探討乙肝病毒血清學檢驗中化學發光免疫分析技術和酶聯免疫吸附試驗的應用價值

王惠君，秦學瑾，潘倩

（中國人民解放軍陸軍第七十一集團軍醫院，江蘇 徐州）

0 引言

乙肝屬于常見的一種病毒性肝炎，主要是HBV（乙肝病毒）感染所致，具有極強的傳染性[1]。統計數據表明，我國目前高達9000 多萬人攜帶HBV，HBV 長期潛伏在人體內，部分攜帶HBV 者因體內HBV 被激活而成為乙型肝炎，若不能及時診斷、治療可能會繼續發展成肝衰竭、肝硬化、癌變等嚴重后果，構成生命威脅[2]。臨床上主張積極預防和治療乙肝，研究報道表明人類免疫系統對HBV 有特異性免疫反應，檢測和評估HBV、DNA 和HBV 血清學指標是診斷乙肝和評估預后的重要依據[3]。CLIA 及ELISA 是檢驗HBV 的常用方法，但關于兩種檢測方法對乙肝病毒血清學指標的檢驗價值存在爭議，尚未達成共識[4]。現就CLIA 及ELISA 在乙肝病毒血清學檢驗中的應用情況進行詳細分析，詳細報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018 年1 月至12 月我院檢驗接收的500 份乙肝病毒血清學檢驗標本為研究對象，其中男性221 例，女性279例；年齡20～81 歲，平均（51.8±2.2）歲。

1.2 研究方法

①采集標本：所有患者均空腹采用靜脈采血方式，抽取5 mL 血液，并在4 ℃、3000 r/min 條件下離心處理5 min，取上層清液待檢。②ELISA 試驗：室溫下將ELISA 檢驗試劑、微孔反應條（科華）放置0.5 h，再在微孔反應條內加入待測血清標本，以封片進行封鎖后置于37 ℃水浴箱內1 h，去除微孔反應條內液體，反復洗滌5 次，再在微孔反應條中加入試劑、封片封鎖，置于37 ℃水浴箱內0.5 h，最后加進終止液。若所得的血清值超過臨界值則為陽性。③CLIA 試驗：嚴格按照試劑盒操作說明書進行操作。④PCR 定量分析：以實時熒光分析儀及配套試劑按照說明書測定。

1.3 觀察指標

以熒光定量PCR 檢測技術為參照，對比CLIA、ELISA 法測定乙肝病毒血清學標志物的準確性、靈敏性及特異性。其中靈敏性=真陽性/（真陽性+假陰性），特異性=真陰性/（真陰性+假陽性），準確性=（真陽性+真陰性）/總例數。乙肝病毒血清學標志物包括乙肝病毒表面抗原、乙肝病毒表面抗體、乙肝病毒e 抗原、乙肝病毒e 抗體IgG、乙肝病毒核心抗體IgG 等，其正常值上限為1 index/mL、10 mIU/mL、15 index/mL、100 index/mL、100 index/mL，檢測結果高于正常值上限為陽性，在正常范圍內為陰性。

1.4 統計學方法

數據處理采用SPSS 17.0 統計學軟件，計量資料用均數±標準差（）表示，計數資料用率（%）表示，采用t 和χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

500 例患者PCR 測定乙肝病毒血清學標志物陽性362例、陰性138 例。兩種檢測方法對乙肝病毒血清學指標檢測準確率、靈敏性、特異性均無明顯差異（P＞0.05），見表1、表2。

表1 CLIA、ELISA 法測定結果與PCR 結果對比（n）

表2 兩種檢測方法的準確性、靈敏性及特異性對比（n, %）

3 討論

CLIA 和ELISA 是檢驗科常用的檢測方法，其中化學發光免疫檢測原理是：用酶標記物或化學發光物對抗體、抗原進行標記，發生免疫反應，再在復合物中置入化學發光劑或氧化劑來讓其發光，最后經儀器檢測發光強度，計算出待測標本濃度[5]。有機化合物是最常用的化學發光物，利用氧化反應使其發光[6]。上個世紀化學發光免疫檢測法就已用于臨床檢驗，但只是將其作為示蹤信號，且發光時間、靈敏度均較差[7]。隨著現代醫學快速發展，化學發光免疫檢測信號強度大幅度提升、發光時間顯著延長[8-9]。酶聯免疫吸附法檢驗快速、成本低，不會對患者產生危害，但其重復性不佳、靈敏性差，假陽性率及漏檢率均較高，加上酶純度極易受多種因素影響，使得其臨床檢驗價值受到一定限制[10-11]。本組對比發現CLIA、ELISA 檢測結果的準確性、靈敏性、特異性均較高，且二者差異并不明顯。與ELISA 相比，CLIA 操作更加簡單、實用性更強，在乙肝病毒檢測、梅毒螺旋體檢測、腫瘤標志物檢測及心臟疾病檢測中都具有極高的臨床應用價值。

綜上所述，CLIA 在乙肝病毒血清學檢測中的臨床應用價值極高，對疾病診斷、治療都具有重要指導意義，其應用前景廣闊，為了進一步擴大化學發光免疫檢測法的應用范圍和提高其檢測靈敏度，還有待進一步深入開發新型催化劑及發光物。