中藥配方顆粒與傳統(tǒng)飲片制備四物膏的質(zhì)量對比研究△

曹亞蘭，羅艷萍，羅錦杰

廣東一方制藥有限公司，廣東 佛山 528244

膏方也叫膏滋，是中醫(yī)重要的治療手段之一[1]，傳統(tǒng)的膏滋一般是由中藥飲片經(jīng)過浸、煎、榨、化、濾、熬、收七道工序[2]，耗時24 h以上制備而成，具有占地大、設(shè)備多、高耗能、廢渣廢水排放、周期長等缺點(diǎn)。隨著科技的發(fā)展和人們生活習(xí)慣的改變，傳統(tǒng)膏滋的制作已不能滿足現(xiàn)代人們快捷簡便的需求，需要探索新的膏滋制作原料及工藝。以中藥配方顆粒為原料代替飲片制備膏方，僅需熬制、收膏兩道工序，具有占地小、設(shè)備少、耗能低、零廢渣、周期短等優(yōu)點(diǎn)，滿足了方便快捷的需求。

中藥配方顆粒無法完全取代中藥飲片[4-5]，但中藥配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑的藥理作用相等，甚至強(qiáng)于傳統(tǒng)湯劑[6-7]。陳志偉等[8]比較了四物湯配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑四物湯對骨髓抑制小鼠造血功能的影響，發(fā)現(xiàn)配方顆粒組比傳統(tǒng)湯劑組在紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板以及紅系、巨核系等項差異有統(tǒng)計學(xué)意義，認(rèn)為四物湯配方顆粒組有更顯著的補(bǔ)血作用。李媛等[9]觀察了四物湯傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒對血虛小鼠外周血細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義，四物湯配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)飲片湯劑均具有明顯的補(bǔ)血作用，2種劑型效果基本相當(dāng)。

傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒工藝的本質(zhì)區(qū)別在于傳統(tǒng)湯劑并沒有干燥和制粒工序，因此用配方顆粒制作膏方與傳統(tǒng)飲片膏方存在工藝上的差異，這種差異可能會引起藥效的差異。本研究以四物膏為例，通過感官評價、薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、紅外光譜法(IR)等方法比較不同原料制作四物膏的質(zhì)量，探索中藥配方顆粒與傳統(tǒng)飲片制作四物膏質(zhì)量的一致性，為中藥配方顆粒代替飲片制作膏劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；超聲波處理器(昆山市超聲儀器有限公司)；薄層點(diǎn)樣儀(瑞士卡瑪公司)；Spectrum100紅外光譜儀(鉑金埃爾默)；紫外燈檢測器(瑞士卡瑪公司)；ME-203型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；電熱套(海寧市新華醫(yī)療器械廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；膏方機(jī)(深圳奇潤醫(yī)藥智能科技有限公司)。

1.2 試藥

芍藥苷對照品(批號：110736-201842)、阿魏酸對照品(批號：110773-201614)、毛蕊花糖苷對照品(批號：111530-201713)均購自中國食品藥品檢定研究院；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑為分析純。

熟地黃、當(dāng)歸、川芎、白芍飲片經(jīng)廣東一方制藥有限公司魏梅主任中藥師鑒定為正品，均符合《中華人民共和國藥典》2015年版一部[10]項下規(guī)定。

當(dāng)歸配方顆粒、熟地配方顆粒、川芎配方顆粒、白芍配方顆粒均由廣東一方制藥有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 四物膏樣品制備

2.1.1傳統(tǒng)飲片制備四物膏 參照《中醫(yī)養(yǎng)生保健技術(shù)操作規(guī)范(Ⅱ)膏方》傳統(tǒng)工藝制備。按四物湯處方量取飲片，加適量水冷浸12 h，加水至超過藥面10 cm，煎煮3次，第一次1 h，第二、三次各1.5 h，濾過，合并濾液，再將藥渣充分壓榨，壓榨出的藥汁并入上述濾液，置于中轉(zhuǎn)容器放置冷庫沉淀12 h，用350目篩濾過，濾液濃縮至含水量約為20%時，收膏，分裝，即得。

2.1.2中藥配方顆粒制備四物膏 按四物湯處方比例，將當(dāng)歸配方顆粒、熟地配方顆粒、川芎配方顆粒、白芍配方顆粒置膏方機(jī)中，加水加熱使溶解，濃縮至含水量約為20%時，收膏，分裝，即得(傳統(tǒng)飲片四物膏所用中藥飲片均為生產(chǎn)配方顆粒的同一批飲片)。

2.2 感官評價

取傳統(tǒng)飲片四物膏與中藥配方顆粒四物膏樣品各20 g，分別置白色瓷盤中，觀察性狀外觀，并鼻聞口嘗氣味和滋味。結(jié)果見圖1，中藥配方顆粒四物膏相對于傳統(tǒng)飲片四物膏，苦、辛味略微減弱，并有回甘味，更易被患者接受，在顏色、光澤度、稠度、細(xì)膩、組織狀態(tài)等方面兩者均一致，即色黑如漆，光亮如鏡的濃稠膏狀，口感細(xì)膩，味苦、微辛。

圖1 2種不同工藝制備的四物膏感官評價雷達(dá)對比圖

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1當(dāng)歸薄層色譜鑒別 取傳統(tǒng)飲片四物膏與中藥配方顆粒四物膏樣品各10 g，分別加20 mL水飽和正丁醇振搖提取，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.24 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4∶1∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵和2%鐵氰化鉀(1∶1)的混合液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)，見圖2。

注：1.阿魏酸對照品；2.傳統(tǒng)飲片四物膏；3.中藥配方顆粒四物膏。圖2 2種不同工藝制備的四物膏中阿魏酸的薄層色譜圖

2.3.2白芍薄層色譜鑒別 取2.3.1項下供試品溶液。另取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.48 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，見圖3。

注：1.芍藥苷對照品；2.傳統(tǒng)飲片四物膏；3.中藥配方顆粒四物膏。圖3 2種不同工藝制備的四物膏中芍藥苷的薄層色譜圖

2.3.3熟地黃薄層色譜鑒別 取2.3.1項下供試品溶液。另取毛蕊花糖苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL 含0.27 mg的溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(18∶2∶1.5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254 nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖4。

注：1.毛蕊花糖對照品；2.傳統(tǒng)飲片四物膏；3.中藥配方顆粒四物膏。圖4 2種不同工藝制備的四物膏的毛蕊花糖苷薄層色譜圖

2.4 紅外光譜分析

取適量傳統(tǒng)飲片四物膏與中藥配方顆粒四物膏樣品置真空冷凍干燥機(jī)中凍干，分別取1～2 mg樣品與200 mg溴化鉀碎晶置研缽中，研磨均勻，轉(zhuǎn)移至模具中。將模具放到壓片機(jī)上將樣品壓成薄片，將薄片置紅外光譜儀上，采集紅外光譜圖[11]。傳統(tǒng)飲片四物膏和中藥配方顆粒四物膏紅外光譜圖的r為0.989 9，見圖5。

圖5 2種不同工藝制備的四物膏紅外光譜對比圖

2.5 含量測定

2.5.1對照品溶液的制備 取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL含0.1 mg的溶液，作為芍藥苷對照品溶液。另取阿魏酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL含20 μg的溶液，作為阿魏酸對照品溶液。

2.5.2供試品溶液的制備 分別取傳統(tǒng)飲片四物膏與中藥配方顆粒四物膏樣品各1 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5.3色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈(A)-0.1%醋酸溶液(B)，梯度洗脫(0～30 min，10%～25%A；30～50 min，25%～45%A)；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：10 μL[12]。此條件下，芍藥苷、阿魏酸峰與其他雜質(zhì)峰實(shí)現(xiàn)基線分離，見圖6。

注：A.傳統(tǒng)飲片膏方；B.中藥配方顆粒膏方；1.芍藥苷；2.阿魏酸。圖6 2種不同工藝制備的四物膏的HPLC圖

2.5.4含量測定結(jié)果 分別精密吸取對照品和供試品溶液各10 μL，交叉進(jìn)樣，依法測定，以峰面積外標(biāo)法計算樣品中芍藥苷、阿魏酸的含量，結(jié)果見表1。傳統(tǒng)飲片四物膏與配方顆粒四物膏的芍藥苷含量與阿魏酸含量均無統(tǒng)計學(xué)差異。

表1 2種不同工藝制備的四物膏中芍藥苷和阿魏酸含量測定結(jié)果 mg·g-1

注：同列不同小寫字母表示P<0.05。

3 討論

感官對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中藥配方顆粒四物膏相對于傳統(tǒng)飲片四物膏，苦、辛味略微減弱，并有回甘味，更易被患者接受，在顏色、光澤度、稠度、細(xì)膩、組織狀態(tài)方面均一致，即色黑如漆、光亮如鏡的濃稠膏狀，口感細(xì)膩，味苦、微辛、回甘。

薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，2種工藝的四物膏樣品均可以檢出芍藥苷、阿魏酸及毛蕊花糖苷3個特征性成分，供試品薄層色譜圖中，除了有與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)外，其他位置的斑點(diǎn)數(shù)量和大小也基本相同。含量測定結(jié)果顯示，2種工藝的四物膏樣品的高效液相色譜圖中的各個峰位置及大小相似度非常高，芍藥苷和阿魏酸含量基本相同。紅外吸收光譜圖結(jié)果顯示，2種工藝的四物膏樣品的圖譜特征吸收基本相同，r為0.989 9，說明兩者的物質(zhì)基礎(chǔ)是一致的。陳志偉等[8]實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，四物湯配方顆粒組有更顯著的補(bǔ)血作用，其機(jī)理可能與藥物的質(zhì)量有關(guān)，因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)采用的中藥飲片與中藥配方顆粒的原料并不是同一批次，飲片批次間質(zhì)量的不一致可能會影響藥效的不一致。李媛等[9]實(shí)驗(yàn)結(jié)果為四物湯配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)飲片湯劑補(bǔ)血效果基本相當(dāng)，因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)2種劑型的化學(xué)成分基本一致，所以藥效結(jié)果基本一致。

中藥配方顆粒是按照藥品顆粒劑標(biāo)準(zhǔn)在GMP車間生產(chǎn)，產(chǎn)品不會出現(xiàn)生蟲、跑油、發(fā)霉等現(xiàn)象，質(zhì)量比中藥飲片更穩(wěn)定、更易于貯存。用中藥配方顆粒制備膏方具有省時省力、方便衛(wèi)生等特點(diǎn)。

4 結(jié)論

文獻(xiàn)資料顯示，中藥配方顆粒與傳統(tǒng)飲片湯劑的化學(xué)成分和藥效基本一致[7，9，13]，上述結(jié)果表明，用中藥配方顆粒制備四物膏與傳統(tǒng)飲片制備四物膏的質(zhì)量基本一致，說明用中藥配方顆粒制備膏滋工藝可行，值得推廣和應(yīng)用。隨著配方顆粒四物膏的應(yīng)用，筆者將在后續(xù)的研究中進(jìn)行相關(guān)的藥理藥效學(xué)研究。