免疫印跡法檢測(cè)HIV 抗體條帶常見模式分析及在隨訪中的價(jià)值

王萬海 ，孟 真，楊若男，高 楠，王慶芳，張 磊，王梅芬，明 亮

（1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科 河南省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450052；2.鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系，河南 鄭州 450052）

2009年，我國醫(yī)療機(jī)構(gòu)實(shí)施了《醫(yī)療機(jī)構(gòu)醫(yī)務(wù)人員主動(dòng)提供HIV檢測(cè)與咨詢指南》。該指南要求醫(yī)療機(jī)構(gòu)主動(dòng)向就診者提供獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）檢測(cè)及咨詢服務(wù)。近幾年，醫(yī)療機(jī)構(gòu)人類免疫缺陷病毒（h u m a n immunodeficiency virus，HIV）檢測(cè)人次數(shù)明顯增多[1]，AIDS病例數(shù)也明顯增加[2-4]。大型綜合性醫(yī)院開展HIV確證試驗(yàn)勢(shì)在必行。目前，我國最常用的HIV血清學(xué)確證試驗(yàn)是免疫印跡法。這種確證試驗(yàn)具有很好的特異性，在檢測(cè)HIV感染時(shí)會(huì)出現(xiàn)不同的條帶情況[5]。本研究擬通過分析就診患者的HIV血清學(xué)確證試驗(yàn)數(shù)據(jù)，了解HIV感染者的免疫印跡法反應(yīng)條帶特征，為有效開展HIV檢測(cè)、監(jiān)測(cè)和預(yù)防工作提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

回顧分析2015年1月—2017年12月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診患者中免疫印跡法檢測(cè)HIV抗體為陽性的460例患者和結(jié)果為不確定的16例患者的資料。460例HIV抗體陽性者中男314例（68.26%）、女146例（31.74%），年齡1～86歲；婚姻狀況為已婚356例（77.39%）、未婚81例（17.61%）、喪偶15例（3.26%）、離婚8例（1.74%）。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 HIV（1+2）抗體篩查試劑盒[酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）]購自珠海麗珠試劑股份有限公司。HIV（1+2）抗體診斷試劑盒（膠體硒法）購自美國雅培公司。HIV抗體和抗原（p24）檢測(cè)試劑盒（電化學(xué)發(fā)光法）購自瑞士羅氏公司。HIV確證試劑為HIV-1/2抗體免疫印跡試劑盒，購自新加坡MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司。上述試劑均經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)，批批檢均合格，均在有效期內(nèi)使用。Multiskan MK3型酶標(biāo)儀和Wellwash洗板機(jī)購自賽默飛世爾（上海）儀器有限公司。cobas e602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀購自瑞士羅氏公司。

1.2.2 檢測(cè)流程 首先采用HIV（1+2）抗體篩查試劑盒對(duì)所有待測(cè)樣本進(jìn)行初篩檢測(cè)，各板均帶內(nèi)、外質(zhì)控血清，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作，嚴(yán)格遵守HIV篩查實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化程序。初篩陽性者再做雙孔復(fù)試（ELISA），同時(shí)采用膠體硒法進(jìn)行復(fù)檢，結(jié)果仍為陽性者或一陰一陽者進(jìn)行確證試驗(yàn)。采用HIV-1/2抗體免疫印跡試劑盒進(jìn)行HIV的確證檢測(cè)，按《全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》（2015年修訂版）并結(jié)合試劑盒說明書判定結(jié)果。對(duì)免疫印跡法首次檢測(cè)時(shí)有條帶出現(xiàn)，但不滿足HIV抗體陽性的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]的患者進(jìn)行隨訪。

2 結(jié)果

2.1 HIV抗體陽性免疫印跡法條帶分布

在3個(gè)基因編碼的3組HIV特異性抗體中，env基因編碼的包膜蛋白抗體gp160、gp120和gp41的檢出率分別為100.00%（460/460）、99.35%（457/460）和96.30%（443/460）；pol基因編碼的核酸內(nèi)切酶及聚合酶抗體p66、p51和p31的檢出率分別為92.61%（426/460）、86.96%（400/460）和91.96%（423/460）；gag基因編碼的核心蛋白抗體p55、p39、p24和p17的檢出率分別為56.30%（259/460）、13.26%（61/460）、100.00%（460/460）、87.17%（401/460）。HIV抗體免疫印跡法條帶圖譜見圖1。

2.2 HIV抗體陽性常見免疫印跡法條帶模式

圖1 免疫印跡法檢測(cè)HIV抗體的條帶圖譜

免疫印跡法檢測(cè)的HIV-1抗體條帶共有10條，分別為gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、p39、p31、p24和p17。共檢測(cè)到34種條帶模式，其中常見的條帶模式為：gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p39/p31/p24/p17[全條帶，占11.30%（52例）]、gp160/gp120/p66/ p55/p51/gp41/p31/p24/p17[p39缺失，占41.74%（192例）]、gp160/gp120/p66/p51/gp41/p31/p24/ p17[p55和p39缺失，占23.70%（109例）]、gp160/gp120/p66/p51/gp41/p31/p24[p55、p39和p17缺失，占5.65%（26例）]、gp160/gp120/p66/gp41/p31/p24/p17[p55、p51和p39缺失，占2.39%（11例）]。這5種模式合計(jì)占84.78%。其他條帶模式較少見，除5例為3條帶模式[gp160/gp120/p24（4例）、gp160/p24/p17（1例）]外，其他條帶模式均不少于4條條帶。見表2。

表2 HIV抗體陽性條帶模式

2.3 免疫印跡法不確定結(jié)果的隨訪

有16例患者的免疫印跡法結(jié)果為不確定，需進(jìn)行隨訪。共涉及8個(gè)首診科室，主要為感染內(nèi)科、血液內(nèi)科、呼吸內(nèi)科、泌尿外科和生殖醫(yī)學(xué)科等。隨訪間隔時(shí)間為1～6月，中位時(shí)間為2個(gè)月。采用免疫印跡法首次檢測(cè)時(shí)共出現(xiàn)6種條帶模式，分別為p24[10例（62.5%）]、gp120[2例（12.5%）]、gp160/p24[1例（6.2%）]、p66/p24[1例（6.2%）]、gp160[1例（6.2%）]、p66[1例（6.2%）]。隨訪發(fā)現(xiàn)有5例患者的檢測(cè)結(jié)果發(fā)生變化，其中4例符合HIV抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)，其特征主要為出現(xiàn)env基因編碼的包膜蛋白抗體條帶；另1例為p66/p24模式，隨訪時(shí)p66條帶消失，僅出現(xiàn)p24條帶。其他11例患者的條帶模式在隨訪期內(nèi)未見變化。見表3。

表3 免疫印跡法結(jié)果為不確定的16例患者隨訪期間HIV抗體條帶模式的變化

2.4 HIV抗體陽性者首診臨床科室分布

HIV抗體陽性者的首診科室主要為內(nèi)科的相關(guān)科室，占66.31%，其中感染內(nèi)科占29.35%（135/460）、呼吸內(nèi)科占17.61%（81/460）、神經(jīng)內(nèi)科占8.48%（39/460）、血液內(nèi)科占6.96%（32/460）、其他內(nèi)科（腎臟內(nèi)科、心血管內(nèi)科和內(nèi)分泌科）占3.91%（18/460）。另外，外科（骨科、甲狀腺外科、胸外科、泌尿外科和肝膽胰外科等）占10.43%（48/460），五官科及口腔科占7.61%（35/460），婦產(chǎn)科占6.52%（30/460），腫瘤科占3.70%（17/460），皮膚科占2.83%（13/460），兒科占2.61%（12/460）。

3 討論

AIDS是由HIV感染引起的慢性傳染病，是以免疫缺陷為主要特征的慢性綜合征[7]，其臨床表現(xiàn)特異性不強(qiáng)，臨床上需與其他病因引起的有類似癥狀的疾病相鑒別，而且已知自身感染HIV的患者就醫(yī)時(shí)不主動(dòng)告知的比例又較高[8]，易造成誤診、漏診，甚至造成醫(yī)院內(nèi)感染或醫(yī)護(hù)人員的職業(yè)暴露。HIV抗體檢測(cè)是目前HIV感染者和AIDS患者主要的診斷依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，HIV 3組基因編碼的特異性抗體檢出率中，抗env基因編碼的包膜蛋白抗體整體檢出率普遍較高（＞96%），其中最高為gp160，其次為gp120和gp41，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]。抗gag基因編碼的核心蛋白抗體檢出率差異較大，最高為p24，與gp160成對(duì)出現(xiàn)，其次為p17，p55和p39的檢出率較低，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]。抗pol基因編碼的核酸內(nèi)切酶和聚合酶抗體條帶檢出率大致相同，均超過86%。在免疫印跡法條帶模式中，最常見的條帶模式為gp160/gp120/p66/p55/p51/gp41/p31/p24/p17（p39缺失），占41.74%；其次為gp160/gp120/p66/p51/gp41/p31/p24/p17（p55和p39缺失），占23.70%；全條帶模式占11.30%。這3種常見模式占76.74%。有研究結(jié)果顯示，p39和p55條帶缺失與AIDS疾病進(jìn)展密切相關(guān)[11-12]。隨著HIV感染的進(jìn)展，AIDS的臨床癥狀及其并發(fā)癥的出現(xiàn)促使患者到醫(yī)院就診，這進(jìn)一步驗(yàn)證了上述條帶缺失與AIDS疾病進(jìn)展相關(guān)。

在16例HIV抗體免疫印跡法結(jié)果為不確定的隨訪者中，4例首次檢測(cè)含有HIV包膜蛋白抗體條帶的隨訪者在隨訪期間HIV抗體均轉(zhuǎn)為陽性，而首次檢測(cè)僅有p24條帶或p66條帶以及p66/p24條帶模式的12例隨訪者排除了HIV感染。這可能與p24抗原為非特異性抗原有關(guān)[13]。

AIDS是以免疫缺陷為主要特征的慢性傳染病，其無癥狀期長，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，加上患者“癥狀就醫(yī)”的觀念根深蒂固，因此本研究的HIV感染者首診科室涉及28個(gè)，涵蓋了醫(yī)院的絕大多數(shù)臨床科室，其中有66.31%的就診者首診科室為內(nèi)科相關(guān)科室，這與HIV感染者常見的并發(fā)癥為內(nèi)科系統(tǒng)疾病相一致[14]。

鑒于目前綜合性醫(yī)院已經(jīng)成為AIDS防治工作的主力，因此相關(guān)醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)重視HIV檢測(cè)，避免AIDS被誤診、漏診以及發(fā)生醫(yī)院內(nèi)感染或醫(yī)護(hù)人員的職業(yè)暴露，確保HIV感染的早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)、早治療。