外周血循環腫瘤細胞在結直腸癌中的研究進展

鐘慧　應學明　鄢少聰

【摘 要】結直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，在我國發病率位于第3位，死亡率居第4位。外周血循環腫瘤細胞（CTCs）的檢測作為近年來臨床研究的熱點，在評估治療癌癥的療效及判斷預后等方面有著巨大的潛力。本文就結直腸癌CTC檢測的臨床意義作一綜述。

【關鍵詞】結直腸癌;循環腫瘤細胞

【中圖分類號】R735.3【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）03-09--02

結直腸癌（colorectal cancer，CRC）是最常見的惡性腫瘤之一，在我國發病率僅次于肺癌和乳腺癌，死亡率居第4位。每年全球120萬新發病例中約6萬人死于CRC，20%～45%的患者出現術后復發或發生遠處轉移。

循環腫瘤細胞（Circulating tumor cells，CTCs）是痕量存在于外周血中的各類腫瘤細胞的的統稱。傳統的診斷手段聯合外周血循環腫瘤細胞（CTCs）檢測的綜合診斷可以提高臨床診療的敏感性，及早提示惡性風險及潛在轉移風險，輔助臨床醫師制訂更加合理的個體化診療方案。本文就CTCs的富集與分離、檢測技術及結直腸癌CTCs檢測的臨床意義進行綜述。

1 CTC的富集和分析

1.1 CTC的富集與分離 CTC在腫瘤患者的外周血中數量極少，每10mL的血液中僅有幾個至十幾個，需要先將外周血中的CTC進行分離和濃縮，以提高檢測的靈敏度。目前，CTC的富集和分離主要是根據物理學和免疫學特征將其從外周血細胞中篩選出來。

1.1.1 基于CTC的物理學特性 研究表明，腫瘤細胞的直徑與其他細胞不同，利用具有一定大小的濾過膜可以將直徑較大的CTC富集分離出來。基于外周血的各種細胞密度差異產生不同的細胞沉降系數，利用密度梯度離心法，將外周血中不同密度的細胞組分進行分離。不同細胞具有不同的電學特性，在電場中，這些細胞產生的電偶極距大小和方向存在差異，利用其受到的力學作用不同，將目的細胞分離出來。

1.1.2 基于CTC的免疫學特性 外周血腫瘤細胞免疫富集的方法是基于抗原抗體特異性結合的原理，分為正向富集和負向富集兩類。正向富集是針對CTC表面表達的特異性腫瘤細胞抗原利用帶有標記的外源性抗體與之結合，從而達到CTC的直接捕獲和富集。反之，負向富集的的靶點則是白細胞表面的抗原利用外源性抗體結合白細胞后，將白細胞篩除，從而達到去除背景血細胞而富集CTC的效果。

1.2 CTC的檢測與分析 CTC的檢測分析方法分兩大類：細胞計數法（包括免疫細胞化學法和流式細胞術等）和核酸檢測法（包括聚合酶鏈式反應和逆轉錄聚合酶鏈式反應等）。免疫細胞化學法以顯色劑標記的特異性抗體進行細胞原位抗原抗體反應和化學呈色反應，對相應腫瘤抗原可進行定性、定位和定量測定。流式細胞術是一項集激光、電子物理、細胞熒光化學及單克隆抗體等技術為一體的新型技術，定量計數腫瘤細胞。PCR技術檢測腫瘤患者外周血中的CTC是通過檢測血細胞中癌基因和抑癌基因的異常表達。RT-PCR技術是擴增由血細胞中表達的腫瘤特異性mRNA序列逆轉錄的DNA片段，從而分析腫瘤特異性mRNA的表達水平。目前在CTC的檢測中應用最為廣泛，被認為是目前檢測CTC最有效的方法之一。

2 CTC檢測與結直腸癌治療療效相關性研究進展

2.1 CTC檢測在結直腸癌輔助診斷中的意義 由于血液系統是腫瘤轉移的重要途徑，CTC的存在逐漸成為診斷惡性腫瘤的潛在標準。Sastre等研究針對97例結直腸癌患者和30名健康受試者進行CTC檢測，97例患者中CTC陽性患者34例（36.2%），未發現CTC陽性與原發灶位置、癌胚抗原水平增加、乳酸脫氫酶水平增加有相關性，但CTC陽性率與分期存在相關性（Ⅱ期為20.7%、Ⅲ期為24.1%、Ⅳ期為60.7%，P=0.005），研究表明CTC檢測對輔助診斷有重要的參考價值。

2.2 CTC在結直腸癌預后的判定價值 研究表明，CTC數目及治療前后CTC的變化情況對結直腸癌患者PFS和OS等預后信息有預測作用。De Albuquerque等研究根據CTC檢測結果，將患者分成CTC陽性和CTC陰性組，基線CTC陽性的患者相對于CTC陰性患者中位PFS明顯較短（181d vs.329d）。而且，發現動態監測CTC的變化與影像學結果存在顯著相關性，研究證實CTC檢測可以作為新的結直腸癌預后因子，用于監測結直腸癌患者治療，且CTC較影像學更早評估治療效果。

2.3 評價腫瘤治療效果和監測腫瘤復發 多項臨床試驗表明CTC的數量在接受有效化療或靶向藥物治療后顯著降低。目前，治療前基線CTC數目與影像學結果并沒有很好的對應關系，但是治療前后CTC的數量的變化與標準的療效評價體系有很好的對應關系。

3 總結與展望

大量研究證實，CTC與腫瘤復發和轉移密切相關，檢測CTC有助于腫瘤轉移的早期診斷、臨床分期、療效監測及預后判斷，并為腫瘤患者的個體化治療提供有價值的臨床指導。CTC作為結直腸癌獨立的預后因素，可反映循環腫瘤負荷及腫瘤的生物學特性。CTC的未來朝著單細胞組學發展，擺脫了腫瘤組織標本的限制，使非創傷性診斷、監測成為了可能，為結直腸癌的診斷、治療監測、預后評估等提供了簡便途徑。這也將有助于臨床醫師更深入地了解腫瘤轉移的生物學特性，動態實時地分析患者的腫瘤分子特征，為真正的個體化治療提供有價值的依據。