miR-126和CA125在乳腺癌中的含量及其臨床意義

王 卉 陸蕓瑤 吳立翔 喻 垚 李光新 郭變琴

microRNA(miRNA)具有組織特異性、穩定性等優點，越來越多的miRNA被用來作為癌癥診斷的標志物[1]。研究發現miR-126在胃腸道腫瘤、甲狀腺腫瘤、肺癌等多種腫瘤細胞中表達異常[2]。CA125是用于卵巢癌篩查的腫瘤標志物，許多研究顯示，CA125在其他癌癥及免疫性疾病中也有重要作用[3]。

miR-126和CA125在乳腺癌中的研究相對較少，因此本研究檢測了乳腺癌患者腫瘤組織中miR-126的含量及血漿中CA125的含量，同時分析其與患者臨床病理特征間的關系，希望這些新的標志物可以為乳腺癌的診斷和治療提供依據。

資料與方法

1.臨床資料:收集重慶大學附屬腫瘤醫院2017年1月～2018年1月間凍存的石蠟包埋乳腺癌組織標本26例，所有患者均經病理科醫生確診，術前均未接受放療、化療，且臨床病理資料完整,患者平均年齡52.08±7.92歲。根據美國癌癥聯合會(AJCC)和國際抗癌聯盟(UICC)有關乳腺癌的TNM分期標準：Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例；有淋巴結轉移者16例，無淋巴結轉移者10例。癌旁組織36例，患者平均年齡 40.89±12.27歲。回顧乳腺癌患者的臨床病理資料，獲得26例患者的血漿CA125檢測結果，隨機抽取同期檢測的健康對照血漿CA125檢測結果39例，平均年齡43.92±15.31歲。本研究經筆者醫院醫學倫理學委員會批準，且所有患者均簽署知情同意書。

2.試劑與儀器:石蠟包埋組織切片miRNA 提取試劑盒購自天根生化科技有限公司，miRNA反轉錄試劑盒、miR-126及內參U6的特異性莖環引物購自美國GeneCopoeia公司，SYBR?Premix Ex Taq 試劑盒購自寶生物工程有限公司，CA125檢測試劑購自德國西門子公司。CFX-Connect熒光定量PCR儀、NanoDrop 1000核酸濃度測定儀、Fresco17 高速冷凍離心機購自美國Thermo公司，ADVIA Centaur CP全自動化學發光免疫分析儀購自德國西門子公司。

3.實驗方法: (1)使用石蠟包埋組織切片miRNA 提取試劑盒提取乳腺癌及癌旁組織石蠟切片中的miRNA。經NanoDrop 1000 核酸濃度測定儀檢測獲得的miRNA的純度及濃度合格后，用miRNA反轉錄試劑盒進行反轉錄。反轉錄產物按照 SYBR?Premix Ex Taq 試劑盒提供的方法檢測組織中miR-126的含量。上述實驗進行3次重復。(2)按照西門子ADVIA Centaur CP全自動化學發光免疫儀使用說明，檢測乳腺癌患者及健康對照血漿中CA125的含量。

結 果

1.miR-126在乳腺癌患者癌旁組織和腫瘤組織中的含量:實時熒光定量PCR檢測26例乳腺癌患者腫瘤組織及36例癌旁組織中miR-126的含量，結果顯示二者間miR-126的含量比較差異無統計學意義(P=0.139,圖1)。

圖1 miR-126在乳腺癌患者癌旁組織和腫瘤組織中的水平

2.CA125在健康對照及乳腺癌患者血漿中的含量:應用化學發光免疫法檢測26例乳腺癌患者化療前及39例健康對照血漿中CA125的含量，與對照組比較，乳腺癌患者血漿中CA125含量明顯升高(P=0.012,圖2)。

圖2 CA125在健康對照及乳腺癌患者血漿中的含量

3.乳腺癌患者化療前血漿中CA125的含量與臨床病理特征間的關系:以乳腺癌患者血漿中CA125含量的中位數為分界點，分為高含量組和低含量組。乳腺癌患者化療前血漿中CA125的含量與患者區域淋巴結轉移情況有關(P=0.010)，與年齡(P=0.560)、腫瘤直徑(P=0.226)、臨床分期(P=0.086)等無關(表1)。

表1 乳腺癌患者化療前血漿中CA125的含量與臨床病理特征間的關系

4.CA125在乳腺癌患者化療前血漿中不同區域淋巴結臨床分類中的含量:為了進一步分析CA125的含量與乳腺癌患者區域淋巴結臨床分類的關系(N0：無區域淋巴結轉移；N1：同側腋窩淋巴結轉移，可移動;N2：同側腋窩淋巴結轉移,固定或融合；N3：同側鎖骨下/上淋巴結轉移)，筆者分析了不同區域淋巴結臨床分類中CA125的含量，結果顯示N2組CA125的含量比N0組增多，差異有統計學意義(P=0.017);其他組CA125含量兩兩比較，差異均無統計學意義(圖3)。

圖3 CA125在乳腺癌患者化療前不同區域淋巴結臨床分類中的含量

討 論

乳腺癌是世界女性最常見的惡性腫瘤之一，盡管有許多治療乳腺癌的方法，它仍是導致女性癌癥死亡的主要原因[4,5]。許多乳腺癌患者在初診時已到中晚期，這是導致乳腺癌復發和治療失敗的主要原因。因此探究一種簡單、經濟成本低且能預測乳腺癌發生、發展情況的腫瘤標志物具有重要的意義。

CA125又稱黏蛋白16或MUC16,是一種黏蛋白家族的膜糖蛋白，由MUC16基因編碼[6，7]。CA125最早是在卵巢癌的小鼠模型中發現的，研究發現人類的胸膜、腹膜間皮細胞、乳腺導管、細支氣管上皮、子宮內膜、輸卵管及卵巢等均會表達CA125。正常生理狀態下(如女性月經期或孕期)僅有極少量的CA125進入血液循環中[1]。臨床上CA125常被用來篩查和診斷卵巢癌，也有少量研究探討了CA125作為腫瘤標志物在乳腺癌的診斷、監測與預后中的作用[8]。本研究中，乳腺癌患者血漿中的CA125含量明顯高于健康對照。這一結果與多項研究相符。Zhang等[9]分析比較了65例乳腺癌患者和50例健康對照血清中CA125的含量，結果顯示乳腺癌患者血清中CA125含量明顯高于健康對照。另有研究報道，151例乳腺癌患者的血清CA125水平顯著高于180例健康對照[8]。筆者的另一個發現是CA125的含量與患者區域淋巴結臨床分類相關，這與Zhang等[9]的研究結果相一致。而且Fang等[8]研究也發現高表達CA125的乳腺癌患者中有54.3%存在淋巴結轉移。伴隨淋巴結轉移的乳腺癌患者CA125升高的原因可能是腫瘤細胞轉移至淋巴結的過程中浸潤至胸膜、腹膜間皮細胞、乳腺導管等，機體應激性分泌了大量的CA125[10]。

miR-126在胃腸道腫瘤、生殖系統腫瘤及肺癌等中，可通過對PI3K、KRAS、EGFL7、CRK等基因的調節，參與癌細胞的增殖，遷移和侵襲[2]。乳腺癌中，miR-126參與癌細胞的增殖與轉移[11，12]。Wang等[13]研究表明，與癌旁組織比較，乳腺癌組織中miR-126的表達下調。筆者的研究結果發現，乳腺癌患者腫瘤組織和癌旁組織中miR-126的含量比較差異無統計學意義，可能是由于本研究的樣本量偏少，并且收集的乳腺癌患者合并了不同的基礎疾病，如高血壓、糖尿病等，不同疾病狀態可能對miR-126的表達有一定的影響。

乳腺癌的轉移是導致乳腺癌患者死亡最重要的原因之一,多數患者在轉移后5～10年死亡[14～16]。轉移性乳腺癌的早期發現與治療一直是研究者努力攻克的難題。CA125在乳腺癌淋巴結轉移的患者中表達普遍升高，但其預警作用還需開展深入研究。