精漿8-OHdG和GSTs水平與男性不育的相關性研究

安小紅,樊 萍

(1.渭南市蒲城縣醫院檢驗科，陜西渭南 715500；2.咸陽市第一人民醫院檢驗科，陜西咸陽 712000)

男性不育被定義為一對夫婦在無保護、有規律的性生活一年后無法懷孕。據統計全球大約有10%～15%的夫婦患有不孕不育，而男性不育的發生率約占50%[1]。研究表明，機體氧化應激作用的增強是導致男性不育的重要原因之一[2]。目前的證據表明谷胱甘肽硫轉移酶(glutathioneS-transferases,GSTs)和8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxydeoxyguanosine, 8-OHdG)通過調節機體的氧化應激能力參與男性不育的病理過程[1,3]。本研究通過分析35例不育男性患者精漿8-OHdG和GSTs水平的變化，旨在揭示兩指標在男性不育發病機制中的作用，進而為該疾病的診治提供參考依據。

1 材料和方法

1.1 研究對象 收集2017年5月～2019年5月期間在陜西咸陽市第一人民醫院和渭南市蒲城縣醫院就診的35例不育男性患者(不育組)的精液標本進行分析。年齡為26～45歲,平均年齡32.15±5.07歲；婚齡1～10年，平均婚齡4.39±3.28年。其中少精癥患者 11例，弱精癥患者21例，無精癥患者3例。所有患者夫妻性生活正常、未采取避孕措施、身體健康、排除女方因素(經婦科檢查、輸卵管通暢試驗、B超及內分泌檢查等)。收集同期婚后已生育的26例健康男性精液標本作為對照組，年齡30.87±6.19歲,平均31.37±5.19歲;婚齡1～9年，平均婚齡4.12±3.39年。對照組精液質量分析正常。所有受試者均排除泌尿、生殖、造血系統及內分泌疾病，以及其他慢性疾病、隱睪癥、性功能低下、放療和化療等。不育組和對照組的年齡和婚齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。樣本的采集過程及信息使用均經過陜西咸陽市第一人民醫院和蒲城縣醫院醫學倫理委員會批準。本研究已得到所有研究對象的知情同意。

1.2 試劑和儀器 采用計算機輔助精液分析系統(偉力CASA 900)分析精子密度和精子活動力，采用巴氏染色法分析精子形態，參照 WHO 標準評判結果，計算精子畸形率。精漿8-OHdG和GSTs水平采用酶聯免疫吸附法測定，分別采用武漢艾美捷科技有限公司和上海將來實業股份有限公司的試劑盒,儀器采用雷杜 RT-2100C 酶標自動分析儀。參考范圍(男性)：血清睪酮(testosterone，T)：13.90～29.23 nmol/ml，卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，FSH)：1.50 ～12.40mIu/ml，黃 體 生 成 素(luteinizing hormone，LH)：1.70～8.60 mIu/ml.

1.3 方法

1.3.1 精液質量分析：患者禁欲3～7天，手淫方法收集精液標本，記錄精液總量。在37 ℃待精液液化后，分析精子密度、精子活動力及精子畸形率。所有精液實驗按照 2001 年 WHO《人類精液及精子-宮頸黏液相互作用實驗室檢驗手冊》中的檢驗方法執行。精子活動力分4級：a 級：精子快速前向運動；b 級：精子慢速或呆滯的前向運動；c 級：精子非前向運動；D 級：精子不動。精子密度<20×106/ml,或精子密度>20×106/ml，而a級精子<25%，且a+b級精子<50%為少弱精癥。

1.3.2 血樣采集：所有研究對象在安靜狀態下空腹被抽取靜脈血 3 ml，分離血清，-20℃保存，用于檢測血清T,FSH及LH水平.

2 結果

2.1 男性不育患者精液質量分析 見表1。與對照組比較，不育組的精子密度和精子活力顯著降低，而精子畸形率則顯著增高，差異均有統計學意義(均P<0.01)。不育組和對照組的精液總量比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 男性不育患者血清生殖激素水平分析 見表2。與對照組比較，不育組的血清T水平顯著降低，而FSH及LH水平則顯著增高，差異均有統計學意義(均P<0.01)。

2.3 男性不育患者精漿8-OHdG及GSTs水平分析 見表2。與對照組比較，不育組精漿8-OHdG水平顯著增高，而GSTs水平則顯著降低，差異均有統計學意義(均P<0.01)。

表1 男性不育患者精液質量分析

表2 男性不育患者血清生殖激素及精漿8-OHdG和GSTs水平分析

2.4 相關性分析 精漿8-OHdG水平與精子密度、精子活力和血清T水平呈負相關性，而與精子畸形率、血清FSH及LH水平呈正相關性(r=-0.823，-0.819，-0.798，0.767，0.782，0.807，均P< 0.01).精漿GSTs水平與精子密度、精子活力和T水平有正相關性，而與精子畸形率、血清FSH及LH水平呈負相關性(r=0.857，0.842，0.819，-0.838，-0.802，-0.814，均P< 0.01)。

3 討論

研究表明少弱精子癥是男性不育的常見原因，其特點是精子數量少或精子運動能力差。現在的證據表明，氧化應激在精子正常的生理活動中起著重要作用[2]。氧化應激作用增強會導致DNA損傷、精子運動能力減弱及精子畸形等[3-4]。研究認為8-OHdG水平的變化能夠反映機體的氧化應激反應及氧自由基的生成程度[5]。8-OHdG被認為是DNA氧化損傷的標志物。精漿中8-OHdG水平增高可以影響精子的運動，并可能導致畸形精子數量的增加[3]。研究顯示8-OHdG可破壞精子質膜的完整性，影響精子的生成。8-OHdG水平增高的患者少弱精子癥的發病率明顯增高。8-OHdG 水平與精子畸形率呈正相關性，而與精子活動力有負相關性[5]。本研究的結果也印證了上述文獻關于8-OHdG的報道。說明8-OHdG在評估男性精子質量方面有較高的價值。劉旭晨等[6]分析111例不育男性精液標本的結果顯示，高水平的8-OHdG與精子碎片率的增高及精子濃度的下降相關。本研究的結果與劉旭晨等[6]的觀點相符。提示8-OHdG可能與男性不孕的病理過程密切相關。目前國內關于 8-OHdG 與男性不育相關性的報道較少，其在男性不育發病機制中的作用還需要進一步地探索。

GSTs是一種重要的抗氧化酶。低水平的GSTs可能促進氧化應激對機體的傷害作用。然而，關于GSTs在男性精子防御機制中的生物學作用的數據還有限[7-8]。研究表明，人類睪丸和精漿中存在高水平的GSTs，這有助于保護精子免受氧化應激的損傷。HU等[1]的分析顯示在非阻塞性無精子癥和少弱精子癥的中國人群中，GSTs基因多態性與男性不育顯著相關，其中GSTM1/GSTT1的無效基因型可能增加中國男性不育個體的敏感性。金鑫等[7]研究認為精漿GSTs水平與精子活動力有正相關性，而與精子畸形率有負相關性。這與本研究結果一致。推測男性不育機制可能與精漿中GSTs 水平降低有關。

近年來的研究認為，生殖激素可以促進男性精子的生成。FSH及LH水平增高和T水平下降與生精功能的損害程度有正相關性[9]。本研究分析顯示精漿8-OHdG水平與血清T水平有負相關性，而與FSH及LH水平有正相關性。GSTs水平與血清T水平有正相關性，而與FSH及LH水平有負相關性，推測異常的8-OHdG和GSTs水平可能影響精子的生成，進而導致男性不育。

綜上所述，8-OHdG和GSTs可能參與男性不育的病理過程。檢測精漿8-OHdG和GSTs水平可以為男性不育的診治提供依據。