男性HIV/AIDS患者中HIV病毒載量、CD4+T淋巴細胞數目與CMV感染的相關性

金瑋韻，何太雯，李 駿

(1.上海市第六人民醫院金山分院 血液腫瘤科，上海201599；2.上海市公共衛生臨床中心)

獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)是一種危害極大的傳染病[1]，由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起，主要表現為體內CD4+T細胞數量減少，機體免疫力降低，免疫細胞亞群異常活化，誘導器官或系統損傷，最終由于繼發感染或腫瘤導致患者死亡[2-4]。巨細胞病毒(CMV)感染是一種典型的繼發性感染[5]。CMV屬于皰疹病毒，是最常見的感染病毒，對正常人無顯著影響，但對免疫功能缺陷者會造成嚴重的后果。如器官移植后免疫抑制劑的使用或是HIV入侵宿主免疫系統，都會使機體免疫系統受到抑制，此時人體內的CMV被再次激活，從而導致一系列的癥狀，嚴重者可導致死亡[6]。我們旨在探究AIDS合并CMV感染的男性患者中CD4+T細胞數目變化與CMV感染和HIV病毒載量是否具有相關性，以及CMV感染在AIDS中的意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

在我院就診或在我院治療的125例男性HIV/AIDS患者，通過ELISA檢測其CMV-IgM表達水平，核酸序列性擴增(NASBA)方法檢測HIV病毒載量和利用流式細胞術對患者血細胞CD4+T細胞計數。根據HIV病毒載量、CMV-IgM表達水平(陰性與陽性)、CD4+T細胞數目分布的不同區間(<50、50-200、>200)進行分組，運用統計學方法分析其差異。

1.2 HIV病毒載量和CMV-IgM陽性率的測定

取病人靜脈血5 ml，1 000 g室溫離心10 min分離血細胞和血清，將血清分裝，置于-80℃冰箱保存。之后按照隨試劑盒附帶的說明書操作，測定血清中CMV-IgM的水平。ELISA試劑盒購自R&D公司，酶標分析儀：Rayto RT-6100。測量HIV患者病毒載量采用NASBA方法，檢測試劑及病毒載量儀均購買于生物酶里埃公司，并嚴格按照說明書進行。

1.3 CD4+T細胞的數量分布測定

取病人靜脈血5 ml，2倍體積PBS稀釋后密度梯度離心法離心，獲取病人的外周血單核細胞(PBMC)，流式緩沖液(2 mM EDTA、0.2%BSA的PBS溶液)洗滌2次后單染CD4細胞表面標志物，之后洗滌離心，上機檢測CD4+T細胞的數量，并計算每微升血液中所含CD4+T細胞的個數。抗體和流式細胞儀均為BD公司產品。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 CMV感染與CD4+T細胞數目分布的差異分析

對125例男性HIV/AIDS患者的血清CMV-IgM進行檢驗，經過分析CMV-IgM陽性有69例，CMV-IgM陰性為56例，CMV-IgM陽性率為55.20%。對CMV感染患者的CD4+T細胞分布情況進行統計分析，其中CMV-IgM陽性患者的CD4+T細胞計數為(90.37±126.26),CMV-IgM陰性患者的CD4+T細胞計數為(120.73±120.74)，對兩者進行顯著差異分析，CMV-IgM陰性和陽性患者的CD4+細胞分布情況不存在顯著性差異(P=0.22)，結果如表1。

表1 CMV感染的CD4+ T細胞分布及差異顯著分析

2.2 男性HIV/AIDS患者的HIV病毒載量與CD4+T細胞數目相關性分析

從125名男性HIV/AIDS患者中隨機抽取48名患者進行HIV病毒載量測定并采用SPSS20.0軟件分析HIV病毒載量log值與CD4+T細胞數的相關性，分析結果發現，患者HIV病毒載量與CD4+T細胞數呈低度負相關(r=-0.288;P<0.05)，如表2所示。兩者所擬合的線性回歸方程具有統計學意義，回歸方程為y=-6.9156x+175.29，結果如圖1所示。

表2 HIV病毒載量與CD4+T淋巴細胞數相關分析

圖1 48例男性HIV/AIDS患者的HIV病毒載量與CD4+T細胞線性回歸分析

2.3 CD4+T細胞數目與CMV感染率的相關性分析

經統計分析發現，當在CD4+T細胞小于50個/μl，CMV陽性為34例，陽性率為61.82%；在CD4+T細胞數為50-200個/μl范圍時，患者CMV感染情況并無較大差異，陽性率為51.61%；CD4+T細胞數目大于200個/μl的患者，CMV感染陽性率為55.17%，經SPSS 20進行卡方分析，發現差異無生物學統計意義(χ2=1.202，P>0.05)。見表3。

表3 125例男性HIV/AID患者CD4+ T細胞計數與CMV-IgM陽性的比較

3 討論

HIV病毒于1981年在美國首次發現，后在世界范圍內迅猛傳播，嚴重威脅人類的健康和社會的發展[7]。HIV導致免疫系統CD4+T細胞缺陷的原因大概有以下三條[8]：一，HIV病毒侵入人體后，以CD4+T細胞為宿主細胞，在CD4+T細胞內迅猛繁殖，破壞細胞的內穩態，直接導致細胞死亡[9]；二，HIV侵染的CD4+T細胞后CD4+T細胞表達HIV抗原gp120，gp120與未感染的CD4+T細胞結合，改變了其通透性，誘導細胞溶解[10]；三，gp120作為CD8+T細胞的靶分子，誘導CD8+T細胞攻擊CD4+T細胞，導致CD4+T淋巴細胞的死亡[11]。本研究分析了患者中HIV病毒載量與CD4+T細胞數量(單位：個/微升)的相關性，結果發現HIV病毒載量與CD4+T細胞數呈顯著性低度負相關，說明兩者間存在密切關系。CD4+T細胞是人體免疫反應的中心細胞也是HIV病毒主要的靶細胞。在HIV/AID患者中，隨著病毒載量的不斷增加，人體免疫系統受損程度也不斷增加，其中最主要的表現方式為：CD4+T細胞數目的不斷減少。因此說明，CD4+T細胞計數是直觀反映HIV感染患者免疫系統損傷狀況最重要最直觀的指標。HIV病毒載量與CD4+T細胞數相關性分析結果為觀察和了解HIV/AIDS病人感染程度提供了堅實的理論基礎。

HIV病毒導致人體免疫力低下，但并不是直接導致宿主死亡的原因。由于機體免疫力低下，免疫系統無法及時有效的清除侵入的細菌或是病毒，亦或是機體自身產生的原癌細胞，故AIDS病人晚期常因為繼發感染或是癌癥而死亡。巨細胞病毒感染即為一類典型的繼發感染[5]。巨細胞病毒屬于皰疹病毒，在入侵正常人后，機體的免疫系統做出應答，CMV即進入潛伏期。但當宿主感染HIV病毒后，CD4+T細胞數量大大減少使得機體免疫系統功能受到抑制，無法對CMV進行有效的清除和做出相應的免疫應答，從而繼發病毒感染[12-15]。

本文針對125名HIV/AIDS患者分析了CMV感染與CD4+T細胞計數分布的關系，由結果可知，CMV-IgM陰性的患者CD4+T細胞數目比CMV-IgM陽性組平均值更高，但不具有顯著性差異(P=0.22)，這可能與患者病例數量過少有關，也可能是因為CMV-IgM陰性患者CD4+T細胞還沒有大量的減少，患者免疫系統功能相對較完善，因此其體內CMV病毒仍處于潛伏期，或是未受到CMV病毒的入侵。且通過CMV感染與CD4+T淋巴細胞數目的差異分析可知CD4+T淋巴細胞的減少和CMV的感染是無關的(P>0.05)。

本研究數據提示AIDS合并CMV感染并不能加重CD4+T細胞的數目，提示臨床診療過程中，CD4+T細胞的數目并不能判斷AIDS合并CMV感染的病情及進展。