分析DLAT 在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和臨床意義

劉振興，張震，高翔

（武安市中醫(yī)院，河北 邯鄲 056300）

0 引言

結(jié)腸癌發(fā)生過(guò)程中具有多種影響因素，具有復(fù)雜的病理機(jī)制，其中主要的高危因素為環(huán)境因素，占比近50%，與高脂肪、高熱量自己低纖維素等飲食習(xí)慣均存在密切關(guān)聯(lián)[1]。在結(jié)腸癌遺傳易感性的機(jī)制中外來(lái)致癌物以及抑癌物質(zhì)代謝相關(guān)酶基因的多態(tài)性具有關(guān)鍵作用。體內(nèi)Ⅱ相解毒酶中的二氫硫辛酸轉(zhuǎn)乙酰基酶（Dihydrolipoyl transacetylase，DLAT）具有重要作用，可促進(jìn)乙酰化反應(yīng)，直接或間接影響體內(nèi)芳香胺類、雜環(huán)胺類等致癌物的活化劑滅活過(guò)程，其活性具有顯著的遺傳多態(tài)性。本項(xiàng)研究旨在研究二氫硫辛酸轉(zhuǎn)乙酰基酶基因多態(tài)性對(duì)結(jié)腸癌易感性的影響，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。分別選取210 例、242 例2017 年3 月至2018 年5 月本院收治的結(jié)腸癌患者以及體檢結(jié)果正常的成人作為研究對(duì)象。上述研究對(duì)象分別分為研究組及常規(guī)組。

1.2 方法

1.2.1 DNA 提取：采用由上海某生物科技公司購(gòu)買的DNA試劑盒提取外周血淋巴細(xì)胞基因DNA。

1.2.2 分析基因型：引物序列由大連某生物科技公司合成，引物序列分別為為5’→3’GGAACAAATTGGACTTGG、5’→3’TCTAGCATGAATCACTCTGC。由上海某生物工程有限公司購(gòu)買PCR 反應(yīng)體系，擴(kuò)增條件為先在95℃溫度下反應(yīng)5 分鐘，再在相同溫度下反應(yīng)60s，改用57℃持續(xù)反應(yīng)1 分鐘，最后在72℃溫度下反應(yīng)90s，重復(fù)35 次，在72℃下反應(yīng)5 分鐘。酶切后置于1.5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)瓊脂糖凝膠中電泳，持續(xù)1 小時(shí)，經(jīng)30 分鐘EB 染色后，置于紫外線燈下觀察。

1.2.3 吸煙情況：研究組具有吸煙史的患者例次為150 例，60 例患者不吸煙；常規(guī)組吸煙例次為140 例，102 例不吸煙。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。研究數(shù)據(jù)錄入SPSS 12.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間基因型分布的差異采用χ 2 檢驗(yàn)。相對(duì)危險(xiǎn)度采用非條件Logistic 回歸分析，P＜0.05 時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DALT 基因型與結(jié)腸癌遺傳易感性關(guān)系。研究組檢查出154 例不同基因型，常規(guī)組共檢出188 例。研究組Wt/M2的頻率遠(yuǎn)高于常規(guī)組，而Wt/M3 基因型頻率遠(yuǎn)低于常規(guī)組，（P＜0.01，P＜0.05），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)比較，兩組的慢速乙酰化基因型頻率差異不明顯，P＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，附表1，表2。

表1 DLAT 基因型與結(jié)腸癌關(guān)系（例）

表2 DLAT 慢速?zèng)]基因型與結(jié)腸癌關(guān)系（例）

2.2 DLAT 基因型與吸煙相關(guān)性。吸煙組DLAT 快速乙酰化型個(gè)體發(fā)生結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)高于不吸煙組，P＞0.05，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，附表3。

表3 DLAT 基因型與吸煙相關(guān)性

3 討論

單個(gè)基因位點(diǎn)對(duì)DLAT 基因多態(tài)性起決定性作用，多以常染色體隱性遺傳形式存在。導(dǎo)致酶活性差異的主要原因的編碼及非編碼區(qū)點(diǎn)發(fā)生突變，繼而對(duì)個(gè)體間由芳香胺進(jìn)行誘導(dǎo)的腫瘤易感性產(chǎn)生影響。根據(jù)DLAT 結(jié)構(gòu)基因限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)的差異，481、590、857 三個(gè)位點(diǎn)的突變是決定DLAT 表型的重要影響因素。Wt、M1、M2、M3 是DLAT的常見(jiàn)多態(tài)，應(yīng)用于快速酶編碼的是Wt。余下三種常見(jiàn)多態(tài)突變型等位基因可采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（PCRRFLP）測(cè)定，基因組成是DLAT 活性的決定性因素。DLAT基因突變對(duì)其表型變化的影響尚未明確，但可確定DLAT 可通過(guò)改變其代謝酶氨基酸序列進(jìn)而達(dá)到降低酶活性的目的。若野生型Wt 等位基因數(shù)量超過(guò)1 個(gè)，則DLAT 表型為快基因型，編碼快代謝酶；若突變型等位基因的數(shù)量超過(guò)2 個(gè)并且不存在野生型等位基因時(shí)，則為慢基因型，編碼慢代謝酶。該基因與Kas 基因突變致癌的機(jī)制相同[2]。Viswanathan VS[3]以結(jié)腸息肉患者為切入點(diǎn)進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，基因型Wt/Wt 對(duì)結(jié)腸癌發(fā)病具有一定的保護(hù)作用。芳香胺類化合物在煙草中含量較高，DLAT 對(duì)該類致癌物具有一定程度的解毒效果，由吸煙引發(fā)的癌癥遺傳易感性于DLAT 存在密切關(guān)聯(lián)。DLAT 酶代謝酶對(duì)煙葉中的芳香胺類、雜環(huán)胺類進(jìn)行激活后，提高起與腸黏膜上皮細(xì)胞DNA 的結(jié)合率，促進(jìn)DNA 加成物生成率，損傷DNA 并引發(fā)染色體畸變，增加癌癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。BeckermannKE[4]研究發(fā)現(xiàn)，攜帶DLAT 慢基因型的人發(fā)生肺癌的幾率更高，吸煙量是影響危險(xiǎn)程度的關(guān)鍵因素。該學(xué)者研究指出，DLAT 慢乙酰化型吸煙者患肺癌的危險(xiǎn)性顯著上升。多數(shù)腫瘤發(fā)生的內(nèi)在遺傳易感因子均為慢乙酰化基因型，是影響環(huán)境致癌的重要因素[5-6]。本項(xiàng)研究數(shù)據(jù)顯示，研究組、常規(guī)組攜帶慢乙酰化基因型的個(gè)體頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，證實(shí)單獨(dú)存在的慢乙酰化基因型對(duì)結(jié)腸癌發(fā)病無(wú)明顯影響；研究組長(zhǎng)期吸煙的快乙酰化患者較常規(guī)組發(fā)生結(jié)腸癌的危險(xiǎn)性更高，證實(shí)長(zhǎng)期大劑量吸煙是影響結(jié)腸癌發(fā)生率的外在環(huán)境因素之一，引發(fā)結(jié)腸癌發(fā)生的內(nèi)在遺傳因素包括體內(nèi)存在DLAT 快乙酰化基因型。

總之，明確DLAT 基因多態(tài)性與結(jié)腸癌易感性間的具體聯(lián)系，對(duì)結(jié)腸癌防治起關(guān)鍵作用。通過(guò)檢測(cè)DLAT 基因多態(tài)性，可篩選出結(jié)腸癌高危人群，降低與環(huán)境致癌物的接觸幾率，進(jìn)而降低腫瘤的發(fā)生率。