈化和定容（見表1）

向SPE小柱（1g，6mL）中填充高約2 cm的無水硫酸鈉，放入VM24固相萃取裝置中進行固相萃取操作。在固相萃取柱中，以1.0 mL/min流速加入正己烷+丙酮（9+1）、體積為6.0 mL潤洗SPE小柱進行活化。以1.5 mL/min 流速加入待凈化樣品提取溶液于SEP小柱中進行凈化。洗脫：以1.5 mL/min 流速，依次用2.5mL正己烷+丙酮（9+1）進行洗脫，收集洗脫液。將收集的洗脫液在水浴40 ℃下氮吹濃縮至近干，用正己烷溶解定容為2.0 mL，過0.2μm濾膜，裝瓶待測。

1.7 上機檢測

進行氣相色譜上機檢測時，設置色譜柱溫為程序升溫：開始溫度設定為180 ℃，保持8 min，以15 ℃/min的速度升至220 ℃，保持1 min，再以30 ℃/min的速度升至250 ℃，保持10 min;進樣口溫度為250 ℃;檢測器（ECD）溫度為280 ℃;載氣（高純氮≥99.999%）流速為30 mL/min;采用分進樣，分流比為1∶50;進樣量為1μL。

用五氯硝基苯和氯氰菊酯配制成濃度各為50μg/L的混合標準溶液，進行色譜分析，保留時間依次為五氯硝基苯（Pentachloronitrobenzene）9.346 min、氯氰菊酯（Cypermethrin）28.055 min（如圖1所示）。

2 檢測結果與數據分析

2.1 檢測結果

五氯硝基苯農藥標準曲線如圖2所示。氯氰菊酯農藥標準曲線如圖3所示。黑木耳考核樣品分析結果見表2。

2.2 判斷結果準確性

當上述結果出來后，需要驗證這些結果的準確性，通常會采用加標回收率的辦法，蔬菜中農藥殘留多有基質效應，有可能得出的數據比實際加標量要大得多，本實驗采用空白基質做加標標準曲線驗證。

黑木耳空白基質樣約10 g，稱取1.0 g樣品后，還剩9 g左右，稱4個1.0 g黑木耳空白基質樣品，分別加入上文的標準工作溶液100、150、200、300μL，嚴格按照上文前處理方法重做一遍，得出空白基質加標標準曲線，再重新計算檢測結果。

2.3 上報結果并通過

根據以上空白基質加標標準曲線計算檢測結果，分析判斷結果在合格范圍內，上報能力驗證結果：五氯硝基苯含量為0.10（mg/kg），氯氰菊酯含量為0.79（mg/kg）;1個月后有Z值反饋，結果為滿意。

3 討論

（1）要想通過黑木耳中農藥殘留的能力驗證，樣品前處理有幾點要注意：提取步驟的濾心分離時間要嚴格控制在5 min以上，濃縮步驟的水浴溫度要嚴格按照方法要求的溫度，氮吹切記不要吹得太干，要在氮吹儀旁邊實時觀察，吹到潮乎乎為宜，SPE小柱的活化平衡要充分，上樣時液面不能流干，上樣后盡可能流干再洗脫，最后定容2 mL要準確。

（2）試驗結束后，驗證結果很重要，不同的蔬菜有不同的農藥殘留，基質效應都不一樣，回收率也不一樣，要進行粗篩，首先得出農藥品的大概含量，然后選擇與盲樣品種一樣的蔬菜里加標，這時采用盲樣的空白基質加標畫標準曲線是最好的辦法。

（3）為防止待測液中五氯硝基苯和氯氰菊酯衰減，在前處理結束后樣品需及時上機檢測。上機測定順序：先測試劑空白和樣品空白，再由低濃度到高濃度依次測定標準溶液，然后加測一次試劑空白，最后測定考核樣品。每個樣品必須上機平行測定兩次，以便降低因儀器不穩定造成的誤差。結果取平均值，忌諱人為剔除平行性差的樣品結果。

（4）認真分析樣品檢測全過程及色譜圖、計算結果等，細致比較試劑空白和樣品空白基質的色譜圖，判別考核樣品中添加濃度含量低的農藥，防止出現漏判、誤判，確保本次能力驗證結果滿意。

參 考 文 獻

[1]NY/T 761—2008，蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定[S].

[2]GB/T 5009.146—2008，植物性食品中有機氯和擬除蟲菊酯類農藥多種殘留量的測定[S].

[3]GB/T 5009.19—2008，食品中有機氯農藥多組分殘留量的測定[S].

[4]何繼東.固相萃取-定量濃縮在蔬菜水果農藥殘留檢測中的應用[J].安徽農學通報，2016，22（1）：75-76.

[5]陸英洲，陸德勝.固相萃取-氣相色譜法檢測食品中農藥殘留方法的研究[J].中國衛生檢驗雜志，2011，21（9）：2185-2186.

[6]翟碩莉，張秀豐.固相萃取-氣相色譜法檢測桃中多種農藥殘留量[J].衡水學院學報，2018，20（1）：8-12.

[7]孟玲芝，劉坤，劉榮光，等.固相萃取技術在農藥殘留檢測中的應用[J].吉林農業，2018（12）：55.

[8]陳華鳳，陳霞，劉剛，等.固相萃取技術在茶葉農藥殘留檢測中的應用[J].四川農業科技，2018（6）：45-46.

[9]段麗村，周建于，李佳欣，等.固相萃取-氣相色譜法檢測血清中有機氯農藥殘留的研究[J].分析測試學報，2016，35（12）：1606-1610.

[10]曾永明，陳松武，周麗珠，等.固相萃取-氣相色譜法測定林業灌溉水中、滴滴涕殘留量[J].企業科技與發展，2019，455（9）：144-145.

[11]曾永明，秦榮秀，陳明江，等.食材型檸檬香茅6種有機磷農殘檢測結果分析[J].食品工業，2019，38（9）：301-303.

[12]曾永明，陳松武，羅玉芬，等.麻竹筍6種有機磷農殘檢測結果分析[J].企業科技與發展，2017，431（9）：54-56.

[13]梁明玉，羅先群，黃雪星.茶枝屑栽培黑木耳試驗初探[J].廣西林業科學，2019，48（3）：404-407.