流式細胞術檢測HLA-B27抗原的表達及臨床意義

廖德權，成捷，許藍月

（廣東醫科大學附屬醫院檢驗科，廣東 湛江 524000）

HLA-B27屬于具有遺傳多態性的等位基因，和大部分疾病存在關系，特別是脊椎關節系統疾病，其中包含反應性關節炎、強制性脊柱炎以及Reiter氏綜合征等[1]。此次研究探討流式細胞術檢測HLA-B27抗原的表達及臨床意義，就相關內容進行報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 抽取1155例門診和住院腰痛患者作為此次研究對象，選擇流式細胞儀檢測患者HLA-B27抗原表達，病例選擇時間為2018年6月-2019年5月，男性患者705例，女性患者450例，年齡最大者為75歲，年齡最小者為11歲，平均年齡為（41.6±3.3）歲。

1.2 方法 設備儀器：選擇Beckman-Coulter NAVIO流式細胞儀，Beckman-Coulter原裝HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE雙熒光標記抗體，OptiLyse C溶血素。

操作：選擇K3-EDTA抗凝真空管對患者進行標本收集，抽取1 mL外周血，白細胞濃度調整范圍為4.0×109-10.0×109/L。選擇患者全血100 μL，將HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE雙熒光標記抗體20 μL加入其中，而后進行混勻，室內需要避光放置15-20 min，然后將0.5ml溶血素加入進行混勻，室內需要避光放置15-20 min，然后加入PBS 2 mL進行洗滌，洗滌次數為2次。上機檢測獲取的15000個細胞。

1.3 結果判斷[2]采用Beckman-Coulter公司數據分析軟件對數據實施分析，設門為淋巴細胞，對門內細胞抗HLAB27-FITC和抗HLA-B7-PE信號熒光強度進行檢測。測定HLA-B7陰性而HLA-B27陽性細胞的平均熒光強度和所占百分比，平均熒光強度大于8.0或所占百分比≥90%即可判斷為HLA-B27陽性。

2 結果

2.1 HLA-B27檢測結果 通過檢測后可知705例男性患者中209例結果表現為陽性，比例為18.10%，450例女性患者中70例結果表現為陽性，比例為6.06%，1155例患者中279例陽性，比例為24.16%，相關數據見表1。

表1 分析HLA-B27檢測結果

2.2 陽性患者年齡以及性別情況 由表2可知，10-20歲患者49例結果為陽性，陽性率為4.24%，21-30歲患者中100例結果為陽性，陽性率為8.66%，31-40歲患者中49例結果為陽性，陽性率為4.24%，41-50歲患者中32例結果為陽性，陽性率為2.77%，51-60歲患者中33例結果為陽性，陽性率為2.86%，61-70歲患者中9例結果為陽性，陽性率為0.78%，71歲以上患者中7例結果為陽性，陽性率為0.61%。

3 討論

HLA（人類白細胞抗原）為機體中抗原系統，具有高度多態性，廣泛應用于器官移植、輸血等方面，和多種疾病具有一定的關系，HLA-B27基因為MHCI類分子的等位基因，臨床研究證實此基因和強直性脊柱炎等疾病存在關系[3]。強直性脊柱炎主要患病人群為青壯年男性，腰腿疼為主要癥狀表現，部分患者會出現髖關節疼痛以及骶髂關節疼痛，通常伴隨晨僵，疾病引發因素并不確定。因為此病和其他疾病具有相似的癥狀，提升了診斷困難程度[4]。為此需要對HLA-B27進行正確檢測，血清學分析方法是檢測HLA-B27的常規方法，但是會因為細胞純度、單價抗血清效價以及補體差異等因素產生影響，影響實驗操作以及穩定性。選擇流式細胞術檢測并不需要對淋巴細胞進行分離，操作方便，選擇單克隆抗HLA-B27和已知HLA-B27亞型進行結合，可將靈敏度提升[5]。同時和血清學分型進行對比可知，此檢查方法省時，且具有良好的特異性以及靈敏度，當患者進行臨床檢查可疑為強制性脊柱炎，可將HLA-B27作為診斷主要指標[6]。本次研究經過分析后可知，1155例患者中279例陽性，比例為24.16%，其中男性患者209例，女性患者70例；年齡分布可知，10-20歲患者陽性率為4.24%，21-30歲患者陽性率為8.66%，31-40歲患者陽性率為4.24%，41-50歲患者陽性率為2.77%，51-60歲患者陽性率為2.86%，61-70歲患者陽性率為0.78%，71歲以上患者陽性率為0.61%。

表2 分析陽性患者年齡以及性別情況

綜上所述，臨床對細胞表達HLA-B27抗原進行分析檢測過程中，流式細胞術可將其他細胞干擾進行排除，能夠對結果進行客觀分析，以免出現主觀性判斷，同時檢測方法操作簡單，具有良好的穩定性以及重復性，具有臨床應用價值。