血清生長分化因子15和甲胎蛋白聯合檢測對HBV相關肝細胞癌的診斷價值

李 歡， 陳娟娟， 祝成亮， 張平安

武漢大學人民醫院 檢驗科， 武漢 430060

原發性肝癌簡稱肝癌，起源于肝臟的上皮或間葉組織，是全球第六大最常見的腫瘤，也是第三大最常見的癌癥相關死亡原因[1]，世界各地每年有70多萬人診斷為肝癌，其中很大一部分是肝細胞癌(HCC)。HBV感染是HCC主要的病因之一。早期診斷對改善HCC的治療和預后非常重要。生長分化因子(growth differentiation factor，GDF)15屬于TGFβ超家族成員，與腫瘤的轉移有著密切的關系[2]。在正常生理條件下，一般表達于胎盤和前列腺中，其他器官中不常見，但在炎癥和惡性腫瘤等病理狀態時，累及的組織及血液中GDF15表達顯著升高[3]。AFP是肝癌診斷最常用的血清標志物，但單一使用AFP診斷時靈敏度和特異度都不夠理想，本研究將探討GDF15和AFP聯合檢測對HBV相關HCC診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集2019年3月1日-2019年9月1日在本院就診的HBV相關HCC患者(HCC組)、慢性乙型肝炎(CHB)患者(CHB組)和健康體檢者(NC組)的臨床資料。納入標準：(1)所有HCC患者HBsAg均為陽性，HCC患者的診斷符合《原發性肝癌診療規范(2017年版)》[4]中的診斷標準；(2)HCC患者未接受過介入治療或化療等；(3)CHB患者診斷后尚未接受治療；(4)所有對象臨床資料完整。排除標準：(1)排除HBV外其他肝炎病毒或重疊感染；(2)排除HCC以外的其他惡性腫瘤；(3)排除甲狀腺功能亢進、嚴重心血管病、糖尿病等疾病；(4)排除妊娠婦女。本研究經武漢大學人民醫院醫學倫理學委員會批準(批號：2016K-C025)，且所納入對象均簽訂知情同意書。

1.2 檢測方法 采集所有研究對象空腹6～8 h后的靜脈血5 ml，以轉速3500 r/min(離心半徑=16 cm)離心5 min，分離血清-80 ℃備用。采用Siemens公司ADVIA CENTUAR XP全自動化學發光免疫分析儀及配套試劑盒檢測血清AFP 水平，參考區間為0～8.0 ng/ml；采用從R&D(Quantikine，R&D Systems，USA)購入的ELISA試劑盒(目錄號：DY957，DY008)檢測血清GDF15水平，參考檢測范圍為0～0.5 ng/ml。所有檢測均在試劑盒說明書規定的時間內完成，且嚴格遵守實驗相關操作規程。

2 結果

2.1 一般資料比較 共納入患者225例，其中HCC組97例，男56例，女41例；CHB組41例，男23例，女18例；NC組87例，男49例，女38例。三組研究對象在年齡(F=0.158，P=0.854)與性別分布(χ2=0.05，P=0.975)上的差異均無統計學意義(表1)。

2.2 GDF15和AFP檢測結果 HCC組的GDF15水平明顯高于CHB組和NC組(P值均<0.01)；HCC組和CHB組的AFP水平均顯著高于NC組，且HCC組AFP水平顯著高于CHB組，差異均有統計學意義(P值均<0.01)(表2)。

表2 各組GDF15和AFP水平比較

注：與NC組相比，1)P<0.01；與CHB組相比，2)P<0.01

2.3 ROC曲線分析GDF15和AFP單獨或聯合檢測診斷HCC的價值 采用二元logistic回歸分析得到兩種指標聯合的回歸模型，進一步繪制GDF15和AFP單獨或聯合檢測的ROC曲線(圖1)，分析結果見表3，GDF15聯合AFP的曲線下面積最大，為0.816，其次為GDF15(0.752)，AFP最低(0.660)。AFP的特異度最高，GDF15聯合AFP的靈敏度和約登指數最高。

表1 研究對象一般資料

表3 GDF15、AFP單獨及聯合檢測診斷HCC的ROC曲線分析結果

圖1GDF15、AFP單獨及聯合檢測診斷HCC的ROC曲線

3 討論

HCC診斷的腫瘤標志物較多，常見的有AFP、α-L-巖藻苷酶和癌胚抗原等[5]。單個標志物對診斷HCC的靈敏度和特異度往往不夠理想，而多指標聯合檢測可以明顯提高診斷效能[6-8]。本研究HCC組的GDF15和AFP水平均顯著高于CHB組和NC組，提示GDF15和AFP可能是HCC診斷的有效指標，且GDF15診斷HCC的曲線下面積大于0.7，高于AFP，說明GDF15對HCC的診斷效能優于AFP。

GDF15，又稱巨噬細胞抑制因子1，能抑制巨噬細胞產生TNFα，參與組織損傷或疾病時的感染、纖維化和凋亡途徑，在多種腫瘤中有高表達的現象，比如結直腸癌[9]、胃癌[10]等。目前，多項研究發現GDF15既可作為抑癌因子，也可作為致癌因子，與腫瘤類型相關。在膠質母細胞瘤細胞中，GDF15具有抗腫瘤活性[11]；在人結直腸細胞中，GDF15通過控制細胞凋亡而發揮抗腫瘤蛋白的作用[12]；而在口腔鱗狀細胞癌中，GDF15的表達與其惡性程度呈正相關，GDF15能促進腫瘤細胞的增殖和集落形成[13]；Wang等[14]的實驗數據證明GDF15能促進HepG 2細胞的存活、侵襲、遷移和血管生成，并認為GDF15可能是肝癌的危險因素，可作為肝癌診斷的血清標志物。本研究的數據顯示HCC組GDF15水平顯著高于CHB組和NC組，與Liu等[15]的研究結果一致。同時，ROC曲線分析顯示GDF15診斷HBV相關HCC的曲線下面積為0.752，靈敏度為74.0%，特異度為68.3%，在Liu等[15]研究中，GDF15診斷HCC的曲線下面積為0.843，靈敏度為86.8%，特異度為72.8%，較高于本文結果，可能是由于取樣和地域等原因，但這些均在一定程度上證實GDF15可作為HCC診斷的血清標志物。

AFP是最常見的HCC診斷血清標志物，主要由胎兒肝細胞及卵黃囊合成，血清正常含量<25 μg/L，當細胞癌變時，其水平會顯著升高[16]。本研究HCC組的AFP水平顯著高于CHB組和NC組，與理論基礎相符。但除了HCC，AFP在慢性肝炎、肝硬化等其他肝病中也有升高的現象，可能會導致漏診和誤診。在朱慧婧等[17]研究中AFP診斷HCC的靈敏度為58.57%，特異度為78.71%，與本研究結果有部分差異，原因可能是抽樣量不同、采用的測定儀器和試劑種類或地域差異等。本研究將GDF15和AFP聯合作ROC曲線，結果顯示曲線下面積為0.816，大于單項檢測結果，故認為聯合檢測的性能優于單項指標檢測。

綜上所述，GDF15和AFP均可作為HCC診斷的有效指標，且聯合檢測可以進一步提高HCC的診斷效能，對臨床診斷有重要的參考價值。