黃柏化學成分部位的提取分離及活性研究

候海玲，劉彬

（烏海市檢驗檢測中心烏海櫻花醫院，內蒙古 烏海 016000）

0 引言

黃柏為蕓香科植物黃皮樹或黃檗的干燥樹皮。前者習稱“川黃柏”，后者習稱“關黃柏”，為臨床常用中藥之一，具有清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱之功效[1]?，F有文獻資料表明，黃柏所含的主要有效成分為小檗堿（Berberine）[2]。傳統提取分離黃柏的方法有酸水法[3]、石灰乳法[4]和醇提法[5]等。在這些方法中，或者在提取過程中破壞了化學成分，或者操作繁瑣，本文對傳統方法進行改進與創新，避免了高溫加熱對黃柏有效成分的破壞。

1 儀器與試藥

1.1 儀器。TDL5M 臺式大容量冷凍離心機（湖南湘儀儀器有限責任公司）；SPX--150B--Z 型生化培養箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）；LGI---18 型冷凍干燥機（北京松原華興科技發展有限公司制造）；冷凍干燥機.FD-1A-50（北京博醫康實驗儀器有限公司）；FA1004 型上皿電子天平（中華人民共和國上海精科天平）；UV-2600 紫外可見分光光度計（島津）。

1.2 試藥。黃柏（購于中蒙藥材批發市場）；細菌（中國食品藥品檢定研究院）。

2 方法和結果

2.1 黃柏化學成分部位的提取分離。首先將黃柏粉碎成粉末，以冷浸的方法水提，冷凍干燥，制成水提干粉[6]。然后將剩余的藥渣用70%乙醇重復提取兩次，冷凍干燥制成干粉[7-8]?；亓鲿r水浴溫度不得超過50℃，使用的是10000 分子的透析膜。提取工藝路線見圖1。

2.2 黃柏不同提取部位的成分鑒別

2.2.1 吸光度值的測定：將黃柏的四種不同部位的提取物分別配制成濃度為0.02 mg/mL 的溶液，用微孔濾器過濾后，在波長為230-350 nm 范圍內測紫外吸光度值，用蒸餾水做空白[9-10]。

結果表明，黃柏提取物中主要含有生物堿類。四種不同提取物紫外吸收峰（所測波長范圍為230-350 nm）均有兩個，且吸收峰位置相近，第一個吸收峰位置在280 nm 左右，第二個吸收峰位置在330 nm 左右，可見在同樣條件下，黃柏醇提膜外的吸光度值高于其它三種提取物的吸光度值，說明同樣條件下，黃柏醇提膜外的提取物比其他三種提取物所含的生物堿含量高。

圖1 黃柏不同部位的提取分離圖

2.2.2 薄層鑒別實驗

①對照品溶液制備：精密稱取鹽酸小檗堿對照品10 mg，加水溶解制成每1 mL 含小檗堿1 mg 的溶液。

②薄層鑒別：取黃柏的四個不同部位的提取物及對照品溶液各5 μl，照薄層色譜法（中國藥典2015 版四部0502）點于5‰羧甲基纖維素鈉溶液制備的硅膠GF254 薄層板上，對以下幾種不同展開系統進行了比較：①氯仿-甲醇-水（6:4:1），②正丁醇-醋酸-水（4:1:5），③苯-冰醋酸-甲醇（30:1:3），④醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10:7:1:1），⑤苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液（12:6:3:3:1）。結果以系統②展開效果較好，因此選擇此展開劑展開，取出，晾干，波長365 nm 的紫外燈下觀察，四種不同部位提取物在與對照品相同位置處有顏色相同的熒光斑點。

結果表明黃柏的不同部位提取物中都含有小檗堿，但各提取物中小檗堿含量不等。

2.3 黃柏不同提取部位的抑菌試驗研究。采用鋼管法對黃柏的不同提取部位進行抑菌實驗，采用的菌種為大腸桿菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌、白色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌[11]。

實驗方法：配制培養基、營養瓊脂培養基，待溶解后，15P20 高壓滅菌，置于已消毒好的培養皿中，每一塊板加入的培養基為18-20 mL，待培養基完全凝固后，采用劃線法接種已培養好的菌種，將高壓過的小鋼杯放入培養皿中，將已提取的黃柏四個不同部位的提取物分別配成20 mg/mL 的溶液，把已稀釋好的藥液加入到鋼杯中，每一只鋼杯加入250 μl 黃柏提取物溶液，然后將培養皿置于37℃溫箱中培養24 h，觀察抑菌圈的直徑，抑菌圈的直徑用標長尺測量，直徑的單位以mm 計量，結果見表1。

結果表明，黃柏水提膜內對綠膿桿菌抑菌效果最好，黃柏水提膜外對綠膿桿菌及白色葡萄球菌抑菌效果相當且最好，抑菌圈達23 mm，黃柏醇提膜內對痢疾桿菌和綠膿桿菌效果最好，黃柏水提膜外對綠膿桿菌及白色葡萄球菌抑菌效果最好，可見黃柏有很好的抑菌能力，對不同菌的感染，可以使用不同提取部位的提取物，做抑菌藥物使用。同一種藥物不同提取物對不同菌株作用不同，表明不同提取方法提取的活性有效成分有所不同。

表1 黃柏四種提取物對6 種菌的抑菌

3 討論

3.1 采用低溫提取的優點。根據植物的本質，絕大部分的物質都是水解物，如水解植物蛋白、多肽、糖等，這些物質幾乎都是人類所需的，易吸收，尤其是肽類的物質，更是受歡迎的，既穩定活性又好。因此采用冷浸提取的方法，不僅破壞植物細胞壁，把植物細胞內的物質浸出來，而且在此做過比較，有些物質加熱后很快被破壞，有些物質加熱出現不可逆的反應，成為膠體物，很難溶解，用有機物才能溶解，但遇到水后還原回去了，這樣的物質進到機體很麻煩。所以采用低溫提取，不破壞物質的成分。

3.2 先水提再醇提的優點。先進行水提，然后再醇提，因先醇提把一些物質給破壞了，有些植物蛋白遇到醇就變性，變成另外一種物質，有的活性被降解，因此我們采用本方法先水提再醇提，這樣物質絕大部分不被破壞，產量高，用量少，活性強。